王佳明
- 作品数：8 被引量：25H指数：4
- 供职机构：安徽农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学生物学医药卫生更多>>
- 安氏隐孢子虫ABC2基因的克隆表达与营养物质转运
- 2017年
- 为探究安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni)ATP结合盒转运蛋白基因(CaABC2)对营养物质的转运功能,以安氏隐孢子虫基因组作为模板,设计合成CaABC2基因特异性引物,进行PCR扩增,获得CaABC2基因。将克隆的重组质粒CaABC2基因与真核表达质粒pEGFP-C1双酶切后再连接,构建重组真核质粒载体pEGFP-C1-CaABC2;再采用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-C1-CaABC2转入小鼠肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IEC),检测不同组IEC细胞对总胆固醇、还原型谷胱甘肽、葡萄糖和碱性磷酸酶的转运效果。结果表明:扩增出778bp的CaABC2基因,测序分析与预期片段大小一致;重组真核质粒载体pEGFP-C1-CaABC2转染小鼠IEC细胞后,观察到转染后的对照组和转染组IEC有绿色荧光;检测到在细胞内液中,转染组、对照组和空白组的总胆固醇浓度分别为15.99±0.12、11.80±0.35和12.43±0.16 mmol/L;还原型谷胱甘肽浓度分别为15.24±0.44、10.48±0.35和11.04±0.75mmol/L;在细胞外液中,转染组、对照组和空白组的总胆固醇浓度分别10.67±0.17、14.82±0.06和15.84±0.17 mmol/L;还原型谷胱甘肽浓度分别为10.20±0.79、14.60±0.45和15.60±2.50mmol/L。转染组总胆固醇、还原型谷胱甘肽浓度均显著大于空白组和对照组(P<0.05),而在细胞外液中,转染组总胆固醇、还原型谷胱甘肽的浓度均显著小于空白组和对照组(P<0.05)。在细胞内液和外液中,空白组与对照组总胆固醇、还原型谷胱甘肽的浓度之间均未见显著性差异(P>0.05);转染组、对照组和空白组之间的葡萄糖和碱性磷酸酶浓度均没有统计学差异(P>0.05)。CaABC2基因具有协助转运总胆固醇、还原型谷胱甘肽、葡萄糖和碱性磷酸酶的作用,其中转运总胆固醇效果最为明显。
- 王菊花王佳明刘丹丹王攀周杰薛秀恒
- 关键词：安氏隐孢子虫克隆表达
- 参与式教学法在《动物生理学实验》教学中的探索被引量：3
- 2016年
- 动物生理学实验课程是动物生理学教学中极其重要的一个环节。传统以教师为主体的实验教学模式已不适应新形势下对技能应用型人才培养的要求。该文针对目前动物生理学实验教学的现状和存在的问题,探讨了"参与式"教学法在本门课程教学设计和应用,并从学生自学和预习实验、参与课前准备、实验设计和内容、实验评价模式,初步进行教学改革和探索。以期激发学生学习兴趣,参与到实验教学中来,最终提高学生科研素质和创新能力。
- 王菊花王佳明孟秀丽丁建平周杰
- 关键词：参与式教学法动物生理学实验教学改革
- 禽源多重耐药金黄色葡萄球菌耐药基因检测及分子分型被引量：4
- 2018年
- 【背景】金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌,在动物和人身上能引起一系列疾病。【目的】了解安徽省不同地区禽源多重耐药金黄色葡萄球菌耐药性的情况及基因分型特征。【方法】以安徽不同地区的病禽肝脏作为标本,分离鉴定得到103株多重耐药金黄色葡萄球菌,并进行耐药基因型检测和ERIC-PCR分子分型。【结果】耐药菌株从三重到八重耐药均有分布,主要集中在五重(43/103)、四重(21/103)和六重耐药(22/103)。