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一种利用迭代同源重组体内进化目标蛋白质的方法: 本发明涉及一种利用迭代同源重组体内进化目标蛋白质的方法。其特征在于：首先在体外通过两步PCR制备得到带突变的单链核苷酸并用DNase I酶切，回收80‑100nt片段构成目标蛋白质的单链核苷酸突变库；以此单链突变库转化大...; 徐志南濮悦黄磊杭宝建董昌蔡瑾; 文献传递

酿酒酵母代谢工程改造提高S-腺苷-L-蛋氨酸生产水平的研究: 腺苷蛋氨酸是一种重要的医药分子,在治疗肝病、抑郁症和风湿性关节炎中发挥重要作用.在酿酒酵母工业菌株ZJU001中存在与腺苷蛋氨酸合成相关的三条代谢途径,通过敲除糖原合成关键基因所构建的突变菌株ZJU001-glc3中,腺...; 赵伟军杭宝建黄磊蔡瑾徐志南

大肠杆菌细胞内原位进化目标蛋白质的新方法: 本发明涉及一种在大肠杆菌细胞内原位进化蛋白质的新方法。首先制备目标蛋白质分子中特定氨基酸位点的寡核苷酸饱和突变单链库，或制备目标蛋白质分子的同源双链或单链DNA突变库；将上述突变库转化含有目标基因或已经整合目标基因的大肠...; 徐志南濮悦黄磊杭宝建董昌蔡瑾; 文献传递

一种利用迭代同源重组体内进化目标蛋白质的新方法: 本发明涉及一种利用迭代同源重组体内进化目标蛋白质的新方法。其特征在于：首先在体外通过两步PCR制备得到带突变的单链核苷酸并用DNase I酶切，回收80?100nt片段构成目标蛋白质的单链核苷酸突变库；以此单链突变库转化...; 徐志南濮悦黄磊杭宝建董昌蔡瑾; 文献传递

蛋白AqpSS9作为水通道蛋白的应用及利用无细胞蛋白合成体系合成并纯化活性蛋白AqpSS9的方法: 本发明公开了水通道蛋白AqpSS9及其应用。AqpSS9来源于嗜压菌<i>P.？profundum</i>？SS9，与大肠杆菌水通道蛋白AqpZ的同源性高达67%，具有水通道蛋白的标志性功能位点标...; 徐志南杭宝建黄磊蔡谨; 文献传递

多酶催化合成3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸反应体系的构建及优化被引量：1: 2017年; 3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸(PAPS)是目前发现的唯一的"活性"硫酸基团供体,在生物肝素酶法硫磺化反应中起到重要作用,但化学合成的成本高。如何大量低成本制备PAPS是实现酶法合成肝素工业化的关键因素。本文克隆表达了酶法合成PAPS的两个酶:三磷酸腺苷(ATP)硫化酶和5’-腺苷磷酰硫酸(APS)激酶。构建了一条体外合成PAPS的途径。首先利用ATP硫化酶将ATP转化生成APS,同时产生副产物无机焦磷酸(PPi),APS再在APS激酶作用下转化生成PAPS。研究了Mg2+浓度、缓冲体系和p H、温度以及无机焦磷酸水解酶(PPase)的添加对该酶反应的影响。通过添加无机焦磷酸水解酶(PPase),极大提高了PAPS的转化率。在最优条件下考察不同ATP浓度下PAPS随时间的积累量变化,发现反应过程中存在底物抑制作用;ATP浓度为50 mmol?L?1时,反应25 h,PAPS的积累量为18.87 mmol?L?1。反应过程中分批补料ATP,能极大提高催化效率。反应11.5 h,PAPS积累量可达20.36 mmol?L?1(10.32 g·L?1),转化率为81.4%。; 李晓燕蔡谨杭宝建黄磊徐志南; 关键词：分批补料

类人胶原蛋白在大肠杆菌和毕赤酵母中的羟基化表达研究: 近年来,胶原蛋白作为生物材料在医学组织工程中的应用日益广泛,但羟基化的微生物重组生产并没有很好解决.首先构建了含有类人胶原蛋白、人脯氨酸羟化酶和D-可拉伯糖-1,4-内酯酶基因的原核表达载体pAC-HLC-P4H-ALO...; 唐云平杭宝建黄磊徐志南

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