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李国栋: 作品数：17 被引量：41H指数：4; 供职机构：云南中医学院中药学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金云南省自然科学基金云南省教育厅科学研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

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金铁锁鲨烯环氧酶基因的克隆与表达被引量：4: 2016年; 目的:从金铁锁Psammosilene tunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu中克隆三萜皂苷合成途径中的关键酶鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因,并进行生物信息学和表达分析。方法:在转录组数据分析的基础上,利用RTPCR方法获得金铁锁SE基因的两个克隆的全长c DNA序列及进行生物信息学分析;并进行Real-time PCR实验,测定SE在不同组织中的表达量。结果:得到2条SE c DNA,SE-1全长1 642 bp,开放阅读框1 578 bp,编码525个氨基酸;SE-2全长1 552 bp,开放阅读框1 446 bp,编码481个氨基酸;构建了p EASY-E1-SE-1及p EASY-E1-SE-2重组质粒,获得稳定的原核表达体系,SDS-PAGE结果表明所表达的蛋白与预测的蛋白大小一致。Real-time PCR结果表明SE-1、SE-2基因在根中的表达量均高于茎和叶。结论:从金铁锁中成功克隆了SE基因,可为进一步研究金铁锁中三萜皂苷合成代谢途径及其关建酶表达模式奠定基础。; 李国栋韩丽君刘小莉杨耀文钱子刚; 关键词：金铁锁克隆基因表达生物信息学分析

金铁锁糖基转移酶UGT71G1的克隆与生物信息学分析被引量：1: 2017年; 目的克隆金铁锁糖基转移酶全长基因,并进行生物信息学分析。方法根据转录组数据,反转录获得全长c DNA,通过生物信息学软件对该基因蛋白特性及系统发育树进行分析。结果克隆得到c DNA全长序列,命名为UGT71G1,该c DNA全序列长1402 bp,包含一条1107 bp完整开放阅读框,编码368个氨基酸,预测相对分子质量为41.05KD,等电点6.03,在155位到336位置处存在高度保守UDPGT结构功能域,经多重序列比对与同科植物香石竹具有很高的同源性。结论成功克隆、分析了金铁锁UGT71G1基因,为金铁锁有效成分合成关键酶基因及调控机制研究提供基础。; 李媛李国栋张爱丽钱子刚; 关键词：金铁锁糖基转移酶生物信息

一种半夏块茎的试管培养方法: 本发明公开了一种半夏块茎的试管培养方法，包括以下步骤：对半夏的幼嫩的叶和茎进行消毒和培养，培养基MS+BA？1.0mg/L+NAA0.1～0.25mg/L在无光照条件下进行培养，可诱导半夏的茎、叶形成带顶芽的小块茎丛。小...; 杨跃文钱子刚刘小莉李国栋; 文献传递

金铁锁β-actin基因克隆及其作为内参基因的研究被引量：2: 2016年; 目的:建立金铁锁β-actin基因实时荧光定量PCR方法,为金铁锁实时荧光定量PCR的检测提供了内参基因。方法:根据Gen Bank上β-actin基因保守区域设计特异性引物,利用PCR扩增的方法扩增β-actin目的片段。并以β-actin作为内参基因,利用荧光定量PCR技术对糖基转移酶基因(UGT)在金铁锁根、茎、叶组织中的表达情况进行分析。结果:扩增到金铁锁的β-actin基因序列,长度为153 bp,与王不留行、鹅肠菜、马齿苋的β-actin有较高的同源性。而糖基转移酶基因在以β-actin作为内参基因时能够在金铁锁的不同组织稳定表达。结论:金铁锁β-actin基因是一个可靠的内参基因,适合在金铁锁三萜皂苷生物合成相关功能基因的表达研究中作为内参基因。; 李媛张爱丽李国栋钱子刚; 关键词：金铁锁 Β-ACTIN 实时荧光定量PCR

滇龙胆不同居群rDNA-ITS序列分析被引量：4: 2016年; 目的研究云南代表性产地8个滇龙胆居群的r DNA ITS遗传差异,评价ITS用于滇龙胆产地鉴别的可行性。方法运用常规PCR法扩增r DNA ITS后直接测序。结果得到8个居群107个样品r DNA中的ITS和5.8Sr DNA全长序列。其中,ITS2在滇龙胆种内居群间和居群内变异最为丰富,但未找到能反映特定居群的稀有单倍型。结论不同产地滇龙胆r DNA-ITS变异较大,但ITS在鉴别滇龙胆的产地上应用价值有限。; 刘小莉李国栋王杏婷郑梅梅; 关键词：居群 RDNA ITS区

基于翻转课堂模式的药用植物学(上篇)教学改革初探被引量：7: 2016年; 为提高教学质量,满足培养高素质、创新性、应用型中药类专门人才的需要,笔者尝试"翻转课堂"的教学模式,应用新的教学理念,结合现有资源条件,对专业基础课《药用植物学》(上篇)进行了教学改革探索。将课程教学内容划分为8个单元,除"绪论"外,每个单元的教学分为课前自学、课堂讲授、课堂答疑、课堂讨论4个环节。以学生为主体,强化学习的第二步骤"吸收内化",期望解决如何学好课程、提高学生综合素质的问题。对本次教学模式改革的成效,采用问卷调查和数理统计分析(SPSS)的方法作了初步探讨,可为该项工作的进一步提高、完善提供参考。; 李国栋普春霞杨耀文刘小莉; 关键词：药用植物学教学改革

