刘云霞
- 作品数：7 被引量：22H指数：2
- 供职机构：上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- STING基因荧光定量检测方法的建立及其在鸭组织中的分布被引量：2
- 2017年
- 根据鸭STING基因预测序列,设计了2对特异性引物,通过试验条件摸索,首次建立了基于SYBR Green荧光定量PCR检测鸭STING基因方法,并使用该方法对STING在鸭不同组织中的含量进行检测。结果:本研究建立的检测方法,能检测低至4.8×10~3拷贝数/μL的样品;其标准曲线线性范围是3.5×10^(-5)~0.27 ng/μL,具有良好的重复性。组织分布研究发现,STING在腺胃中表达量最高,在气管、肺脏和小肠中表达量较高,在脾、肾、法氏囊、肌胃、肝、盲肠呈中等表达,在肌肉和皮肤中表达量最低。本研究成功建立了鸭STING基因的荧光定量PCR检测方法,为深入研究STING基因在鸭抗病毒感染中的作用奠定了基础。
- 石树端高全新程玉强刘云霞孙建和严亚贤
- 关键词：荧光定量PCR
- 犬细小病毒SH15株的分离鉴定与全基因组分析被引量：16
- 2017年
- 为了解上海地区犬细小病毒的流行及其变异情况,从疑似犬细小病毒感染的死亡犬采集各种组织,无菌处理病料后同步接种F81细胞,盲传至第5代出现细胞病变,从肠组织中分离出1株病毒。采用电镜进行病毒形态学观察,以及HA、HI和PCR等方法鉴定病毒,结果证实为犬细小病毒,命名为CPV-SH15。该病毒的血凝效价为2~9,病毒TCID_(50)为10^(5.2)/m L,测得病毒编码区基因序列的全长为4 869 bp,与上海分离毒株CPV/CN/SH1/2013的同源性为99.8%,亲缘关系较近,说明上海地区的犬细小病毒的遗传变异并不明显。对其VP2基因的氨基酸序列进行分析,确定该细小病毒属于New CPV-2a亚型。该研究为犬细小病毒遗传进化的进一步研究奠定了基础,从而为犬细小病毒病疫苗的研制以及防控提供参考。
- 张传鹏张航高全新刘云霞孙建和严亚贤
- 关键词：犬细小病毒
- 鸡MAVS(IPS-1)基因的克隆及其对IFN-β激活作用
- 2018年
- 为研究鸡线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial anti-viral signaling protein,MAVS)在I型干扰素信号通路中的作用,对克隆的鸡MAVS基因进行了生物信息学分析。结果表明,多数在哺乳动物MAVS中发挥重要作用的蛋白基序及氨基酸位点在鸡中不保守;对鸡MAVS与其他物种进行了进化分析,发现该基因具有较强的种间特异性;DF-1细胞在感染新城疫病毒后12h,MAVS和IFN-β的mRNA水平均被上调,提示鸡MAVS可能参与了细胞抗病毒免疫反应;同时在DF-1细胞中过表达鸡MAVS能够激活IFN-β启动子活性。上述研究揭示了鸡MAVS在诱导I型干扰素产生中具有重要作用,为进一步研究禽类先天性免疫抗病毒途径奠定基础。
- 刘云霞程玉强王逸豪严亚贤孙建和
- 关键词：信号通路IFN-Β
- 鸡TBK1基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用
- 2019年
- 为测定鸡TBK1(chTBK1)基因在家禽抗感染天然免疫中mRNA表达水平变化情况,本研究根据chTBK1序列,设计3对特异性引物,基于chTBK1和β-actin双标准曲线建立了荧光定量PCR(qRT-PCR)检测方法,并测定在禽流感病毒刺激下鸡成纤维细胞(DF-1)中chTBK1表达量的变化情况。结果表明,建立的标准曲线Ct值与模板浓度的对数呈现良好的线性关系(R^2均大于0.99),能特异地检测chTBK1,检测灵敏度可达59拷贝数/μL,且组内及组间变异系数小于2%;chTBK1在DF-1细胞中的mRNA水平在病毒刺激下呈现上升趋势。该qRT-PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,为研究chTBK1在鸡抗病毒感染中的作用提供了有效工具。
- 李世雨程玉强刘云霞朱雯娴孙建和严亚贤
- 关键词：实时荧光定量PCR
- 一株可裂解阴沟肠杆菌的T7样噬菌体的分离鉴定及基因组分析被引量：3
- 2019年
- 利用双层琼脂平板法,从上海地区某奶牛养殖场环境样品中分离、纯化一株针对阴沟肠杆菌的裂解性噬菌体,命名为vB_Ecop_S523(S523),可形成圆形、透明、边缘整齐的噬菌斑。透射电镜(TEM)观察显示,噬菌体头部直径约为58～59 nm,尾部较短,属于Podoviridae科。该噬菌体最佳感染复数为0.1,潜伏期为5 min,裂解量为90 PFU/感染细胞。酶切鉴定S523的核酸类型为双链DNA。测序结果表明,其基因组大小为39,825 bp,G+C含量为48.8%。同源进化分析显示该噬菌体属于T7样噬菌体新成员。上述结果为研究阴沟肠杆菌抑菌制剂提供了新的实验材料。
- 单文雅王兆飞杨登辉刘云霞王恒安严亚贤孙建和
- 关键词：阴沟肠杆菌生物学特性基因组分析
- 鸭IFN-β启动子双荧光素酶报告基因系统的构建及活性检测被引量：1
- 2018年
- 通过PCR方法扩增获得6个不同长度的鸭IFN-β启动子DNA片段,并连接至萤火虫荧光素酶报告质粒p GL3.0,构建包含6个鸭IFN-β启动子的报告质粒。分别将构建的报告质粒与内参报告质粒p RL-TK转染至DEF细胞,检测报告质粒在不同刺激下的荧光素酶活性。结果表明:包含鸭IFN-β启动子全长的报告质粒p GL-IFN-β-1593能够有效地被相应刺激物激活;截短研究表明,包含390 bp鸭IFN-β启动子的报告质粒p GL-IFN-β-453的荧光素酶活性与全长基本一致,且一定程度上可降低冗余碱基的不良影响,因此选取该质粒用于鸭IFN-β启动子活性检测。本研究建立的基于荧光素酶双报告基因系统的鸭IFN-β启动子活性检测方法,为后续鸭IFN-β通路研究提供了检测工具。
- 高全新刘云霞程玉强严亚贤孙建和
- 鸡IRF1与IRF7协调参与STING介导的IFN-β激活调控
- 干扰素-β（interferon-β,IFN-β）为Ⅰ型干扰素,具有广谱抗病毒、抗肿瘤活性,且有强大的免疫调节作用,对于禽类的先天性免疫及触发适应性免疫十分重要。干扰素调节因子（Interferonregulatoryf...
- 刘云霞程玉强严亚贤孙建和
- 关键词：IFN-Β
- 文献传递
