王月华
- 作品数：16 被引量：50H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项中美艾滋病防治合作项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程建筑科学更多>>
- 干血斑样本用于ELISA 法检测HIV抗体的稳定性研究被引量：3
- 2019年
- 目的研究干血斑样本用于艾滋病病毒(HIV)抗体检测的稳定性。方法使用两个品牌HIV酶联免疫吸附试验(ELISA)法抗体检测试剂盒与HIV1/2重组免疫印迹(RIBA)法抗体检测试剂盒,对不同保存形式下干血斑(DBS)存放不同时间后的样本进行HIV抗体光密度(OD)值与条带测定,分析DBS在HIV抗体检测中的稳定性。结果同一份样本经ELISA法试剂A与试剂B检测所得结果存在差异。在室温下,中阳、弱阳、阴性样本放置2周后用试剂A检测均出现OD值增高现象,而用试剂B检测均未出现OD值变化;在37℃下,中阳、弱阳、阴性样本在放置1周后用试剂A检测即出现OD值显著增高现象,而用试剂B检测时,只有放置4周后的弱阳和阴性样本出现OD值升高现象;4℃下,试剂A与试剂B检测各样本OD值均比较稳定,只有在用试剂A检测中阳样本时发现6周后出现OD值升高现象; RIBA检测发现4℃下放置16周后样本稳定性良好,而室温和37℃下随放置时间延长会导致弱阳和中阳样本条带变弱,而阴性样本在37℃密封无干燥剂情况下放置1周后会出现p31、p24、p17等条带;冻存在-20℃的DBS洗脱后样本反复冻融1～6次后OD值无明显变化。结论用国产耗材试剂制备的DBS样本在4℃和-20℃下稳定性较好,不同试剂检测出的样本稳定性差异较大,DBS样本洗脱液可反复冻融使用至少6次。
- 赫晓霞马洁琼程焕义王月华马仲慧邢文革蒋岩
- 关键词：干血斑艾滋病病毒抗体稳定性
- 尿液HIV抗体胶体金检测方法性能评价被引量：10
- 2019年
- 目的对国家"十三五"重大专项课题研发的2个尿液艾滋病病毒(HIV)抗体检测试剂(胶体金法)的检测性能进行临床试验前评价。方法用HIV1/2抗体尿液国家参考品对胶体金法HIV尿液抗体检测试剂进行检验评估;用541份未接受抗病毒治疗(ART)、72份接受ART的HIV抗体确证阳性者、214份HIV抗体阴性者尿液样本,以酶联免疫吸附试验(ELISA)尿液HIV抗体检测试剂作为对照,比较两种方法的敏感性与特异性及ART对胶体金法尿液HIV抗体检测结果的影响。结果 HIV1/2抗体尿液国家参考品检测结果显示,两个胶体金法HIV尿液抗体检测试剂能达到该参考品检测要求;未进行ART的541份样本中,两个尿液胶体金法与ELISA法HIV抗体检测试剂敏感性分别为98.52%(533例),97.04%(525例)与98.89%(535例),特异性均为100%。两个尿液胶体金检测结果与尿液ELISA检测结果相比、尿液HIV抗体检测结果与血液HIV抗体检测结果相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。72例ART病人样本,两个胶体金法与ELISA法尿液HIV抗体检测试剂的检测敏感性分别为58.33%(42例),52.78%(38例)与70.83%(51例),经卡方检验两个尿液胶体金法与ELISA法敏感性差异无统计学意义(P>0.05),尿液胶体金法与ELISA法HIV抗体检测结果与血液HIV抗体检测结果差异有统计学意义(P<0.05)。结论胶体金法尿液HIV抗体检测试剂盒的敏感性与特异性与已经上市的ELISA没有差别,可用于高危人群HIV筛查,接受ART的HIV感染者/艾滋病病人不适用尿液抗体检测。
- 王月华程焕义王继宝陈凯赫晓霞段星叶润华段松蒋岩
- 关键词：艾滋病病毒尿液抗体检测胶体金法
- 干血斑用于HIV抗体确证（重组免疫印迹法）方法建立与初步应用被引量：6
- 2019年
