王明钦
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 重组人胰岛素在毕赤氏酵母中的分泌表达被引量：2
- 2009年
- 利用套叠PCR技术合成重组人胰岛素基因,并在A链和B链之间加入Kex2酶切位点。将合成的重组人胰岛素基因以正确的阅读框插入到组成型分泌表达载体pGAPZα-A的α-factor信号肽序列的下游,构建成pGAPZα-A/Insulin重组分泌表达载体。表达载体用BlnI线性化处理后电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞,构建成分泌型表达Insulin的工程菌。SDS-PAGE和Native-PAGE的分析表明:蛋白在分泌表达过程中,加入Insu-lin的A链(2.4k)和B链(3.4k)之间的Kex2酶切位点发挥了作用,Kex2蛋白酶将A链和B链切开,在α-factor信号肽的作用下通过分泌途径将A链和B链分泌到胞外,同时A链和B链又以二硫键形成了高级结构。Western Blot结果表明:重组蛋白能够与鼠抗人Insulin抗体发生特异性反应,具有与天然Insulin相同的免疫原性。
- 何尧声沈文涛陈春宝王明钦周鹏
- 关键词：重组人胰岛素毕赤酵母分泌表达
- 应用酵母双杂交系统检测NIa-vpg与PRSV-CP蛋白间互作被引量：3
- 2008年
- 将NIa-vpg与GAL4-BD蛋白融合作为DNA结合域蛋白,将PRSV-CP与GAL4-AD蛋白融合作为激活域蛋白,排除自身激活作用后,共转化酵母菌,通过β-半乳糖苷酶活性检测以及氨基酸营养缺陷生长实验分析它们之间的相互作用。结果表明NIa-vpg与PRSV-CP在酵母中存在相互作用,PRSV病毒运动蛋白自身的相互作用在植株感染和致病过程中可能起着重要作用。
- 王明钦沈文涛何尧声周鹏
- 关键词：酵母双杂交
- 利用多重PCR技术快速鉴定番木瓜性别被引量：7
- 2008年
- 利用鉴定番木瓜雄性性别的特异基因片段(1001bp)的引物和鉴定番木瓜雄性、两性性别的特异基因片段(225bp)的引物,分别以5个品种番木瓜的3种性别植株的总DNA为模板进行多重PCR扩增,结果表明:以雄株总DNA为模板得到1个1001bp和1个225bp的扩增产物,以雌株总DNA为模板没有得到扩增产物,以两性株总DNA为模板得到1个225bp的扩增产物,根据多重PCR扩增结果,可以将番木瓜3种性别植株一次性鉴定出来。
- 何尧声沈文涛黎小瑛王明钦周鹏
- 关键词：番木瓜多重PCR性别鉴定
- PRSV NIa-pro、NIa-vpg、NIb酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测被引量：1
- 2008年
- 用PCR技术获得NIa-pro、NIa-vpg、NIb基因片段,将这些基因分别克隆到pBD-GAL4载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pBD-GAL4-NIa-pro、pBD-GAL4-NIa-vpg和pBD-GAL4-NIb。测序正确后,将重组质粒导入YRG-2酵母菌株,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用。结果表明,获得了正确的NIa-pro、NIa-vpg、NIb基因片段,并成功克隆到pBD-GAL4诱饵载体中,且转化有诱饵载体的YRG-2在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,说明表达产物对酵母细胞无毒性,对报告基因也无自激活作用,为下一步利用酵母双杂交系统检测与NIa-pro、NIa-vpg、NIb蛋白相互作用的蛋白奠定基础。
- 王明钦沈文涛周鹏
- 关键词：PRSV酵母双杂交诱饵载体