药敏结果显示,β-内酰胺类的耐药率最高(79.6%),氨基糖苷类次之(71.8%)。耐药基因检出率由高到低分别为mec A(92.2%)、aac(6′)/aph(2″)(76.7%)、ermC(37.9%)、ermA(13.6%)和fem A(3.9%)。ERIC-PCR分子分型获得6种不同类群,优势流行菌群为类群Ⅱ(38/103)。【结论】安徽地区金黄色葡萄球菌存在较严重的耐药性,氨基糖苷类、β-内酰胺类和大环内酯类抗生素的耐药基因携带率较高。分型结果表明安徽部分区域耐药金黄色葡萄球菌具有遗传多样性,但耐药谱与ERIC-PCR分子分型无明显关联。
- 刘茜秦祥刘丹丹王佳明王菊花方富贵潘玲王勇周杰
- 关键词：多重耐药耐药基因
- 鸡胚小肠上皮细胞的分离培养及其热应激效应被引量：4
- 2020年
- 【目的】比较不同消化酶对鸡胚小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IECs)的分离和培养效果及细胞的热应激能力,为后续研究提供依据。【方法】以15日龄鸡胚为研究对象,分别使用0.5 g/L胰蛋白酶、胶原酶Ⅰ与透明质酸酶联合及中性蛋白酶Ⅱ消化分离其小肠上皮细胞。培养不同时间后,观察IECs的生长状态,测定细胞生长活性;通过免疫荧光染色和免疫组化对所得IECs进行鉴定,确定最佳的消化酶。对优化所得鸡胚IECs于42℃分别进行2,3,4 h热应激处理,以37℃处理的IECs为对照,MTT法和流式细胞测定IECs的相对活力和凋亡率。【结果】细胞形态学观察发现,用胶原酶Ⅰ与透明质酸酶联合消化分离得到了大量小肠绒毛隐窝团块,易贴壁,细胞生长快;用0.5 g/L胰蛋白酶和中性蛋白酶Ⅱ消化分离得到的细胞数量少,贴壁慢。用3种酶消化方法分离的细胞生长曲线均呈“S”形,但用胶原酶Ⅰ与透明质酸酶联合消化分离的细胞生长曲线峰值较高,细胞活性强;联合消化所得IECs特异性标记抗原均为阳性,免疫荧光阳性率达(92.7±7.9)%,细胞膜质呈棕黄色,而对照组细胞膜质无着色。42℃下热应激3 h后细胞活力极显著下降,凋亡率为(35.96±1.57)%,极显著高于对照组的(0.67±0.02)%,可进行后续试验。【结论】采用胶原酶Ⅰ与透明质酸酶联合消化可得到IECs;42℃下处理3 h是构建IECs热应激模型的条件。
- 王菊花张粟子刘丹丹王佳明刘琦董静周杰薛秀恒
- 关键词：鸡胚小肠上皮细胞酶消化法热应激
- 动物生理学实验教学中实验动物的福利和利用被引量：3
- 2016年
- 动物生理学实验教学是建立在使用大量实验动物的基础上,随着实验动物使用量的增加,动物福利保护问题日益受到人们的关注。该文针对目前动物生理学实验教学的现状和存在的问题,通过增强学生动物福利保护意识,调整教学内容,合理计划实验动物的使用和利用电子资源,分析了动物生理学实验教学中实验动物的福利保护和利用,以期在动物生理学实验教学中实现资源利用的最大化,既保证了实验教学的质量和学生实践能力的培养,又能兼顾动物的福利保护问题。
- 王菊花王佳明丁建平周杰
- 关键词：生理学实验教学实验动物福利
- 山羊睾丸支持细胞分离培养及其氧化应激效果研究被引量：4
- 2019年
- 为探究在体外培养过程中山羊睾丸支持细胞(GSCs)存在的氧化应激问题,采用2步酶消化法分离和纯化GSCs,通过形态学观察、MTT法、油红染色和流式细胞鉴定细胞活度和纯度,再用不同浓度的H2O2处理GSCs,研究GSCs的活性、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性及其DNA指数(DI)的变化。结果表明:GSCs形态为多角形状;在培养至第5天时GSCs活性最强;油红O染色鉴定多数细胞胞质含有红色的脂滴;GATA4阳性细胞率达到88.27±3.29%;添加50μmol/L H2O2组细胞存活率与对照组相比差异不显著(P>0.05),其它各组均显著低于对照组(P<0.05);添加50μmol/L H2O2组MDA含量和SOD的活性均与对照组无显著性差异(P>0.05),而其他各组均与对照组有显著差异(P<0.05);细胞DNA倍体检测发现添加50μmol/L H2O2时,细胞DI为1.08±0.01,未出现异倍体;其他各组细胞DI分别为1.15±0.02、1.20±0.03、1.26±0.03和1.32±0.01,均有异倍体产生。