- 目的研究建立干血斑(DBS)样本用于艾滋病病毒(HIV)抗体确证(重组免疫印迹法)的方法,为确证试验提供更加广泛的适用样本。方法制备系列稀释20~210 DBS与配对血浆样本,利用实验室优化的DBS洗脱条件(300μL含0.5‰Tween 20的PBS室温洗脱6小时),研究来自两个公司的人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗体检测试剂盒(免疫印迹法/重组免疫印迹法)的检测限,选择其中等效性更好且价格低廉的国产(重组免疫印迹法)试剂进一步研究。结果通过310份(110份HIV抗体阳性和200份HIV抗体阴性)已知DBS与血浆配对样本和1 304份临床DBS样本进行该方法验证与应用,两种不同试剂对于血浆样本的检测限均为20~27,但对于来自相同个体的对应DBS样本检测限不同(分别为20~25和20~26);应用与血浆样本等效的国产(重组免疫印迹法)试剂进行方法验证结果表明,阳性样本一致率为100.0%(110/110),阴性样本一致率为98.5%(197/200),总一致率99.0%(307/310),Kappa值0.98(P<0.001);敏感性100.0%(110/110),特异性98.5%(197/200);应用国产(重组免疫印迹法)试剂对1 304份临床DBS样本中HIV抗体初筛阳性132份DBS样本同时进行实验室DBS确证与临床随访确证,实验室DBS确证结果与临床随访确证结果完全一致,确证阳性130份,排除初筛假阳性样本2份。结论 DBS样本用于HIV抗体确证(重组免疫印迹法)与血浆样本等效,具有良好敏感性与特异性,可有效排除初筛假阳性样本。
- 赫晓霞程焕义王月华王月华姚均姚均邢文革
- 关键词：干血斑艾滋病病毒
- LAg-avidity EIA HIV-1新发感染检测试剂性能评估被引量：2
- 2019年
- 目的对国产限制性抗原亲和力法1型艾滋病病毒(HIV-1)新发感染酶联免疫检测试剂盒(LAg-avidity EIA HIV-1新发感染检测试剂)进行性能评估。方法抽取三批LAg-avidity EIA HIV-1新发感染检测试剂,分别由三个人检测同一批及一个人检测三批试剂,以评估该试剂批内与批间精密度;将其三批试剂2℃~8℃贮存组分于37℃放置7天,-20℃贮存组分于2℃~8℃放置7天后,评价试剂盒的热稳定性;利用81份HIV-1抗体阳性临床样本评估不同批次试剂与不同实验人员新近感染与既往感染样本检测结果的一致性。结果国产LAg-Avidity EIA HIV-1新发检测试剂批内弱阳质控(LPC)与强阳质控(HPC)光密度(OD)值批内变异系数(CV)分别为8.52%与9.06%,批间CV分别为9.25%与10.07%;加速热处理7天后,试剂批内LPC与HPC的CV分别为8.01%与5.66%,批间CV分别为6.24%与10.95%,同时三批新近感染与既往感染检测一致率分别为98.70%、100.00%与97.53%;三个不同实验人员新近感染与既往感染一致率分别为100.00%、97.53%与98.70%;三个不同批次试剂检测的新近感染与既往感染一致率分别为100.00%、98.70%与100.00%。结论国产LAg-Avidity EIA新发检测试剂批内与批间精密度、稳定性与一致性均较好,能够满足实验室HIV-1新发感染检测与应用。
- 王月华程焕义陈凯赫晓霞邢文革方会来张誌蒋岩
- 关键词：酶联免疫试验
- 基于干血斑的北京地区未治疗的男男性行为者HIV-1传播耐药性分析被引量：1
- 2020年
- 目的为了掌握男男性行为者(MSM)中1型艾滋病病毒(HIV-1)传播耐药性(TDR)的发生率,本研究以干血斑(DBS)样本为材料,探究了北京地区未进行抗病毒治疗(ART)的MSM中传播耐药性情况。方法2017年7月至2018年4月期间,招募HIV-1阳性且未开始ART的MSM,采集其DBS样本。对HIV-1pol基因蛋白酶区和反转录酶区进行扩增并测序。通过斯坦福大学耐药突变数据库确定样本的耐药情况,并根据世界卫生组织提供的突变列表确定筛选出传播耐药突变。结果共收集到141份符合要求的DBS样本,对其中的137份成功进行扩增测序。