傅强
- 作品数：8 被引量：26H指数：3
- 供职机构：上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 核酸适配体筛选的改良与优化策略被引量：2
- 2017年
- 核酸适配体以其类似抗体的功能及诸多优于抗体的特点引起人们的广泛关注,如何利用指数富集的配基系统进化技术(SELEX技术)来高效地筛选核酸适配体是其应用的关键。结合近些年核酸适配体的研究进展,为提高筛选效率及核酸适配体性能,针对适配体筛选三大不同环节所做的尝试及改良进行相关的阐述,包括初始随机寡核苷酸文库的设计与修饰、筛选过程所用方法及次级文库的制备、筛选过程后(Post-SELEX)核酸适配体性能的优化等;特别比较了筛选方法包括毛细管电泳SELEX、细胞SELEX、磁珠SELEX、加尾SELEX、微流控SELEX、微阵列SELEX和高通量SELEX,以及次级文库的制备方法诸如不对称PCR法、λ核酸外切酶法、磁珠法、不等长PCR法、综合性方法等;对核酸适配体发展面临的问题及发展前景进行探讨,以期为相关科研人员的研究提供参考。
- 李世雨傅强严亚贤
- 关键词：核酸适配体SELEX
- 一株强裂解性大肠杆菌T1样噬菌体新成员的分离与鉴定被引量：10
- 2017年
- 【目的】自然界中噬菌体种类繁多,其裂菌功能在针对细菌耐药方面具有潜在应用价值。不同噬菌体也呈现出显著的基因多样性及宿主特异性。从上海某猪场仔猪肠内容物样品中分离、纯化大肠杆菌的裂解性噬菌体,分析其生物学特性和病毒学特征,为探索应用噬菌体治疗细菌性感染提供研究材料。【方法】采用双层琼脂平板法分离、纯化噬菌体,观察噬菌斑特征,通过电镜观察噬菌体形态特征,测定其裂菌谱、最佳感染复数、一步生长曲线和生物学特性,进行噬菌体全基因组测序和遗传进化分析。【结果】分离、纯化获得一株能高效裂解大肠杆菌K-12菌株的噬菌体,命名为v B_Eco S_SH2(SH2),噬菌斑呈圆形、大而透明、边缘整齐。电镜观察SH2的头部呈二十面体立体对称,尾部较长。噬菌体的潜伏期为10 min,暴发期为60 min,裂解量高达121 PFU/感染细胞,其最佳感染复数为0.1。基因组测序和比对结果表明,SH2的核酸类型为ds DNA,基因组全长为49 088 bp,G+C%含量为45%,Gen Bank登录号为KY985004,结合电镜观察及BLASTp分析,确定其属于有尾噬菌体目长尾噬菌体科成员。同源性及进化分析表明,该噬菌体为大肠杆菌T1样噬菌体的新成员。【结论】分离鉴定了一株裂解效率极高的大肠杆菌T1样噬菌体,并确认其为T1样噬菌体新成员,为研究大肠杆菌噬菌体及其抗菌应用提供了新的实验材料。
- 傅强单文雅王兆飞李世雨王恒安孙建和严亚贤
- 关键词：大肠杆菌生物学特性基因组分析
- H-NS蛋白调控大肠杆菌CRISPR-Cas对Stx2噬菌体溶原的影响
- 为了研究大肠杆菌H-NS蛋白对CRISPR-Cas系统的调控及其对Stx2噬菌体ΦMin27溶原的影响，本文利用λRed同源重组系统构建了大肠杆菌MG1655的hms基因缺失株，通过检测Cas基因表达水平及CRISPR质...
