张闪闪
- 作品数：11 被引量：60H指数：5
- 供职机构：教育部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学理学更多>>
- 4种细胞毒活性方法评价紫草素体外肿瘤细胞抑制作用效果被引量：12
- 2019年
- 目的研究4种细胞毒活性测定方法对紫草素体外肿瘤细胞抑制作用的评价效果,对紫草萘醌为代表的天然色素在细胞毒活性评价中常出现的假阴性现象进行对比分析。方法将紫草素与其高敏感株急性早幼粒白血病HL-60细胞和低敏感株人非小细胞肺癌A549细胞体外共培养,通过台盼蓝法、磺酰罗丹明B(SRB)法、Cell Counting Kit-8(CCK-8)法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法进行平行实验,测定紫草素在0.4～128μmol/L抑制细胞生长的量效关系曲线。结果台盼蓝法、SRB法、CCK-8法、MTT法测得紫草素对HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为0.57、0.77、1.36、1.01μmol/L,对A549细胞的IC50分别为6.30、10.38、13.48、15.24μmol/L。紫草素浓度分别在3.2、32μmol/L以下时,4种检测方法得到其对2种细胞的抑制率均呈线性增长,超过此浓度即出现差异。其中台盼蓝法与SRB法结果一致性良好,而MTT法与CCK-8法测得的抑制率较低。对于HL-60细胞,紫草素12.8μmol/L时,CCK-8测得抑制率为81%,台盼蓝法为96%;对于A549细胞,紫草素128μmol/L时,MTT法测得抑制率为89%,台盼蓝法为99%。紫草素的吸收光谱与甲臜在波长400～600 nm存在重叠,最大重叠峰在550～570nm,CCK-8试剂与紫草素对HL-60细胞存在协同抑制效应。台盼蓝法结果显示高浓度紫草素几乎完全杀死板孔内细胞,相比对照组差异显著,但MTT法和CCK-8法结果出现假阴性。结论紫草萘醌为代表的天然色素的细胞毒活性评价不建议使用MTT法和CCK-8法,推荐使用SRB法和台盼蓝法。
- 柴冰阳陈泽慧张闪闪张闪闪应雪
- 关键词：紫草素四甲基偶氮唑盐法
- 霜霉菌诱导葡萄叶中白藜芦醇积累的氧化还原调控规律研究被引量：2
- 2017年
- 本文针对霜霉菌侵染葡萄叶过程中植保素积累与活性氧调控规律开展研究。选取7月龄的红地球葡萄叶片,鉴定并分离霜霉病菌对离体的葡萄叶片在20℃黑暗条件下进行侵染处理。HPLC法分析侵染时间与白藜芦醇的含量的时效关系,检测侵染后细胞活性氧积累时效关系,分析茋类物质合成途径限速酶基因的表达时效关系,最后通过助氧化剂及抗氧化剂的正反验证来确定霜霉菌对葡萄白藜芦醇的诱导规律。结果表明,霜霉菌侵染离体葡萄叶片活性氧与白藜芦醇积累呈现时效关系的顺序性,活性氧水平24 h时达到最高,白藜芦醇叶鲜重含量72 h达到最高(59.46μg/g);侵染过程中白藜芦醇合成途径下相关酶STS基因表达明显上调,而PAL、C4H和4CL的酶基因表达量在24 h或48 h最高;助氧化剂H_2O_2和FeCl_3前处理组叶片白藜芦醇含量增加,抗氧化剂NAC和GSH-EE前处理组白藜芦醇含量减少,提示霜霉菌诱导白藜芦醇积累与活性氧调控密切相关。
- 董锦蕾张闪闪王晓琴张波
- 关键词：白藜芦醇霜霉菌
- 白羽王鸽不同组织RT-qPCR内参基因的筛选被引量：1
- 2020年