金铁锁叶绿体基因组序列及其系统发育分析被引量：5: 2019年; 目的解析金铁锁叶绿体基因组结构和确定其在石竹科的系统位置。方法基于二代测序技术IlluminaHiseq平台,对金铁锁叶绿体基因组进行测序,使用生物信息学分析软件进行组装和注释,并以苋科植物千穗谷为外类群,通过RAx ML 8.2.11软件构建ML系统发育树,分析石竹科属间的亲缘关系。结果金铁锁叶绿体基因组总长为153977bp。LSC和SSC区被2个反向重复区域IRs隔开,其大小分别为84385、17526、26033 bp。除去重复后,共编码109个基因,包含75个PCGs,30个t RNA和4个r RNA基因。总的CG含量为36.5%,IR区(42.4%)GC含量明显高于LSC(34.2%)和SSC(30.1%)区。在系统进化树中,金铁锁与长萼瞿麦互为姊妹类群,且各节点的支持率较高,能够清晰反映属间的亲缘关系。结论本研究对金铁锁叶绿体基因组结构进行了解析,并探讨了石竹科属间系统发育关系,为金铁锁种质资源综合评价、系统进化等研究提供有效的科学数据。; 高亚芳刘莹莹杨从卫李国栋钱子刚; 关键词：金铁锁叶绿体基因组石竹科系统发育

基于cpDNA trnL-F序列的胡黄连保护遗传学研究被引量：1: 2016年; 胡黄连为特产中国-喜马拉雅特有高山植物,作为常用中、藏药材,受到灭绝性采挖,作为濒危和二级保护植物亟待科学的保护。该研究以云南和西藏7个野生居群91个个体为材料,基于cpDNA trnL-F非编码序列测序分析胡黄连的遗传多样性和遗传结构,分析显著进化单元,确立优先保护居群并提出科学的保护策略。结果表明：胡黄连trnL-F序列长度为871～876 bp,根据序列的核苷酸变异共鉴定出5个单倍型,西藏占有2个单倍型,云南占有3个单倍型,西藏和云南2个地区的所有单倍型均不共享。胡黄连具有较低的单倍型多样性（Hd=0.434 19）和核苷酸多样性（Dij=0.004 66）。种群间分化度（Fst=0.864 520）和基因流（Nm=0.04）、居群间的遗传分化水平（G_（ST）=0.916）、AMOVA分析（0.78%的遗传变异发生在居群内,60.97%的遗传变异发生在地区内居群间,38.25%的遗传变异发生在地区间）均表明,胡黄连居群间存在明显遗传分化。多数一致性树将胡黄连划分为3个进化分支（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）,这3个分支均与地理相关,分支Ⅰ分布于横断山区的4个居群,分支Ⅱ是分布于东喜马拉雅的一个居群,分支Ⅲ是分布于喜马拉雅中段的2个居群。3个分支分属于3个＂进化显著单元（ESU）＂。这3个ESU中白马雪山、茨中、定日、波密、聂拉木五个居群都需要保护,建议现阶段应优先保护的居群是云南白马雪山和西藏波密居群,以就地保护为主。; 李国栋尹子丽刘小莉; 关键词：胡黄连濒危 TRNL-F 保护遗传学

云南雪胆属植物药用资源的初步研究被引量：11: 2016年; 目的：为云南雪胆属药用资源保护和利用奠定基础。方法：实地调查和文献分析。结果：雪胆素（SuHemsleya）源于雪胆属Hemsleya Cogn.多种植物块茎。云南本属植物有16种2亚种6变种具块茎,主要分布在海拔1 400~2 400 m的滇西、滇东、滇中地区。药用记载主要为雪胆、罗锅底、中华雪胆、蛇莲、短柄雪胆。结论：充分考虑地理分布和生境的影响,丽江雪胆、十一叶雪胆、征镒雪胆、帽果雪胆、陀罗果雪胆、椭圆果雪胆、藤三七雪胆、肉花雪胆、独龙江雪胆、翼蛇莲可依次作为获取雪胆素的资源。应重视其野生资源保护和规模化种植。; 曾祥飞张洪武李国栋郭蔚文钱子刚杨耀文; 关键词：药用资源

滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因的克隆及原核表达研究被引量：1: 2017年; 目的为了研究可溶性无机焦磷酸酶(soluble inorganic pyrophosphatase,s PPase)基因在滇重楼生长发育中的功能,对滇重楼的s PPase基因进行了克隆、序列分析和原核表达研究。方法根据滇重楼c DNA文库中筛选到的s PPase的EST序列,克隆了滇重楼可溶性无机焦磷酸酶基因Pps PPase的c DNA全长序列;运用生物信息学的方法对该序列进行相似性比较和同源性分析,预测编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析;将Pps PPase插入到原核表达载体p EASY-E1上,并导入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中进行诱导表达。结果滇重楼中Pps PPase的开放阅读框ORF为621bp,编码206个氨基酸,与高粱中s PPase的氨基酸序列相似性最高为94%;Pps PPase编码的蛋白相对分子质量是23.4k Da,理论等电点p I为5.6,特异识别区域即位于98-104位之间即DNDPMDV。成功构建了原核表达载体p EASY-E1-Pps PPase,并导入到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,经SDS-PAGE分析表明Pps PPase在大肠杆菌中能够表达,当IPTG诱导2h时表达量较高。结论首次从滇重楼中克隆得到可溶性无机焦磷酸酶基因Pps PPase,为滇重楼生长发育分子机制的研究提供参考。; 赵爽董栩许燕李国栋; 关键词：滇重楼基因克隆原核表达

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