李莉
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 封闭N-cadherin解整合素金属蛋白酶水解位点的单链抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的制备封闭神经型钙黏素(N-cadherin)解整合素金属蛋白酶水解位点(ADAM)的单链抗体(scFv),并进行鉴定。方法首先利用RT-PCR技术从分泌抗N-cadherin的ADAM水解位点单克隆抗体(mAb)细胞株中扩增出重链(V_H)和轻链(V_L)可变区基因片段,然后通过重叠延伸PCR法(SOE-PCR),构建成scFv基因片段。再将其克隆入原核表达载体pET-28a中,在大肠杆菌中诱导表达,通过镍柱纯化和复性后,用SDS-PAGE、ELISA和Western blot法等测定重组蛋白的生物学活性。结果PER、酶切和测序表明scFv片段长744 bp,编码248个氨基酸。scFv基因表达载体转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达出相对分子质量(M_r)约29 000的目的蛋白,主要为包涵体形式,经变性,纯化和复性后,获得纯度达90%以上的scFv蛋白,ELISA和Western blot法检测表明可溶性scFv可以与N-cadherin的ADAM水解位点序列多抗原短肽和全长N-cadherin结合。结论成功构建并表达封闭N-cadherin的ADAM加工位点单链抗体。
- 李小鸥黄巍李莉周丽荣
- 关键词：ADAM10N-CADHERIN单链抗体基因表达