- 内参基因的正确选择是获得精准、可靠RT-qPCR数据的重要前提。本研究随机选取3只28日龄的白羽王鸽,采集心、肝、脾、肺、肾、胸肌、腿肌、腹脂、卵巢9个组织作为实验材料,选取GAPDH、β-actin、18S rRNA和RPS24个常见的内参基因作为候选内参基因。利用RT-qPCR技术和geNorm、NormFinder、BestKeeper软件及Ct值分析法对候选基因在不同组织中的表达进行检测和稳定性分析。结果表明:geNorm、NormFinder软件分析与Ct值分析法的结果一致,即18S rRNA基因稳定性最佳,RPS2次之;BestKeeper软件的分析结果显示RPS2基因表达稳定性最好,18S rRNA基因次之。因此,推荐选择RPS2+18S rRNA的内参基因组合用于白羽王鸽不同组织基因表达的研究。
- 陈兰陈兰张涛张涛张涛张跟喜张闪闪王金玉
- 关键词：白羽王鸽内参基因
- 内质网应激在三氧化二砷抑制HL-60增殖过程中的效应机制被引量：4
- 2017年
- 目的探究三氧化二砷(ATO)引起内质网应激的效应机制,为掌控急性早幼粒白血病治疗药物监测提供间接药理学指标。方法通过ATO的毒理学数据库关联基因数据整理建立蛋白-蛋白互作网络,使用MCODE算法对网络拓扑关系聚类分析寻找关联基因群;采用HL-60细胞模型进行实验研究。MTT法评价ATO对HL-60的细胞毒活性;Realtime PCR法检测细胞内质网应激相关基因表达变化;Western blot检测内质网应激相关蛋白表达水平;用ER-Tracker Red对内质网进行特异性荧光染色;流式细胞技术检测细胞分化及凋亡指标变化。结果 ATO相关的206个基因PPI网络中有3 794对关系,排名前4的基因群中内质网应激模块凸显;ATO能抑制HL-60细胞增殖,并呈浓度依赖性;ATO在给药4 h即可引起细胞内质网应激,GRP78和GRP94表达较明显,随着时间延长基因表达水平变化明显,1~4μmol·L^(-1)引起GRP78、GRP94和Nrf2表达,8μmol·L^(-1)引起CHOP大量表达。ATO在1、2μmol·L^(-1)时引起e IF2α蛋白磷酸化水平增加,在8μmol·L^(-1)时诱导CHOP蛋白大量表达;内质网染色结果显示,4、8μmol·L^(-1)的ATO诱导内质网的肿胀;流式结果表明ATO在1μmol·L^(-1)时引起细胞分化,在2μmol·L^(-1)时出现明显分化群,4、8μmol·L^(-1)时细胞分化同样明显,但在8μmol·L^(-1)时细胞同时出现凋亡群。结论 ATO抑制HL-60细胞增殖过程中出现内质网应激,并呈浓度依赖性阶段性切换效应。
- 张闪闪李天一王晓琴张波
- 关键词：急性早幼粒细胞白血病三氧化二砷内质网应激分化
- Nrf2/ARE途径在紫草素诱导U937细胞分化中的作用被引量：5
- 2017年
- 目的研究紫草素诱导U937细胞分化及其相关机制。方法通过网络药理学分析紫草素潜在靶点相互作用。紫草素处理U937细胞,进行细胞活力、形态观察、NBT还原能力、Nrf2分化相关基因及Nrf2途径相关分子mRNA表达和核蛋白含量检测。结果紫草素靶点影响Nrf2途径,并且Nrf2能通过蛋白质互作影响分化。紫草素显著抑制U937细胞增殖,升高NBT还原能力、CD11b和CD14mRNA表达、Nrf2核蛋白含量、Nrf2及其下游基因mRNA的表达量。上调细胞Nrf2/ARE途径,增加CD11b和CD14mRNA表达,反之则降低其表达。结论紫草素上调Nrf2/ARE途径增强诱导人急性髓系白血病U937细胞分化。
- 马晓茹周维维张闪闪王晓琴张波
- 关键词：紫草素细胞分化急性髓系白血病核因子E2相关因子2
- 基于血热证小鼠模型紫草素清热凉血与血液氧化还原稳态调控的研究被引量：4
- 2020年