- 傅强李世雨王兆飞程玉强王恒安严亚贤孙建和
- 关键词：大肠杆菌H-NS毒素
- 核酸适配体在真菌毒素检测中研究进展被引量：2
- 2018年
- 核酸适配体是指在体外利用指数富集的配基系统进化技术筛选得到的核酸(DNA或RNA)片段。基于核酸适配体的检测方法具有特异性高、稳定性好、易于修饰等优点,在真菌毒素检测领域得到了广泛的关注和应用。本文在传统检测方法的基础上,着重介绍核酸适配体在真菌毒素检测领域中的研究进展,并提出目前存在的问题及发展趋势。
- 李世雨傅强严亚贤
- 关键词：核酸适配体真菌毒素
- H-NS蛋白调控大肠杆菌CRISPR-Cas对Stx2噬菌体溶原的影响
- 为了研究大肠杆菌H-NS蛋白对CRISPR-Cas系统的调控及其对Stx2噬菌体ΦMin27溶原的影响,本文利用λRed同源重组系统构建了大肠杆菌MG1655的hns基因缺失株,通过检测Cas基因表达水平及CRISPR质...
- 傅强李世雨王兆飞程玉强王恒安严亚贤孙建和
- 关键词：大肠杆菌H-NS毒素
- 细菌CRISPR-Cas系统功能及其与噬菌体相互作用被引量：9
- 2015年
- 近来研究发现,细菌CRISPR-Cas系统在宿主菌抵抗可移动基因元件(mobile genetic elements,MGEs)的过程中发挥重要作用。CRISPR-Cas还参与宿主菌群体行为和毒力基因调控、DNA修复和基因组进化过程。本文着重综述细菌CRISPR-Cas系统的结构、类型、作用机制及其适应性免疫之外的其他功能(如对内源性基因表达的调控、促进基因组进化、DNA修复等);概述噬菌体抵抗CRISPR-Cas系统的机制,并对噬菌体-宿主菌相互作用进行探讨和展望。
- 傅强孙建和严亚贤
- 关键词：噬菌体适应性免疫相互作用
- 细菌CRISPR-Cas系统功能及其与噬菌体相互作用关系
- 近来研究发现,细菌CRISPR-Cas系统在宿主菌抵抗可移动基因元件(mobile genetic elements,MGEs)的过程中发挥重要作用.CRISPR-Cas还参与宿主菌群体行为和毒力基因调控、DNA修复和基...
- 傅强孙建和严亚贤
- 猪链球菌2型噬菌体裂解酶催化域A5的关键氨基酸位点的鉴定被引量：4
- 2016年
- 为了鉴定猪链球菌2型(Streptococcus suis 2)噬菌体裂解酶(Ly ACCG/Ly ACC)催化域A5的关键氨基酸位点,本研究利用NCBI、Pfam和Uniport数据库,对催化域A5的氨基酸序列中的各位点的保守性进行了比对分析;以噬菌体SMP基因组为模板,PCR扩增lyacc基因,测序分析后构建原核表达质粒p SJ2-lyacc;以质粒p SJ2-lyacc为模板,通过PCR扩增的方法将催化域A5中3个高度保守的氨基酸位点(30位的天冬氨酸/D30、53位的苏氨酸/T53和95位的甘氨酸/G95)的密码子分别定点突变为丙氨酸(A)的密码子,经测序确证后将突变体质粒p SJ2-lyacc/D30A、p SJ2-lyacc/T53A和p SJ2-lyacc/G95A分别转化BL21(DE3)感受态细胞,同时将质粒p SJ2-lyacc作为对照平行转化,用IPTG于27℃诱导表达,菌体重悬后超声裂解,上清液过滤,获得的蛋白粗提液经SDS-PAGE分析,表明重组裂解酶Ly ACC及其突变体D30A、T53A和G95A的分子质量均约为30 ku;将重组裂解酶Ly ACC及其突变体D30A、T53A和G95A的蛋白粗提液用于平板裂解试验,结果显示,原核表达的重组Ly ACC的裂菌圈直径为2.2 cm;突变体G95A的裂菌圈直径仅为1.4 cm,裂菌活性部分降低;突变体D30A和T53A的裂菌圈消失,彻底失去裂菌活性。上述结果表明,D30和T53是Ly ACC的关键氨基酸位点。
- 孙亮吉文汇傅强严亚贤曾巧英孙建和
- 关键词：猪链球菌2型裂解酶
