王玲
- 作品数：11 被引量：14H指数：3
- 供职机构：福建省肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家临床重点专科建设项目福建省自然科学基金福建省科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- T-exo负载DC诱导抗肝癌细胞免疫效应研究被引量：3
- 2016年
- 目的：观察肝癌细胞来源的外泌体（T-exo）负载DC体外诱导细胞毒T细胞（CTL）对肝癌细胞的杀伤作用。方法：采用超滤离心技术联合蔗糖密度梯度超速离心的方法从肝癌Huh-7细胞培养上清液中分离外泌体（T-exo）,透射电镜鉴定形态,Western blot检测外泌体相关蛋白CD9、CD63、HSP70及肿瘤抗原分子AFP的表达;分离健康供者外周血单个核细胞（PBMC）培养DC,流式细胞术鉴定负载T-exo的DC细胞表型;用2-（4-碘苯）-3-（4硝基苯）-5-（2,4-磺苯基四氮唑）-2H-四唑单钠盐-1（WST-1）法检测负载T-exo的DC刺激T淋巴细胞增殖情况;流式细胞术Annexin-V/PI双染法检测负载T-exo的DC诱导CTL分别对AFP阳性Huh-7细胞及AFP阴性的SMMC7721细胞的杀伤作用。结果：透射电镜下可见T-exo为圆形或椭圆形双层膜囊泡状小体,大小不等,平均直径50～100 nm,表达外泌体膜相关分子及肿瘤抗原分子。负载T-exo的DC可促进初始T细胞增殖,T-exo致敏DC对AFP阳性的Huh-7肝癌细胞系杀伤活性明显高于AFP阴性的SMMC7721肝癌细胞组（P〈0.05）及未负载T-exo的对照组DC（P〈0.05）。结论：负载T-exo的DC能促进T细胞增殖,提高CTL细胞的细胞毒活性诱导特异性的抗肝癌效应。经T-exo抗原致敏DC诱导的CTL对肝癌细胞有明显的细胞毒作用,明显高于DC对照组（P〈0.05）。
- 李洁羽陈明水陈淑萍周智锋王玲叶韵斌
- 关键词：树突状细胞外泌体肝癌细胞毒T细胞
- MG132对乳腺癌细胞株MICA蛋白稳定性及NK杀伤活性作用被引量：1
- 2018年
- 目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对乳腺癌细胞株MHC-I类相关分子A(MHC class I-related molecules A,MICA)蛋白稳定性及NK杀伤活性作用。方法乳腺癌细胞株MICA全基因检测。构建乳腺癌细胞株MICA等位基因真核表达载体,转染293T细胞。流式细胞术及Western blot检测乳腺癌细胞株MICA表达。MTT检测MG132对乳腺癌细胞生长抑制。LDH检测NK细胞杀伤活性。结果 MDA-MB-231基因序列为MICA*019/A5,MDA-MB-435S基因序列为MICA*010/A5,仅在蛋白N端(膜外区)第29位氨基酸有差异:MICA*019/A5在该位点为Arg(精氨酸),而MICA*010/A5在该位点为Pro(脯氨酸),Arg或Pro位点在蛋白结构的一个beta折叠上,而且是处于偏中间的位置。MG132对转染的293T细胞增殖均有明显抑制作用。MG132处理转染的293T细胞后,MDA-MB-435S MICA基因来源的293T细胞MICA表达降低,并随作用时间影响更明显,对NK杀伤敏感下降。MDA-MB-231 MICA基因来源的293T细胞MICA表达无明显改变,对NK杀伤活性敏感性不受影响。结论 NK杀伤敏感性与乳腺癌细胞MICA表达密切相关,MG132影响MDA-MB-435S MICA稳定性,所以影响NK杀伤敏感性,MDA-MB-231不受影响。
- 周智锋陈淑萍李洁羽林万松王玲郑庆丰叶韵斌
- 关键词：MG132乳腺癌细胞株自然杀伤细胞
- 携带非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A穿膜区等位基因中晚期食管癌患者对NK细胞免疫治疗的敏感性高被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨非A5.1型MHC-Ⅰ类相关分子A(MHC classⅠ-related molecules A,MICA)穿膜区等位基因对中晚期食管癌患者术后化疗联合NK细胞免疫治疗疗效的影响。方法:选取福建省肿瘤医院2013年4月至2015年10月收治的中晚期(TNMⅢ-Ⅳa期)食管癌患者152例,均在姑息性手术后行全身化疗,根据患者MICA穿膜区等位基因是否为A5.1分为4组:(1)A5.1化疗+NK细胞治疗(A5.1+NK)组;(2)A5.1单纯化疗(A5.1)组;(3)非A5.1化疗+NK细胞治疗(no A5.1+NK)组;(4)非A5.1单纯化疗(no A5.1)组,观察各组患者临床疗效。