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董自星: 作品数：13 被引量：27H指数：3; 供职机构：天津科技大学生物工程学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>; 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>

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一株具有藻毒素清除功能的干酪乳杆菌细胞高密度发酵条件优化被引量：1: 2012年; 为提高一株具有藻毒素清除能力的干酪乳杆菌Lactobacillus casei BBE10-212单位体积的活菌数,针对其营养需求,研究了不同碳源、氮源、缓冲盐、微量元素及生长因子对该菌株生长情况及发酵特性的影响。通过响应面法对碳源、氮源、生长因子等进行优化,获得最佳培养基配方为:α-乳糖43.8 g/L,酵母膏79.5 g/L,无水乙酸钠13.12 g/L,冰醋酸9.17 ml/L,MnSO_4·H_2O 190mg/L,吐温-80 5.15 mL/L。经37℃培养18 h,菌体干重达到4.97g/L,比在普通MRS培养基中(1.32 g/L)提高近4倍。基于乳酸菌发酵过程中的产酸特性,通过外源添加5 g/L谷氨酸,促使菌体浓度进一步提高15%,并提前1.2 h进入生长稳定期。上述研究结果为食品行业重要生产菌株干酪乳杆菌的高密度培养技术提供了可借鉴的研究思路。; 张娟顾磊董自星堵国成陈坚; 关键词：干酪乳杆菌响应面法谷氨酸

植物乳杆菌BBE7的胆盐水解酶基因在毕赤酵母中的分泌表达被引量：2: 2014年; 由于用大肠杆菌对植物乳杆菌来源的bsh基因进行胞内和胞外表达时,它们很容易形成包涵体,而且大肠杆菌的内毒素会显限制BSH的应用,所以利用毕赤酵母这一高效的表达系统对其进行了分泌表达.首先用融合PCR的方法将信号肽α-factor与BSH连接,然后再克隆到质粒pPIC9K上,得到重组质粒pPIC9K-α-factor-BSH.重组质粒经过SalⅠ线性化后转化至毕赤酵母GS115.表达产物经SDS-PAGE分析和酶活测定发现,重组BSH的相对分子质量(Mr)和胞外酶活分别为37.0×103和1.08 U mL-1.通过正交实验[L9(34)]对发酵条件优化后,胞外总酶活达到2.69 U mL-1,比原来提高了1.49倍.研究为胆盐水解酶的分离纯化、酶学性质研究以及大规模生产奠定了一定的基础.; 董自星张娟李炳薰堵国成陈坚李华钟; 关键词：胆盐水解酶毕赤酵母分泌表达正交试验设计

碱性蛋白酶的异源表达及其在制备CPP中的应用被引量：1: 2016年; 碱性蛋白酶是现代工业酶制剂中最重要的酶类之一,在人类日常生活中扮演着非常重要的角色.本研究以嗜碱芽胞杆菌(B.alcalophilus)TCCC11006基因组为模板,从中扩增出碱性蛋白酶基因apr,并构建重组表达质粒p HYapr,将重组质粒电转入蛋白酶基因缺失的地衣芽胞杆菌(B.licheniformis)H115中,实现了碱性蛋白酶的分泌表达.重组菌在LB培养基中最高酶活力达到3,199,U/m L,是出发菌株酶活力的1.82倍,发酵周期缩短了8,h.然后通过单因素和正交实验对重组碱性蛋白酶水解酪蛋白的工艺参数进行优化,确定了最佳水解温度、p H和酶添加量分别为50,℃、9.5和4,000,U/g.在最佳水解条件下,通过钡-乙醇沉淀的方法制备生物活性肽——酪蛋白磷酸肽(CPP),其得率和氮磷物质的量比分别为14.8%,和8.47.这为碱性蛋白酶在功能性食品制造方面的应用奠定了良好的基础.; 凌敏董自星李玉叶松王正祥路福平; 关键词：碱性蛋白酶异源表达水解酪蛋白磷酸肽