结果表明,MSM中的传播耐药性突变的发生率为6.6%(9/137)。其中,非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTI)相关耐药突变占比最多(3.6%),其次为核苷类反转录酶抑制剂(NRTI,2.9%)和蛋白酶抑制剂(PI,2.2%)。出现频率最高的NNRTI耐药突变为K103N(3/5),NRTI耐药突变为M184I(4/4),PI耐药突变为M46I(2/3)。结论北京地区MSM中TDR的发生率相对较高,ART开始前对该人群进行耐药检测具有重要意义。
- 陈凯王月华赫晓霞姚均夏冬艳卢红艳蒋岩
- 关键词：抗病毒治疗干血斑
- 两种HIV-1新发感染检测试剂性能的评估被引量：3
- 2018年
- 目的对国内常用的两种1型艾滋病病毒(HIV-1)新发感染酶免检测试剂盒(限制性抗原亲和力法)进行精密度和稳定性评估,比较两种试剂的性能。方法利用2份临床样本和试剂盒内的校准品分别测定两种试剂盒的批内精密度;利用81份HIV-1抗体阳性样本评估两种试剂盒初筛、确证和不同人员检测结果的重现性;用37℃处理比较两种试剂盒的储存稳定性。结果批内精密度检测显示,校准品、新发和既往感染样本用A试剂盒检测的光密度(OD)变异系数(CV)为7.87%、6.93%和8.58%,B试剂检测的CV值为6.69%、10.75%和7.84%。A、B两种试剂盒经同一实验员检测的初筛和确证标准化光密度(ODn)值相关性分别为0.9501和0.9803;不同实验员间检测A、B两试剂盒的ODn值相关性分别为0.9634和0.9912。两种试剂盒37℃处理7天和正常存放的试剂盒检测81份样本的结果符合率达97.53%。结论两种试剂盒具有较好的精密度、检测结果稳定、易于储存,能够满足实验室HIV-1新发感染检测,可以在国内艾滋病新发感染检测实验室推广和应用。
- 程焕义王月华赫晓霞田雨张桂云张桂云
- 关键词：精密度稳定性
- 一次性尿液采集器用于尿液HIV-1抗体检测的实验室评估被引量：5
- 2017年
- 目的评估一次性尿液采集器保存的尿液样本,用于艾滋病病毒(HIV)抗体检测的可行性。方法利用尿液酶联免疫吸附试验,比较了普通样品管和采集器对尿液HIV-1抗体检出的影响;进一步检测了不同温度和储存时间下,采集器对尿液HIV-1抗体保存的均一性、稳定性以及邮寄前后的影响。结果与普通样品管比较,采集器保存的尿液,对HIV-1抗体检测无明显影响(P=0.24);在不同温度下,采集器可稳定保存尿液的时间:采集器尿液在-20℃和4℃保存1年,在常温保存1个月,在37℃保存9天。均一性:批间和批内变异系数(CV)均<15%(P>0.05);邮寄前后尿液HIV-1抗体无显著变化,Kappa值为0.957。结论一次性尿液采集器可用于检测HIV-1抗体尿液样本的采集、贮存与运输。
- 田雨冯霞蒋岩段松王月华程焕义沈长新
- 关键词：尿液稳定性均一性
- 干血斑样本用于HIV抗体检测方法学优化与应用被引量：5
- 2018年
- 目的探讨用于干血斑样本中艾滋病病毒（HIV）抗体检测的最佳洗脱条件。方法选取并制备中值（24）与低值（26）的干血斑样本,利用HIV抗体诊断试剂盒（酶联免疫吸附试验法）,对不同洗脱温度、不同洗脱液组分、不同洗脱液体积、不同洗脱时间分别进行组合后,进行干血斑（DBS）样本洗脱液中抗体OD值测定分析,从而选出最适宜、最方便用于HIV抗体检测的DBS洗脱条件。结果室温与4℃条件下洗脱样本差异无统计学意义（P=0.979,P=0.704）;不同洗脱液体积对样本洗脱的影响差异无统计学意义（P=0.183）;洗脱液组分对低值（26）样本的洗脱效果有统计学意义（P=0.033）,其中以含0.5‰Tween20的PBS对样本洗脱的影响更为显著（P=0.02,P=0.004）;洗脱时间对中值（24）与低值（26）样本均有显著影响（P=0.00,P=0.00）,其中4小时和6小时为显著差异分界点。670份临床已知样本的检测应用中,试剂盒现成Cutoff值计算判定阳性样本时,存在2.63%的假阳性,无假阴性。结论用于DBS中HIV抗体最佳洗脱条件为：用300μL含有0.5‰Tween20的PBS在室温下（24±2℃）洗脱4～6小时。试剂盒Cutoff值不适用于DBS样本结果判定,需进一步研究设定用于该方法的Cutoff值。