- 目的探究紫草素(SK)对活性酵母诱导的血热证小鼠模型的清热凉血作用与血液氧化还原稳态调控的关系。方法小鼠随机分为对照组、模型组、SK(10 mg/kg)组、阿司匹林(Asp,200 mg/kg)组、L-丁硫氨酸亚砜亚胺(BSO,600 mg/kg)组、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,400 mg/kg)组、BSO联合SK组、NAC联合SK组。小鼠颈背部sc 0.2 g/mL活性酵母提取物(10 mL/kg),造模0.5 h后ip SK,造模8 h后ig Asp,于实验开始前ip BSO、NAC,2次/d,连续1周。考察小鼠肛温(tR)、基本活动、代谢、凝血、血细胞计数等指标,采用OPA荧光法测定小鼠血清中还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平。结果与对照组相比,模型组小鼠造模4 h后tR显著升高(P<0.05),10 h达到(38.07±0.11)℃;小鼠出现烦躁、口唇色红、喜饮、碳末推进率降低、粪便含水量降低、凝血时间延长现象(P<0.05);肺组织红细胞、炎性细胞浸润;血清LPO、MDA水平显著升高、SOD活性降低、GSH/GSSG比率减小(P<0.05)。与模型组相比,SK组小鼠tR显著降低,10 h达到(37.51±0.12)℃;各指标均得到显著改善;血清LPO、MDA水平降低、SOD活性升高、GSH/GSSG比率增大(P<0.05)。BSO组可降低血清GSH/GSSG比率(P<0.05),减弱SK对血热证小鼠的治疗作用;NAC组可增加血清GSH水平,增加GSH/GSSG比率(P<0.05),增强SK对血热证小鼠的治疗效果。结论SK通过调控血液氧化还原稳态,缓解血热证小鼠高热、出血瘀血、血液氧化损伤,从而发挥清热凉血作用。
- 李天一张闪闪马晓茹马晓茹张波
- 关键词：血热证紫草素清热凉血谷胱甘肽
- 双模板分子印迹聚合物在奶粉检验中的应用研究被引量：2
- 2015年
- 采用本体聚合法制备三聚氰胺（MEL）与双氰胺（DCD）双模板分子印迹聚合物（MEL/DCD-MIPs）,将其作为固相萃取介质,实现了奶粉中MEL与DCD富集与纯化,建立了奶粉中两种物质同时检测的方法。通过热力学、选择性和动态结合试验表明,与单模板分子印迹聚合物相比,双模板分子印迹聚合物由于双模板-功能单体分子间的多位点协同作用而有更好的印迹效应,对MEL和DCD结合能力高于结构类似物三聚氰酸（CYA）。固相萃取试验显示,MEL/DCD-MIPs可以从市售奶粉中选择性地分离、富集MEL与DCD,对MEL与DCD的加样回收率分别为93.1%~100.1%和75.7%~82.5%,RSD均小于5.2%。所制得的MEL/DCD-MIPs可应用于奶粉等食品中氰胺类物质的检测。
- 张路赵燕萍张闪闪宋旺弟周维维李迎春
- 关键词：分子印迹聚合物本体聚合三聚氰胺双氰胺固相萃取
- 紫檀茋和乙酰紫草素抑制B16F10细胞增殖的协同作用被引量：10
- 2016年
- 目的研究紫檀茋和乙酰紫草素对B16F10细胞的增殖抑制的协同作用与相关机制。方法通过系统药理学的方法对紫檀茋和乙酰紫草素的联合作用进行预测,并对可能靶点进行筛选及分析。体外采用MTT法测定紫檀茋、乙酰紫草素及联合用药对B16F10细胞的抑制效应;形态学水平观察细胞核的凋亡情况;流式细胞技术检测细胞凋亡及周期的变化;RT-PCR法检测细胞内相关基因的表达;体内实验采用C57BL/6小鼠移植瘤方法。结果紫檀茋有14个靶点与周期相关,乙酰紫草素有12个靶点与凋亡相关,且均有靶点与p53信号通路相关。紫檀茋、乙酰紫草素及联合用药对B16F10细胞的增殖均有抑制作用,并呈浓度剂量依赖性,并具有显著协同效果;联合给药组细胞凋亡率最高,且周期阻滞在G1期;单一给药组的p53、Bax及p21基因的表达随给药时间的延长而增加,而Bcl-2、CDK2、Cyclin E基因的表达随给药时间而减少,联合给药组p53,Bax和Bcl-2的变化差异较单独给药组显著;体内抑瘤实验给药组均有不同程度的抑瘤效果,以联合给药组抑瘤率最大。结论紫檀茋和乙酰紫草素对B16F10细胞的增殖有一定协同抑制作用,认为二者协同激活p53信号通路,诱导周期阻滞和凋亡而发挥药效。