植物乳杆菌中胆盐水解酶的研究现状及展望被引量：1: 2014年; 益生菌的降胆固醇作用与它们所产的胆盐水解酶(bile salt hydrolase,BSH)有关,这使得胆盐水解酶成为近年来研究的热点之一。文中主要对植物乳杆菌中胆盐水解酶的克隆表达、生化特性以及降胆固醇作用等方面的研究现状进行了综述,并展望了它未来的发展方向。以期对植物乳杆菌胆盐水解酶的研究及其相关制品的开发利用提供一定的指导意义。; 董自星张娟李炳薰堵国成陈坚李华钟; 关键词：胆盐水解酶植物乳杆菌克隆表达生化特性

Pichia pastoris细胞的酶法水解: 2017年; 以工业酶制剂生产中的废弃毕赤酵母细胞为对象,研究并建立了酶法制备酵母浸出物的新工艺。新工艺为:10%(w/v)废弃毕赤酵母菌体中加入β-甘露聚糖酶、β-葡聚糖酶和果胶酶,于50℃作用12 h;再加入中性蛋白酶,于50℃作用7 h;再加入DNA酶和RNA酶,于37℃作用4 h。离心收集上清液,真空冷冻(或喷雾)干燥获得酵母浸出物。运用这一技术,酵母细胞组分的溶出率达到66.2%,固形物收得率为65.7%。使用该研究制得的酵母浸出物培养重要工业微生物菌种,其支撑细胞生长繁殖的效果显著优于市售酵母粉。; 张永杰牛丹丹吴海洋黄磊董自星刘晓光叶秀云路福平; 关键词：酵母浸出物酶法制备毕赤酵母

黑曲霉天冬氨酰氨肽酶的分子克隆与酶学性质解析被引量：2: 2017年; 以黑曲霉CICIM F0510的互补DNA(complementary DNA,c DNA)为模板,通过PCR扩增出一个新的天冬氨酰氨肽酶基因(vacuolar aspartyl aminopeptidase,vaap),并成功将其在毕赤酵母GS115中进行表达。摇瓶水平上,重组菌GS115(p PIC9K-vaap)的氨肽酶酶活达到39.7 U/mL。该酶的最适反应温度和pH值分别为55℃和9.5;在90℃或pH 8.0~10.0孵育1 h后,该酶仍能保持20%或80%以上的酶活;Sn^(2+)和Co^(2+)对其酶活有明显促进作用,Fe^(3+)、Ca^(2+)、EDTA和SDS对其有抑制作用;该酶对L-亮氨酰对硝基苯胺(Leu-p NA)的Km和Vmax分别是12.96 mmol/L和2.14μg/(mL·min)。在所测的8种底物中,Leu-p NA是Vaap最适底物,且它对丙氨酸对硝基苯胺(Ala-p NA·HCl)和赖氨酸对硝基苯胺(Lys-p NA·2HCl)也有一定的水解能力。; 乔雅丽董自星宋鹏刘晓光刘晓光; 关键词：黑曲霉分子克隆酶学性质

黑曲霉内切β-1,3(4)-葡聚糖酶的基因克隆与酶学特性分析被引量：6: 2016年; 基于黑曲霉CBS 513.88的基因组信息,以黑曲霉CICIM F0510为出发菌株,提取其总RNA,反转录得到c DNA,成功将其3个内切β-1,3(4)-葡聚糖酶的基因(en3g A、en3g B、en3g C)在毕赤酵母中进行了克隆与表达。获得了3个重组菌GS115(p PIC-en3g A)、GS115(p PIC-en3g B)和GS115(p PIC-en3g C)。在摇瓶水平上,这株重组菌的酶活分别为1.3、8.5和10.1 U/m L。重组酶En3g A、En3g B和En3g C的最适作用温度分别为65、50和55°C;最适作用p H分别为5.0、5.0和3.5。此外,3种重组酶对羧甲基纤维素钠(sodium carboxymethylcellulose,CMC-Na)和凝结多糖都具有典型的内切水解作用。这3个重组β-1,3(4)-葡聚糖酶具有良好的温度和p H稳定性,可为其在啤酒制造以及饲料加工过程中的应用奠定基础。; 董自星李伟国佟新新田康明路福平; 关键词：黑曲霉酶学特征