构建食管癌组织标本MICA等位基因A5.1的真核表达载体p TE-1A5.1,转染食管癌TE-1细胞株;Western blotting检测p TE-1A5.1转染对TE-1细胞MICA蛋白表达的影响,LDH法检测TE-1细胞转染p TE-1A5.1前后对NK细胞杀伤敏感性的变化,ELISA法检测食管癌患者血清可溶性MICA及转染p TE-1A5.1前后TE-1细胞上清中可溶性MICA含量。结果:经过3年的随防,A5.1+NK组患者中位总生存期(medium overall survival,m OS)为15.0个月,A5.1组为16.0个月,no A5.1+NK组为22.4个月,no A5.1组为16.0个月,no A5.1+NK组m OS明显长于其他3组(P<0.05)。经Cox多因素回归分析发现,患者年龄、性别、ECOG评分及基因型与预后均无明显相关(P>0.05),将基因类型与是否NK细胞治疗进行交叉分析,no A5.1+NK组m OS明显长于其他3组(P<0.01)。转染p TE-1A5.1后TE-1细胞内MICA表达显著升高,培养液上清可溶性MICA分泌明显增加[(256.2±45.3)vs(45.3±11.5)pg/ml,P<0.01];与转染前相比,NK细胞对过表达MICA的TE-1细胞的杀伤率明显降低[(29.5±7.2)%vs(42.5±7.1)%,P<0.05]。结论:相对中晚期食管癌MICA穿膜区A5.1等位基因患者,非A5.1基因患者手术后化疗联合NK细胞的疗效较好,其机制与其不容易产生可溶性MICA密切相关。
- 周智锋王玲林万松陈淑萍李洁羽叶韵斌郑庆丰
- 关键词：食管癌免疫治疗
- T-exo负载DC诱导抗肝癌细胞免疫效应研究
- 目的:观察肝癌细胞来源的外泌体(T-exo)负载DC体外刺激细胞毒T细胞(CTL)对肝癌细胞的杀伤作用。方法 :采用超滤离心技术联合蔗糖密度梯度超速离心的方法从肝癌Huh-7细胞培养上清液中分离外泌体(T-exo),透射...
- 李洁羽陈明水陈淑萍周智锋王玲叶韵斌
- 关键词：树突状细胞外泌体肝癌细胞毒T细胞
- 文献传递
- MICA表达预测非小细胞肺癌术后化疗联合NK细胞输注治疗的疗效被引量：5
- 2017年
- 目的探讨MHC-Ⅰ类相关分子A(MHC classⅠ-related molecules A,MICA)表达是否能预测非小细胞肺癌术后化疗联合NK细胞输注治疗的疗效。方法流式细胞仪检测92例非小细胞肺癌组织MICA表达。非小细胞肺癌患者手术后,单纯化疗41例(多西他赛+顺铂方案)、化疗联合NK细胞治疗51例,单因素与多因素比较临床因素与生存期关系。结果非小细胞肺癌组织46.74%MICA阴性表达,53.26%MICA阳性表达,NK细胞培养14~17 d后NKG2D高达(97.8%±2.5)%,明显高于培养前(88.2%±7.2)%(P<0.05)。MICA是否表达与NKG2D高低无关(P=0.189)。非小细胞肺癌患者术后Ⅱ期患者的3年及5年的生存率分别为70.8%及47.9%,ⅢA期患者的3年及5年的生存率分别为54.5%及22.7%,中位生存期在是否联合NK治疗(P=0.037)及临床分期(TNM)(P=0.009)存在差异,而患者在年龄(P=0.999)、性别(P=0.412)、病理类型(P=0.782)及MICA表达(P=0.172)均无差异。多因素分析显示,中位生存期在是否联合NK治疗(P=0.044)、临床分期(TNM)(P=0.002)及NK与MICA交叉分析(P=0.002)存在差异。结论 MICA在非小细胞肺癌患者术后化疗联合NK细胞免疫治疗中起重要作用,MICA表达可作为NK细胞免疫治疗的预后因素。
- 周智锋李洁羽林万松陈淑萍王玲叶韵斌郑庆丰
- 关键词：非小细胞肺癌MICA自然杀伤细胞
- 不同方式负载AFP抗原的DC诱导抗肝癌HepG2细胞免疫效应的比较
- 2015年