- 陈虹张闪闪董锦蕾钟晶王晓琴张波
- 关键词：黑色素瘤联合用药细胞周期抑瘤率
- 基于促甲状腺功能的姜黄素延长低温冷冻小鼠生存时间的作用机制研究被引量：5
- 2017年
- 目的低温冷冻会对恒温动物生理系统造成严重损害,寻找冻害防护的药物成为研究热点。方法该文以姜黄素(curcumin,Cur)对小鼠冷冻损害保护作用与甲状腺功能评价为研究内容。定量分析小鼠(-20±1)℃冷冻暴露生存时间、代谢指标的变化;ELISA试剂盒检测血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)含量;HE染色观察甲状腺组织形态;实时荧光定量PCR法检测甲状腺功能相关基因的表达。结果姜黄素(12.5~50 mg·kg^(-1))腹腔注射给药能明显延长冷冻暴露小鼠的生存时间;甲状腺HE形态学显示姜黄素逆转了冷冻导致的滤泡破损;姜黄素组代谢指标改善明显,血清FT3、FT4激素含量明显增高,甲状腺功能相关基因甲状腺细胞钠碘转运体(sodium iodide symporter,Nis)、甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)、甲状腺过氧化物酶(thyroid peroxidase,Tpo)m RNA的表达明显上调,促甲状腺激素受体(thyroid-stimulating hormone receptor,Tshr)m RNA的表达下调,这些促甲状腺作用与左旋甲状腺素钠(sodium levothyroxine,L-T4)呈协同作用,且可被丙硫氧嘧啶(propylthiouracil,PTU)所抑制。结论姜黄素延长小鼠生存的低温冷冻保护作用与其促进甲状腺功能密切相关。
- 李照雪胡思远王吉烨陈泽慧张闪闪张波
- 关键词：姜黄素冷冻损伤甲状腺昆明小鼠丙硫氧嘧啶左旋甲状腺素钠
- 基于系统药理学方法筛选抗急性髓系白血病的中药活性分子被引量：9
- 2017年
- 目的:筛选抗急性髓系白血病(AML)中药活性分子。方法:搜集治疗急白草药及化合物,通过系统药理学方法预测药物成药性质,潜在靶点以及潜在巯基消耗特性。选择口服生物利用度、类药性和巯基消耗活性较高的紫草素作为验证分子。构建潜在活性化合物-靶点、靶点-疾病网络,通过拓扑学特性筛选关键靶点及潜在活性分子。利用谷胱甘肽(glutathione,GSH)试剂盒及邻苯二甲醛(OPA)荧光法检测加入紫草素后还原型GSH含量变化。数字表达谱芯片检测紫草素100μg·L-1处理HL-60细胞48 h后基因表达。结果:在治疗AML的40味草药的4 024个化合物中,经过口服生物利用度(OB),类药性(drug-likeness,DL)及巯基消耗特性筛选获得72个分子,最后通过与AML相关靶点联系筛选出10个潜在活性化合物。实验验证紫草素消耗细胞及化学体系内GSH,预测靶点能够调控基因芯片的差异基因(100μg·L-1,48 h)。结论:本方法可用于研究中药的物质基础,有助于挖掘治疗AML中药活性分子,为抗AML药物研究提供借鉴。
- 马晓茹周维维张闪闪王吉烨王永华张波
- 关键词：急性髓系白血病紫草素