本研究分离纯化了GSCs,并进行培养和鉴定,200μmol/L H2O2处理GSCs后,SOD活性显著降低,MDA含量显著增加,出现明显的异倍体,200μmol/L H2O2是建立GSC氧化应激模型的适宜浓度,以此为后期建立GSC氧化应激模型提供研究基础。
- 王菊花刘丹丹刘琦王佳明董静周杰薛秀恒
- 关键词：山羊支持细胞氧化应激
- 安徽部分地区动物源弯曲菌的分离鉴定及多位点序列分型被引量：4
- 2018年
- 【背景】弯曲菌是一种重要的食源性人兽共患病原菌,革兰氏阴性、微需氧、弯曲螺旋状。【目的】为了解安徽地区弯曲菌流行状况和分子遗传特征,对安徽6个不同地区动物源的弯曲菌进行分离鉴定,并研究分离株分子分型。【方法】通过形态学及培养特性观察、生化试验、PCR方法对菌株进行鉴定。以弯曲菌7个管家基因asp A、gln A、glt A、gly A、pgm、tkt和unc A为目的基因对分离株进行多位点序列分型,并制成遗传进化树。【结果】共分离到42株弯曲菌菌株,源自6个地区的分离株具有较为一致的形态特性和相似的生化特性。多位点序列分型结果显示,本研究中共获得32种ST型,共发现9种新的ST型(8190、8222、8223、8831、8833、8841、8832、8834和8843)和6个新的等位基因(gln A606、gln A607、glt A518、gly A680、pgm863和unc A541)。进化树结果显示,空肠弯曲菌与结肠弯曲菌遗传关系相差甚远,聚集归为两个大群,分别有5个分支和3个分支。【结论】安徽6个地区不同来源的空肠弯曲菌与结肠弯曲菌均有丰富的基因型,且没有明显优势的基因型。从遗传变异的角度来看,空肠弯曲菌复杂多样,结肠弯曲菌相对保守。
- 秦祥刘茜刘丹丹王佳明王勇周杰
- 关键词：空肠弯曲菌多位点序列分型
- 稀土壳糖胺螯合盐对热应激肉鸡生长性能和肉品质的影响被引量：3
- 2019年
- 为探究稀土壳糖胺螯合盐(Rare earth-chitosan chelate,RECC)对热应激黄羽肉鸡的生长性能和肉品质的影响。本研究选用1日龄的黄羽肉鸡(90只),按照饲养标准饲养至29日龄时开始热应激,试验持续2周。试验分为3组:即对照组(饲养温度约25℃+基础日粮)、热应激组(饲养温度约37℃+基础日粮)以及稀土组(饲养温度约37℃+基础日粮+0.03%RECC)。在热应激1和2周后,分别计算肉鸡平均日增重、料重比,并分析肉品质的变化。结果表明:热应激1周后,肉鸡平均日采食量各组间均无显著性差异(P>0.05);而平均日增重的变化是对照组显著高于热应激组(P<0.05)和稀土组(P<0.01),热应激组和稀土组未见显著性差异(P>0.05);对照组腿肌pH显著高于稀土组(P<0.05);对照组腿肌剪切力与热应激组和稀土组差异均极显著(P<0.01)。热应激2周后,对照组平均日采食量显著高于热应激组(P<0.05)和稀土组(P<0.01),而热应激组和稀土组之间无显著性差异(P>0.05);热应激组平均日增重显著低于对照组和稀土组(P<0.05),对照组与稀土组之间未见显著性差异(P>0.05);各组间腿肌pH和剪切力均无显著差异(P>0.05);热应激组腿肌持水力显著低于与对照组和稀土组(P<0.01)。热应激1和2周后,对照组胸肌pH、持水力均显著高于热应激组和稀土组(P<0.05);而剪切力均显著低于热应激组和稀土组(P<0.05)。研究发现,随着热应激时间的延长,RECC可改善热应激对肉鸡日增重的影响,提高饲料利用率,缓解热应激对肌肉持水力损害,改善肉品质。
- 王菊花刘琦董静王佳明刘丹丹周杰薛秀恒
- 关键词：黄羽肉鸡热应激肉品质
