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王彦芳: 作品数：19 被引量：27H指数：3; 供职机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项动物营养学国家重点实验室开放课题基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>

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SCD基因敲除的猪胎儿成纤维细胞系及其构建方法: 本发明提供SCD基因敲除的猪胎儿成纤维细胞系及其构建方法。利用CRISPR/Cas9系统编辑猪SCD基因，打靶位点位于SCD基因第二外显子，可以有效地敲除SCD基因，得到SCD基因敲除猪胎儿成纤维细胞，该敲除细胞可用于制...; 王彦芳刘璐璐王煜陶聪梁小娟刘嘉莉; 文献传递

ITGA2基因在调控猪米色脂肪形成中的应用: 本发明公开了ITGA2基因在调控猪米色脂肪形成中的应用。本发明利用RNA‑seq技术，通过分析藏猪成熟米色脂肪细胞和白色脂肪细胞的基因表达差异，筛选出米色脂肪特异性的高表达基因，并基于人、鼠、猪比较基因组学技术，成功鉴定...; 陶聪张立兰王彦芳陈川河刘嘉莉

UCP3基因在巴马猪和藏猪脂肪组织中的表达和甲基化分析被引量：4: 2019年; 为探究解偶联蛋白3(uncoupling protein 3,UCP3)基因在巴马猪和藏猪皮下脂肪组织中的表达和甲基化水平,试验采用实时荧光定量PCR技术检测UCP 3基因在巴马猪和藏猪皮下脂肪组织中的mRNA表达水平;针对猪UCP 3基因启动子区域(-3580^+920 bp),利用在线软件MethPrimer对该区域进行CpG岛预测,并采用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测其甲基化水平,探究UCP 3基因甲基化水平在巴马猪和藏猪中的差异。结果显示,巴马猪皮下脂肪组织UCP 3基因表达量显著高于藏猪(P<0.05);在UCP 3基因启动子区预测到3个CpG甲基化岛,分别是CpG island1(-3171^-2928 bp)、CpG island2(-154^-2 bp)和CpG island3(+648^+806 bp),其中CpG island1和CpG island3的甲基化水平在巴马猪和藏猪中差异较小,而藏猪CpG island2的甲基化水平(42.61%)高于巴马猪(24.49%)。本研究绘制了2个猪种CpG island2甲基化水平的黑白点图,其中CpG位点为4、8、9、10、11、12、15,藏猪甲基化频率分别比巴马猪高28.26%、17.39%、26.09%、26.09%、26.09%、23.91%和34.78%。在CpG island2处预测到3个转录因子结合位点(SP2、PPARγ和EGR1)。结果表明,巴马猪和藏猪皮下脂肪组织中UCP 3基因mRNA水平的表达差异可能是由于CpG island2的甲基化水平不同所导致,藏猪DNA甲基化水平在一定程度上阻碍了转录因子与启动子调控区域的结合,从而抑制了UCP 3基因的表达。; 范一萍王彦芳陶聪; 关键词：藏猪 UCP 脂肪组织甲基化

碱基编辑器介导的猪IGF2基因高效定点突变被引量：4: 2020年; 本研究旨在利用碱基编辑器在巴马猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast cells,PFFs)中对生长性状相关基因胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)进行高效、精确的定点编辑。通过PCR扩增和测序对巴马猪和大白猪的IGF2基因序列进行鉴定,构建靶向巴马猪的sgRNA-IGF2表达载体,进而通过细胞转染、混合细胞编辑效率检测、单克隆细胞筛选及基因型鉴定等技术手段研究不同碱基编辑器对猪IGF2基因靶点的编辑效率及突变类型。结果显示,巴马猪和大白猪IGF2基因第3内含子存在第3072 bp处的单核苷酸多态性(SNP)位点,设计靶向巴马猪IGF2基因的单链寡核苷酸序列。单链寡核苷酸经退火后与BsaⅠ线性化的pGL3-U6-sgRNA质粒进行重组连接,构建sgRNA-IGF2表达质粒,重组质粒测序结果表明,sgRNA序列已经精确连入U6启动子和sgRNA骨架之间。将rA1-BE3、hA3A-BE3、hA3A-BE3-Y130F和hA3A-eBE-Y130F 4种胞嘧啶碱基编辑器分别与sgRNA-IGF2表达质粒共转染至猪胎儿成纤维细胞中,对混合细胞编辑效率进行检测结果表明,对于IGF2基因靶点,hA3A-BE3系列碱基编辑器C到T的编辑效率显著高于rA1-BE3(P<0.05)。流式分选、单克隆细胞培养及鉴定结果表明,虽然有71.43%的hA3A-BE3单克隆细胞已被编辑,但有42.86%的细胞存在插入和缺失(indels);hA3A-BE3-Y130F和hA3A-eBE-Y130F的编辑效率(56.86%和40.38%)虽低于hA3A-BE3(71.43%),但是indels的效率也较低(31.37%和21.15%)。测序结果分析表明,利用碱基编辑器高效筛选到IGF2基因靶点纯合点突变的单克隆细胞。碱基编辑器作为新的基因编辑工具,可以对猪基因组中与经济性状关联的SNP位点进行高效、精确的基因修饰,为加速猪经济性状的遗传改良提供理论与实践基础。; 王煜宋瑞高赵建国王彦芳; 关键词：IGF2基因定点突变

