刘花
- 作品数：1 被引量：8H指数：1
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：食品科学与技术国家重点实验室科研基金江苏省自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 利用重组大肠杆菌生产α-环糊精葡萄糖基转移酶被引量：8
- 2009年
- 将来源于软化类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans)的α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT)基因插入含pelB信号肽的质粒pET-20b(+)中,构建了表达载体pET-20b(+)/cgt,并将其转化表达宿主E.coliBL21(DE3)。对重组菌E.coliBL21/pET-cgt进行摇瓶发酵条件的优化,确定了其胞外表达α-CGT酶的最适条件:葡萄糖8 g/L,乳糖0.5 g/L,蛋白胨12 g/L,酵母膏24 g/L,K2HPO472 mmol/L,KH2PO417 mmol/L,CaC l22.5 mmol/L;初始pH为7.0,诱导温度为25℃。在该条件下培养90 h后最终α-CGT酶的胞外比活达到22.1 U/mL,与来源菌P.macerans所产天然酶比活相比提高了42倍,实现了α-CGT酶的高效生产。将基因工程菌在上述条件下于3 L发酵罐中发酵,90 h后胞外酶比活达到22.6 U/mL,证实了工业化放大的可能性。
- 成成李兆丰李彬刘花陈坚吴敬
- 关键词：Α-环糊精葡萄糖基转移酶大肠杆菌克隆
