吴海洋
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划天津市高等学校科技发展基金计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程更多>>
- Pichia pastoris细胞的酶法水解
- 2017年
- 以工业酶制剂生产中的废弃毕赤酵母细胞为对象,研究并建立了酶法制备酵母浸出物的新工艺。新工艺为:10%(w/v)废弃毕赤酵母菌体中加入β-甘露聚糖酶、β-葡聚糖酶和果胶酶,于50℃作用12 h;再加入中性蛋白酶,于50℃作用7 h;再加入DNA酶和RNA酶,于37℃作用4 h。离心收集上清液,真空冷冻(或喷雾)干燥获得酵母浸出物。运用这一技术,酵母细胞组分的溶出率达到66.2%,固形物收得率为65.7%。使用该研究制得的酵母浸出物培养重要工业微生物菌种,其支撑细胞生长繁殖的效果显著优于市售酵母粉。
- 张永杰牛丹丹吴海洋黄磊董自星刘晓光叶秀云路福平
- 关键词：酵母浸出物酶法制备毕赤酵母
- 解淀粉芽胞杆菌α-淀粉酶高活力突变体的创建与性质研究被引量：3
- 2017年
- 为进一步提高解淀粉芽胞杆菌α-淀粉酶(Bacillus amyloliquefaciensα-amylase,BAA)发酵生产与应用性能,对BAA编码基因实施了体外随机突变,建立了含有2×10~4个转化子的BAA突变库。BAA编码基因的突变频率为56%,基因突变效率为2.8/kb DNA,错义突变26.8%;以平板筛选法和摇瓶发酵法对BAA突变库进行筛选,得到6个酶活力显著提高的突变体,其中突变体BAA28的酶活力提高最多,提高达37%;进一步分析突变体BAA28序列,发现其4个氨基酸残基发生突变,分别是:T341P、P348L、T356P和P362L,其中T341P和T356P位于无规卷曲结构中,P348L位于α-螺旋结构中,P362L位于β-折叠结构中。进一步制备与纯化BAA28,并比较分析其酶学特征,与野生型BAA相比,BAA28的离子依赖性、热稳定性发生了显著变化;BAA28的比酶活提高了约31%,κcat/Km值提高了92%。突变体BAA28较BAA在催化与应用属性上有了显著提升,可应用于后续中温α-淀粉酶高产新菌种的构建并可显著改善其工业应用性能。
- 牛丹丹靳晓吴海洋刘晓光林娟叶秀云
- 关键词：突变体
- 耐热异淀粉酶的高效表达及其在麦芽糖浆制备中的作用被引量：3
- 2016年
- 淀粉酶法制备高麦芽糖浆工艺中，淀粉液化酶、脱支酶以及β-淀粉酶不可或缺，其中脱支酶是决定淀粉转化为麦芽糖的转化率高低的关键因素。在工业上常用的两种脱支酶中，异淀粉酶比普鲁兰酶能更好地协助β-淀粉酶水解淀粉生成麦芽糖。首先通过PCR扩增获得异淀粉酶的编码基因iso并克隆入表达载体pHY—WZX，在枯草芽胞杆菌1A717中获得重组质粒pHY—ISO，将构建好的重组质粒电转化入地衣芽孢杆菌D402中，其摇瓶发酵酶活力达330U／mL，实现了异淀粉酶的异源高效表达。基本酶学特征分析表明：该重组酶适宜反应条件为50～55℃，pH6．5～9．0；K＋、Ca2＋、Mg2＋对酶活有促进作用，其他离子或化合物强烈抑制酶活。HPLC分析表明，该重组异淀粉酶与普鲁兰酶相比，更有助于极高麦芽糖浆的制备。最后通过在线软件对该酶进行同源结构模拟和分析，进一步确定其为异淀粉酶，为后续对其进行分子改造奠定了基础。
- 方安然牛丹丹乔舰吴海洋董自星路福平
- 关键词：异淀粉酶
