徐倩
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南京大学生命科学学院医药生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人血管内皮抑制素vasostatin_(120-180)在大肠杆菌中的表达纯化及初步的抗血管生成活性研究被引量：2
- 2008年
- 目的:在大肠杆菌中克隆和表达人源血管内皮抑制素vasostatin120-180(VAS)基因,并进行分离纯化及抑制新生血管生成活性鉴定。方法:根据大肠杆菌偏爱密码子,应用化学合成和分子克隆方法得到人源血管内皮抑制素120-180片段(即VAS)的编码基因。通过PCR和限制性内切酶消解,将VAS编码基因克隆入大肠杆菌表达载体pET28a中,并在BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导、表达带有His融合标签的His-VAS重组蛋白。VAS蛋白的表达水平大约占细菌总蛋白的45%,大多数目的蛋白以包涵体形式存在,经过体外包涵体变性、复性及纯化,采用SDS-PAGE分析鉴定,用鸡胚尿囊膜血管生成抑制试验进行重组蛋白活性的生物活性鉴定。结果:经DNA序列分析鉴定,重组质粒pET28a-VAS构建成功,IPTG诱导后的融合蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,Western blotting分析并鉴定了VAS的分子属性。通过鸡胚尿囊膜试验验证,重组VAS蛋白能够很好地抑制微血管生成。结论:获得高效表达的、高纯度的VAS,为VAS进一步的功能分析和抑制血管生成活性研究奠定了基础。
- 徐倩孙启明华子春
- 关键词：偏爱密码子包涵体变复性
