王卫婷
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：北京农学院动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 柔嫩艾美耳球虫MIC4-N的真核表达被引量：4
- 2011年
- 应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫的MIC4-N端基因并去掉信号肽,为了表达检测和纯化的方便,设计引物时改变了3'端的终止密码子,使MIC4-N的C末端带有c-myc和6His抗原标签。通过双酶切,使加工好的MIC4-N基因连接到毕赤酵母表达载体pPICZαA上,转化JM109感受态细胞。再经EcoRⅠ与NotⅠ双酶切、菌落PCR及测序鉴定,证明目的基因与真核表达载体pPICZαA构建成功,单酶切重组表达载体、电转转入GS115酵母感受态细胞中。用含高浓度Zeocin的YPD平板筛选酵母菌落,菌落PCR法鉴定转化成功的阳性菌,在BMMY培养基中摇瓶培养,并用甲醇诱导,经SDS-PAGE及Western Blot鉴定,蛋白分泌表达成功。
- 王卫婷姚鹏周赛王黎霞安健
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫
