石川
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNAi抑制丙肝病毒复制的研究进展被引量：3
- 2007年
- 丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的慢性肝病严重影响人类健康,目前尚无有效的治疗方法,RNAi作为一种有效抵抗外来病毒入侵的机制,在抗HCV上的应用有着巨大的前景,本文就近年来在RNAi抑制HCV复制方面的研究进展进行综述。
- 石川曹以诚杜正平卓敏
- 关键词：RNAISIRNAHCV
- 结合RNAi技术的三重表达HCV DNA疫苗的构建及其在HepG2细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建多表位抗原基因、hIL-12、小分子干扰RNA(siRNA)共质粒表达的新型复合丙型肝炎DNA疫苗并在HepG2细胞中表达。方法:设计并合成复合多表位丙肝抗原基因,将其与加强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合克隆进真核表达载体pVAX1的多克隆位点中;利用pVAX1载体上卡那霉素抗性基因与复制起始位点之间的非功能区域,将带CMV启动子的hIL-12表达单元克隆进该区域的BspH I位点中;同时将8组针对丙肝的siRNA表达单元分别克隆进载体复制起始位点下游非功能区域的MluI位点上,构建三重表达的HCV DNA疫苗pVAX1-HC-EGFP-hIL12-siRNA。以该重组质粒转染人肝癌细胞系HepG2,通过EGFP的荧光标记观察多表位抗原的表达;以靶向EGFP的siRNA做为对照验证siRNA的表达及其干扰效果;ELISA测定培养细胞上清中hIL-12的表达。结果:经酶切鉴定和测序证实三重表达的复合HCV DNA疫苗构建成功。在转染细胞中检测到绿色荧光,证实抗原表达;靶向EGFP的siRNA亦能显著抑制EGFP的表达;转染后48 h hIL-12的检出量为1 289 ng/L细胞上清,72 h检出量为1 712 ng/L细胞上清。结论:成功地构建多表位抗原基因、hIL-12和siRNA共质粒表达的丙肝DNA疫苗,并能在真核细胞中有效表达抗原基因、hIL-12并介导RNA干扰效应。为进一步研究该DNA疫苗抗HCV的免疫治疗和基因治疗效果打下基础。
- 杨化强曹以诚杜正平卓敏黄镜贤李新建石川张珍武
- 关键词：DNA疫苗多表位抗原SIRNA
