石庆伟
- 作品数：6 被引量：37H指数：3
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家生猪现代产业技术体系建设项目国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪流行性腹泻病毒COE蛋白原核表达及其反应原性的初步鉴定
- 2016年
- 为了研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)的优势抗原表位COE可溶性原核表达及其反应原性,试验采用RT-PCR方法扩增出COE基因,将其克隆至原核表达载体p MAL-C5X上,构建重组质粒p MAL-C5X-COE,经测序鉴定正确后转化Rosetta感受态细胞,并进行IPTG诱导表达和Westernblot验证。结果表明:重组菌p MAL-C5X-COE表达的融合蛋白MBP-COE的分子质量约为57 ku,优化的诱导条件为IPTG浓度0.8 mmol/L、诱导时间4 h,诱导温度30℃,重组蛋白以可溶性蛋白形式存在于菌体中,融合蛋白与兔抗PEDV多克隆抗血清发生特异的免疫印迹反应。说明原核表达的COE融合蛋白可溶且具有良好的反应原性。
- 孙彦阔汪志冯嘉萍石庆伟罗勇峰秦锋白小磊张桂红
- 关键词：S基因逆转录PCR
- 5株口蹄疫病毒VP1和3A基因的序列分析被引量：4
- 2016年
- 为了解广东地区口蹄疫病毒(FMDV)遗传进化情况,本研究从广东采集5份疑似FMDV感染病料,对样品进行RT-PCR扩增,经克隆测序后,对FMDVs基因序列比对和遗传进化分析。鉴定结果显示,这些病料样品中2份为O型FMDV感染,3份为A型FMDV感染。2个FMDV O型样品中VP1基因的全长均为639 bp,编码213个氨基酸,3A基因的全长均为459 bp,编码153个氨基酸;3个FMDV A型样品中VP1基因的全长均为636 bp,编码212个氨基酸。3A基因的全长均为459 bp,编码153个氨基酸;与国内外分离的O/A型病毒株VP1基因核苷酸序列相比较发现,2个O型病毒VP1基因与O/BY/CHA/2010株核苷酸序列相似性最高(95.0%),均属于耿马谱系FMDV(属ESA基因型);3个A型病毒VP1基因与A/GDMM/CHA/2013株核苷酸序列相似性最高(99.2%),均属于Asia型FMDV。本研究通过对FMDV遗传进化分析为我国FMDV流行病学的研究提供了基础数据,同时对临床上不同型疫苗的选择提供依据。
- 石庆伟冯嘉萍陈耀白小磊崔甜甜崔进王林川张桂红
- 关键词：口蹄疫病毒VP1基因RT-PCR
- 广东部分地区猪流行性腹泻病毒流行病学调查被引量：18
- 2016年
- 本试验对临床上猪腹泻相关的病原进行了检测并对广东部分地区的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)展开了分子流行病学的调查。对采集自广东地区的14个规模化猪场的19份腹泻病料进行了RT-PCR检测,并对检出的12株PEDV的COE、ORF3、M以及N基因进行测序和遗传进化分析。结果显示,临床的腹泻案列多为混合感染所致,检出的主要病原有猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、PEDV、猪嵴病毒(PKV)、猪A群轮状病毒(PoRV)以及牛流行性腹泻病毒(BVDV)。与参考毒株CV777相比12株PEDV的COE、ORF3、M、N基因均存在不同程度、不同位点的氨基酸突变。COE、ORF3、M以及N基因的遗传进化分析显示:广东地区的12株PEDV毒株属于同一个分支彼此间的亲缘关系较近但与CV777疫苗毒株以及2012年之前广东地区分离的毒株CHGD-01、CH-GDGZ-2012、GD-1以及GD-A等毒株分属于2个不同的分支,亲缘关系相对较远。结果表明,广东地区现阶段流行的PEDV优势毒株与2012年之前相比可能已经发生了改变,CV777疫苗毒株的免疫效果如何还有待于通过更多的临床实验来验证。
- 白小磊崔进崔甜甜陈耀石庆伟冯嘉萍王林川张桂红
- 关键词：猪腹泻PEDV分子流行病学亲缘关系
- 2011-2015年华南地区规模化猪场3种病毒性传染病流行病学调查被引量：13
- 2018年
- 本试验对2011-2015年华南地区各规模化猪场进行了猪瘟、猪伪狂犬病、猪圆环病毒2型等3种疾病的流行病学调查。利用RT—PCR方法分别华南地区猪场采集的3529份组织样品进行病原检测，利用ELISA方法对93667份血清样品进行抗体检测。检测结果表明，2011—2015年，CSFV抗体阳性率则出现上升的趋势，由2011年的68．22％上升至2015年的85．47％，病原阳性率在2013年处于较低水平，在2014年和2015年呈现较大幅度增长，分别为30．41％和42．63％；PRV抗体阳性率均保持90％以上，PRV-gI病原检测阳性率在2014年和2015年呈下降趋势，分别为23．53％和13．25％；PCV2抗体阳性率趋于平稳。
- 汪志陈耀陈耀白小磊孙彦阔冯嘉萍白小磊张桂红
- 关键词：猪瘟病毒圆环病毒2型
- 2014年华南地区PRRSV ORF5基因的遗传变异分析被引量：1
- 2016年
- 为了研究华南地区PRRSV的遗传变异情况,本研究对2014年华南地区16份PRRSV阳性样品的ORF5基因进行了RT-PCR扩增、克隆和测序,并将其进行序列比对和遗传进化分析。结果表明：本研究检测的16株PRRSV ORF5基因的核苷酸同源性为82.8%-100%,与JXA1,CH-1a以及VR2332核苷酸同源性分别为84.4%-99.3%,85.9%-95.0%和83.6%-89.2%。遗传进化树分析显示,所获得16株毒株序列中有13株属于以JXA1为代表的变异株亚群,另外3株属于以GM2,QYYZ为代表的新分支亚群。GP5氨基酸位点分析发现新分支亚群存在较为广泛的变异,尤其在信号肽区,诱导表位,中和表位及高变区。
- 邓胜朝冯嘉萍崔进陈耀崔甜甜白小磊石庆伟张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征ORF5
- H3N2亚型猪流感病毒HA和HA1蛋白的原核表达被引量：1
- 2016年
- 为原核表达H3N2亚型猪流感病毒(SIV)的HA和HA1蛋白,通过RT-PCR方法获得SIV的HA和HA1基因,克隆至原核表达载体pMAL-c5X,并转化至原核表达菌Rosetta(DE3)中,表达菌经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,成功表达了H3亚型SIV的HA和HA1蛋白,目的蛋白均以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,并与H3N2亚型SIV的HA单克隆抗体反应,说明HA和HA1蛋白具有良好的反应原性。
- 纪方晓陈济铛石庆伟王衡张桂红
- 关键词：H3N2亚型猪流感病毒HA蛋白原核表达