- 目的:比较AFP抗原以不同方式负载DCs对后者生物学功能的影响及体外刺激CTL对肝癌Hep G2细胞的杀伤作用。方法:分离健康供者外周血单个核细胞培养DC,分别用(A)人工合成AFP抗原肽、(B)Hep G2细胞裂解物、(C)Hep G2细胞分泌的外泌体(tumor exosome,T-exo)、(D)AFP抗原的重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus expressingα-fetoprotein antigen,r AAV/AFP)致敏DC前体细胞及(E)未负载抗原的DC作为对照,经GM-CSF、IL-4及LPS联合诱导DCs分化成熟。流式细胞术检测r AAV/AFP病毒感染效率、各组DCs表型及其剌激初始T细胞的增殖效应,7-ADD/CFSE双染法流式细胞术检测各组DCs诱导CTL对AFP阳性Hep G2细胞的杀伤作用。结果:几种抗原负载方式均可诱导DCs成熟、促进CTL增殖及特异性识别并杀伤Hep G2细胞,但r AAV/AFP感染DCs后,其CD83、CD86、ICAM-1、CD58、CD40分子表达水平明显高于对照组(P<0.05),r AAV/AFP+DC组和Hep G2-Texo+DC组对Hep G2细胞的杀伤作用均分别显著优于其他抗原负载(AFP/peptide+DC、Hep G2 lysate+DC)组[(44.92±4.12)%vs(28.42±3.29)%、(24.28±1.79)%;(41.40±2.87)%vs(28.42±3.29)%、(24.28±1.79)%;均P<0.05)]。结论:r AAV/AFP高效感染DCs后能有效刺激初始T细胞增殖,并增强CTL对AFP阳性靶细胞的杀伤活性,而负载Texo的DCs也能诱导显著的抗肝癌效应,上述结果为基于DCs的肝癌疫苗的研发提供新的思路。
- 李洁羽陈明水周智锋王玲王玲叶韵斌
- 关键词：树突状细胞细胞毒T细胞腺相关病毒外泌体
- GBX2基因过表达对人宫颈癌SiHa细胞生长和侵袭转移的影响
- 目的探讨GBX2基因在人宫颈癌细胞Si Ha生长和侵袭转移中的作用及可能机制的初步探讨。方法 Western blot方法检测宫颈癌3个细胞系GBX2表达,选取低表达GBX2的人宫颈癌细胞株Si Ha进行接下来的实验研究...
- 王玲林万松李洁羽陈明水叶韵斌
- 文献传递
- GBX2基因过表达对人宫颈癌SiHa细胞生长和侵袭转移的影响
- 目的 目的：探讨GBX2 基因在人宫颈癌细胞SiHa 生长和侵袭转移中的作用及可能机制的初步探讨。方法 Western blot 方法检测宫颈癌3 个细胞系GBX2 表达，选取低表达GBX2 的人宫颈癌细胞株SiHa 进...
- 王玲林万松李洁羽陈明水叶韵斌
- 关键词：宫颈癌细胞生长细胞迁移细胞侵袭
- Id2调控结直肠癌细胞HCT116生长和侵袭转移的机制研究
- 目的 探讨Id2对人结直肠癌细胞生长和侵袭转移的影响及作用机制。方法 qRT-PCR 和Western Blot 检测六株人结直肠癌细胞中Id2 mRNA 和蛋白的表达。选取高表达Id2 的肠癌细胞株，感染慢病毒后用pu...
- 刘枋于悦黄传钟陈慧菁王玲张万平叶韵斌
- GBX2过表达促进人宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及侵袭被引量：4
- 2019年
- 目的:探讨GBX2基因在人宫颈癌SiHa细胞增殖和侵袭转移中的作用及其机制。方法:应用质粒转染技术,分别将过表达GBX2基因重组质粒pCMV6-entry-GBX2(实验组)及空载体质粒pCMV6-entry(阴性对照组)转染到宫颈癌SiHa细胞中,用WST-1法、集落形成实验、流式细胞术分别检测转染细胞的增殖、集落形成和细胞周期,用划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力,用ELISA法检测细胞培养上清中IL-6的表达水平,用WB检测EMT相关蛋白的表达变化并探讨其可能的作用机制。结果:与SiHa/pCMV6组相比,上调GBX2表达后:(1)SiHa/GBX2组细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力明显增强(均P<0.01),G0/G1期的细胞比例减少、S期与G2/M期的细胞比例增加(均P<0.01)(;2)SiHa/GBX2组细胞EMT相关蛋白上皮钙黏蛋白表达水平下降,神经钙黏蛋白、波形蛋白和snail表达水平上调(均P<0.01)(;3)SiHa/GBX2组细胞培养上清中IL-6的表达水平明显增高(P<0.01);(4)SiHa/GBX2组细胞STAT3磷酸化水平增强,并能被STAT3抑制剂S31-201抑制(P<0.01)。结论:GBX2可能通过IL-6/STAT3通路诱导宫颈癌SiHa细胞EMT,从而促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
- 王玲林万松林万松陈明水李洁羽
- 关键词：宫颈癌SIHA细胞上皮间质转化
