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雷静: 作品数：11 被引量：24H指数：2; 供职机构：南京农业大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生更多>>

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猪圆环病毒2型与猪圆环病毒相关性系统疾病的回顾及展望被引量：20: 2015年; 猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)引起猪的免疫抑制,是猪圆环病毒相关性系统疾病(PCV2-systemic disease,PCV2-SD)的主要病原,给养猪业带来了巨大的经济损失。文中从PCV2的进化历程、编码蛋白、对免疫系统的影响及技术防控四方面入手,对PCV2及PCV2-SD进行了全面回顾与展望。; 顾金燕邢刚雷静刘斐周继勇; 关键词：PCV2 进化历程编码蛋白

检测禽流感病毒亚型的荧光定量PCR引物、探针和试剂盒及检测方法: 本发明提供了检测H5、H7和H9亚型流感病毒的多重荧光定量PCR引物和探针，所述引物结合探针能采用多重荧光定量PCR同时检测H5、H7和H9亚型流感病毒具体为哪种亚型，不同亚型的引物之间互相没有影响，并且特异性强，检测灵...; 周继勇闫丽萍刘俊丽雷静粟硕胡伯里

禽病毒病蛋白芯片抗体检测试剂盒及其制备方法和应用: 本发明公开了禽病毒病蛋白芯片抗体检测试剂盒及其制备方法和应用。该试剂盒包括含有抗原的蛋白芯片反应板，阳性对照样品，阴性对照样品。所述的抗原为以下(a)～(c)中的至少一种：(a)包含重组AIV核蛋白(AIV‑NP)、ND...; 周继勇闫丽萍胡建华肖倩雷静; 文献传递

一种用于同时检测三种禽病毒病的高通量试剂盒及其检测方法和应用: 本发明公开一种用于检测三种禽病毒病的高通量试剂盒及其检测方法和应用，本发明提供的基因芯片方法检测NDV、IBV和AIV及其H5、H7、H9亚型流感病毒核酸检测试剂盒，其检测更加快速、敏感性更高、操作简便。本研究开发的是N...; 周继勇闫丽萍肖倩雷静; 文献传递

一种利用全内反射荧光显微镜检测单个生物标识物的方法: 本发明公开了一种利用全内反射荧光显微镜检测生物标识物的方法。该方法利用生物素‑亲和素连接以及抗原抗体反应或核酸分子与探针的反应，依靠全内反射的荧光激发方式激发固定在载体表面100nm范围内的荧光标记的检测分子，通过荧光显...; 刘斐吴诚诚周继勇王国亚邢刚雷静; 文献传递

RNA解螺旋酶A表达系统的探究及其动力学研究: 2016年; [目的]RNA解螺旋酶A（RNA helicase A,RHA）参与许多细胞生物学过程中,并能促进艾滋病病毒1型（HIV-1）等一些病毒的复制,本试验旨在探究温度、p H值对RHA的动力学影响。[方法]利用PCR扩增全长RHA基因,构建重组载体p ET-28a-RHA和p Cold-Ⅰ-RHA,分别转化至BL21 star（DE3）和BL21、Rosetta2菌株中,加IPTG分别在28℃和15℃中诱导表达。将全长RHA基因重组到p Fast Bac Dual载体中,然后将重组穿梭载体转化到含有杆状病毒基因组的DH10Bac感受态细胞中,通过转座作用,将RHA基因整合到杆状病毒基因组中。提取重组杆状病毒基因组（重组杆粒DNA）,将重组杆粒DNA转染到sf9细胞中,收集细胞,纯化蛋白,可以得到完整的RHA。建立体外解螺旋反应体系,改变温度、p H值,检测RHA活性的变化。[结果]完整RHA在BL21、Rosetta2中可微量可溶表达。sf9可以表达有活性的完整RHA。反应温度降低时,解螺旋速率变小,RHA活性降低。p H值在6.5-8.0范围内,随着p H值升高,RHA活性升高;当p H值大于8.0时,RHA活性降低。[结论]完整的RHA在BL21、Rosetta2中可微量表达;有3＇-tailed解旋极性的RHA活性受温度、p H影响较大。; 刘红蕊吴诚诚单衍可谢青云邢刚雷静施志玉孙海凤刘斐; 关键词：RNA HELICASE 大肠杆菌表达系统杆状病毒表达系统 PH

一种用于同时检测三种禽病毒病的高通量试剂盒及其检测方法和应用: 本发明公开一种用于检测三种禽病毒病的高通量试剂盒及其检测方法和应用，本发明提供的基因芯片方法检测NDV、IBV和AIV及其H5、H7、H9亚型流感病毒核酸检测试剂盒，其检测更加快速、敏感性更高、操作简便。本研究开发的是N...; 周继勇闫丽萍肖倩雷静

检测禽流感病毒亚型的荧光定量PCR引物、探针和试剂盒及检测方法: 本发明提供了检测H5、H7和H9亚型流感病毒的多重荧光定量PCR引物和探针，所述引物结合探针能采用多重荧光定量PCR同时检测H5、H7和H9亚型流感病毒具体为哪种亚型，不同亚型的引物之间互相没有影响，并且特异性强，检测灵...; 周继勇闫丽萍刘俊丽雷静粟硕胡伯里; 文献传递

一种鸡传染性支气管炎病毒蛋白芯片抗体检测试剂盒及其应用: 本发明公开一种鸡传染性支气管炎病毒蛋白芯片抗体检测试剂盒及其应用，该试剂盒包括：(1)用重组表达的IBV非结构蛋白5制备的IBV nsp5蛋白芯片；(2)用抗体稀释液稀释的IgY酶标抗体溶液；(3)20×TBST浓缩洗涤...; 周继勇闫丽萍雷静胡建华施志玉; 文献传递

大肠杆菌表达的RNA解螺旋酶Ded1p的提纯与解螺旋机制被引量：1: 2017年; [目的]表达、提纯DEx H/D-box家族蛋白Ded1p,并综合传统电泳以及单分子荧光共振能量转移(sm FRET)技术,探究Ded1p的双链RNA解螺旋机制。[方法]原核表达、纯化出全长的Ded1p作为研究蛋白,并验证其解螺旋酶活性。以荧光对标记的带有3'末端单链RNA尾巴的13 bp双链RNA作为研究底物,基于全内反射的单分子荧光共振能量转移技术,在自制的样品通道内添加800 nmol·L-1Ded1p、2 mmol·L-1ATP/Mg2+以及研究底物进行解螺旋试验,再用自编的Matlab程序采集和分析数据,进而从单分子层面探究Ded1p的双链RNA解螺旋机制。[结果]首次通过Ni-NTA凝胶亲和层析与Capto-DEAE凝胶阴离子交换层析两步纯化手段,得到了大量纯净的、并且具有双链RNA解螺旋酶活性的Ded1p。Ded1p的sm FRET试验在单分子层面实现了对Ded1p打开13 bp双链RNA过程的实时观察。通过分析FRET的变化过程,首次提出Ded1p主要以一步解螺旋的方式打开双链RNA结构。[结论]原核表达、纯化的Ded1p具有RNA解螺旋酶活性;该Ded1p是以局部双链打开的模式解开RNA双链。; 赵富林徐明飞谢青云单衍可雷静施志玉孙海凤刘斐