- 赫晓霞粟斌程焕义王月华马仲慧邢文革蒋岩
- 关键词：艾滋病病毒抗体检测干血斑
- HIV-1新发感染实验室检测能力的评估被引量：3
- 2018年
- 目的评估各实验室利用限制性抗原亲和力酶联免疫试验（LAg-Avidity EIA）检测1型艾滋病病毒（HIV-1）新发感染的能力,提高我国HIV-1新发感染实验室检测的准确性。方法按照GB/T 27043-2012、CNASGL02：2014、CNAS-GL03：2015文件,选择8份临床样本,制备能力验证质控品并进行均一性和稳定性检验,分发给各实验室,组织实验室能力验证和进行结果分析。结果能力验证质控品均一性分析表明,各组质控品的CV值〈15%,单因素方差分析质控品无统计学差异;稳定性检验结果,各组质控品室温放置一周后,检测结果与均一性结果经t检验无差异。此次制备的能力验证样本均一性和稳定性良好,满足能力验证要求。参加能力验证的35家实验室,均按期回报结果,34家试剂盒内控有效,检测结果有效率97.14%;31家能够正确判定8支能力验证样品的感染状态,满意率88.57%,4家实验室误判1例样本;在正确判定能力验证样本的实验室中,有4家实验室各存在1例离群的ODn值。结论参加能力验证的多数实验室可以准确完成新发感染检测,但检测中仍存在一些问题,应加强对相关实验室的培训,提高各实验室HIV-1新发感染检测能力。
- 程焕义王月华赫晓霞陈凯邢文革蒋岩
- 关键词：均一性稳定性
- HIV-1 DNA评价盘的构建及两种国产检测试剂性能评价
- 2020年
- 目的构建1型艾滋病病毒(HIV-1)脱氧核糖核酸(DNA)全血和干血斑评价盘,并对两种国产HIV-1 DNA检测试剂(试剂A和试剂B)性能进行实验室评价。方法从中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心参比实验室样本库中筛选全血和干血斑样本,构建HIV-1 DNA全血和干血斑评价盘,评价盘包含阳性参考品20份,阴性参考品20份,最低检测限参考品5份,精密度参考品2份;并从云南省德宏州收集临床样本,通过评价盘和临床样本对两种试剂的敏感性、特异性、最低检测限和精密度进行评价。结果从云南省德宏州疾病预防控制中心和佑安医院共收集临床样本278份(全血和对应干血斑各278份),包含207份阳性样本和71份阴性样本。阳性样本中,106份未接受抗病毒治疗(ART),101份已接受ART。全血评价盘结果显示,两种试剂的阴、阳性样本符合率20/20,最低检测限均为4/5,A试剂精密度为1.2%(CV1)和1.4%(CV2),B试剂精密度为2.8%(CV1)和1.3%(CV2)。干血斑评价盘结果显示,两种试剂阴、阳性样本符合率均为20/20,最低检测限均为3/5,A试剂精密度为2.5%(CV1)和3.4%(CV2),B试剂精密度为3.1%(CV1)和2.8%(CV2)。177份未进行ART临床样本评价结果显示,对于全血样本,两种试剂特异性和敏感性均为100%(71/71,106/106);对于干血斑样本,两种试剂特异性均为100%(71/71),试剂A敏感性为98.1%(104/106),试剂B敏感性为99.1%(105/106)。101份已接受ART样本评价结果显示,对于全血样本,试剂A和试剂B敏感性均为100%(101/101);对于干血斑样本,试剂A敏感性为91.1%(92/101),试剂B敏感性为90.1%(91/101)。结论两种HIV DNA检测试剂均能符合全血和干血斑评价盘要求;在检测未进行ART全血和干血斑临床样本时均表现良好,且试剂A与B之间无显著差异,两种国产HIV-1 DNA检测试剂均能满足HIV-1核酸检测要求。
- 陈凯王月华吕毅邢文革姚均蒋岩
- 关键词：抗病毒治疗干血斑敏感性
