石坚
- 作品数：2 被引量：26H指数：2
- 供职机构：宁波大学海洋学院更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅项目浙江省公益性技术应用研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学天文地球更多>>
- 浙江省患病凡纳对虾副溶血弧菌的分离、鉴定及毒力基因分析被引量：5
- 2017年
- 对浙江省发病凡纳对虾进行了弧菌分离、鉴定,对分离菌株进行了API-20E生化鉴定,不耐热毒素基因tlh、致病基因tdh、trh和毒力基因pir的PCR检测,以及高致病性副溶血弧菌对小鼠致病性研究结果显示,150个分离菌株中共检出tlh基因菌株61株(40.67%),ap阳性菌株21株(14.00%);189个固定样品中检出副溶血弧菌阳性样品108个(57.14%),ap阳性样品24个(12.70%);所有tlh阳性样品中均未检出tdh、trh毒力基因;ap阳性副溶血弧菌灌胃小鼠死亡率为20%,且其培养上清液有弱溶血效价.表明副溶血弧菌在浙江省凡纳对虾弧菌感染中占有重要地位,高致病性副溶血弧菌在副溶血弧菌中占较高比例,ap阳性副溶血弧菌对小鼠具有一定毒力和溶血性.
- 方磊石坚夏武强张鑫孟庆珍陈铁枫徐锦余钱冬
- 关键词：副溶血弧菌毒力基因凡纳对虾
- 虾肝肠胞虫TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：21
- 2016年
- 为建立一种灵敏、特异、快速地检测虾肝肠胞虫的方法,以虾肝肠胞虫的保守序列为靶序列,利用Primer Premier 5.0和Primer Express 2.0软件分别设计引物和TaqMan探针,开展了虾肝肠胞虫的TaqMan荧光定量PCR检测技术研究。将虾肝肠胞虫目标片段克隆到p MD 19-T载体上构建重组质粒,然后以10倍梯度稀释的重组质粒作为标准品。根据标准品拷贝数与Ct值的关系绘制标准曲线,其斜率为-3.239,相关系数r^2=0.996。重复性试验结果表明,该方法 Ct值的变异系数为0.94%~1.13%,具有良好的稳定性。特异性检测结果显示,该方法对白斑综合征病毒、传染性皮下及造血组织坏死病毒、高致病性副溶血弧菌、微孢子虫感染的对虾肌肉组织等的检测结果均为阴性,表明无交叉反应,具有良好特异性。应用建立的方法对宁波和嘉兴地区15批凡纳滨对虾样品进行检测,发现有6批感染虾肝肠胞虫。利用标准曲线对感染虾肝肠胞虫的虾不同组织进行了定量分析。本研究建立的虾肝肠胞虫TaqMan荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,对虾肝肠胞虫病的快速诊断与病原定量检测有重要意义,可广泛应用于实验室和现场快速检测。
- 骆云慧石坚方磊孟庆珍张鑫钱冬
- 关键词：凡纳滨对虾TAQMAN荧光定量PCR