耐热异淀粉酶的高效表达及其在麦芽糖浆制备中的作用被引量：3: 2016年; 淀粉酶法制备高麦芽糖浆工艺中，淀粉液化酶、脱支酶以及β-淀粉酶不可或缺，其中脱支酶是决定淀粉转化为麦芽糖的转化率高低的关键因素。在工业上常用的两种脱支酶中，异淀粉酶比普鲁兰酶能更好地协助β-淀粉酶水解淀粉生成麦芽糖。首先通过PCR扩增获得异淀粉酶的编码基因iso并克隆入表达载体pHY—WZX，在枯草芽胞杆菌1A717中获得重组质粒pHY—ISO，将构建好的重组质粒电转化入地衣芽孢杆菌D402中，其摇瓶发酵酶活力达330U／mL，实现了异淀粉酶的异源高效表达。基本酶学特征分析表明：该重组酶适宜反应条件为50～55℃，pH6．5～9．0；K＋、Ca2＋、Mg2＋对酶活有促进作用，其他离子或化合物强烈抑制酶活。HPLC分析表明，该重组异淀粉酶与普鲁兰酶相比，更有助于极高麦芽糖浆的制备。最后通过在线软件对该酶进行同源结构模拟和分析，进一步确定其为异淀粉酶，为后续对其进行分子改造奠定了基础。; 方安然牛丹丹乔舰吴海洋董自星路福平; 关键词：异淀粉酶

地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶嗜碱突变体的特征分析被引量：3: 2017年; 地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶是工业上重要的蛋白酶类,进一步提高其在碱性条件下的活力可改善其在洗涤剂工业方面的应用价值。该研究通过筛选获得一种在碱性条件下酶活水平显著提高的地衣芽胞杆菌B186来源的蛋白酶,并在枯草芽胞杆菌WB600中对其编码基因进行了成功克隆与表达,获得了重组菌WB600(pHYE209)。然后通过离子交换色谱和凝胶层析法,从重组菌的发酵液中纯化获得了重组碱性蛋白酶AprE209。对酶学性质的研究表明,重组酶Apr E209的最适作用pH为11.0,最适作用温度为50℃,在30~37℃下和pH12.0时仍具有很高的活力。进一步通过生物信息学的手段对其耐碱机制进行了初步解析。该嗜碱突变体具有进一步用于洗涤剂的潜在研究价值。; 黄磊董自星金鹏王正祥路福平; 关键词：蛋白酶洗涤剂行业酶学特征

黑曲霉果糖基水解酶的重组表达及酶学特征分析被引量：5: 2017年; 目的:果糖基转移酶在新型果糖基衍生品的制备过程中具有重要作用,获得酶活高、性能优良的果糖基水解酶是关键。方法:利用MEGA 4.0以及Clustal X2等软件对黑曲霉的基因组进行分析,遴选了5个果糖基水解酶基因,接着将它们在毕赤酵母中进行了克隆表达,并研究了重组酶的酶学性质。结果:在摇瓶水平上,重组酶Fru1和Fru5的酶活分别为1360和1560 U/m L,远高于目前已报道的果糖基水解酶的酶活。重组酶Fru1的最适反应温度和p H分别为45℃和5.5,EDTA对它有微弱的促进作用,Fe^(2+)、Na+、Co^(2+)、Cu^(2+)和Ca^(2+)会轻微地抑制酶活,该酶对蔗糖既有水解作用,又有转苷活性,还可以水解菊粉中的二糖到五糖;重组酶Fru5的最适反应温度和p H分别为50℃和5.0,Li^+、Na^+和EDTA对其酶活有促进作用,但Fe^(2+)则强烈抑制酶的活性,它还可以水解蔗糖以及菊粉中几乎所有的大分子糖。结论:本研究为果糖基水解酶的工业化生产及其在新型果糖基衍生品制备过程中的应用提供了可能途径。; 董自星肖华王静培张志萌王君路福平; 关键词：黑曲霉酶学性质

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