RNF20及其介导的组蛋白H2B单泛素化对小鼠棕色脂肪细胞分化的影响: 2020年; 旨在研究RNF20及其介导的组蛋白H2B第120位赖氨酸的单泛素化(H2Bub)对小鼠棕色脂肪细胞成脂分化的影响。采集1日龄和2月龄雄性C57BL/6小鼠的棕色脂肪组织(n=3),用Western blot方法检测RNF20的表达及其介导的H2Bub水平。利用胶原酶消化法分离获得1日龄小鼠的棕色前体脂肪细胞。分别诱导棕色前体脂肪细胞和C3H10T1/2细胞系成脂分化,通过油红O染色检测其分化效果,进一步通过Western blot检测细胞分化前后(0和8 d)RNF20的表达及其介导的H2Bub水平。通过siRNA干扰Rnf20基因在C3H10T1/2细胞系中的表达,油红O染色方法观察Rnf20基因对成脂分化的影响,利用qPCR和Western blot技术检测Rnf20基因的干扰效率及其介导的H2Bub水平。结果显示,2月龄小鼠棕色脂肪组织中RNF20表达量及其介导的H2Bub水平均显著高于1日龄小鼠。脂肪细胞分化标记蛋白PPARγ和CEBPα的表达水平,RNF20表达量及其介导的H2Bub水平在棕色前体脂肪细胞及C3H10T1/2细胞成脂分化后均显著增加。此外,在C3H10T1/2细胞中敲降Rnf20基因后,与阴性对照组相比,RNF20及其介导的H2Bub水平显著降低,成脂分化后脂滴明显减少。综上表明,RNF20对小鼠棕色脂肪细胞的分化是必需的,敲降Rnf20基因导致组蛋白H2Bub水平显著降低,且降低了C3H10T1/2细胞的成脂分化效率。本研究丰富了小鼠棕色脂肪细胞分化过程中的表观遗传调控研究,为深入理解动物脂肪细胞分化提供了新的基因素材。; 梁小娟陶聪赵莹王超刘璐璐王彦芳; 关键词：成脂分化小鼠

Glut4突变调控脂肪重分布及肌纤维重塑的机制研究被引量：3: 2021年; 旨在探讨Glut4基因突变后骨骼肌能量代谢及肌纤维转化的分子机制。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建Glut4^(Q177L)突变鼠。选取22周龄健康的野生雄鼠和Glut4^(Q177L)突变雄鼠,即试验分为两组,每组3只,3个重复,进行表型评价和糖耐量、胰岛素耐量试验;荧光定量检测两组小鼠腓肠肌葡萄糖转运蛋白、脂代谢、肌纤维类型相关调控基因的表达差异;Western blot测定腓肠肌AMPK及其磷酸化蛋白含量。结果表明,突变鼠皮下脂肪和附睾脂重量显著低于对照组(P<0.05);突变鼠糖耐量曲线下面积极显著增加(P<0.01),表明其糖耐量受损;突变鼠血清中甘油三酯的含量显著下降(P<0.05)。相较于野生型小鼠,Glut4^(Q177L)突变鼠腓肠肌中Glut4、Glut1和Glut12等多个葡萄糖转运蛋白表达量显著升高(P<0.05);葡萄糖摄取受限导致调控能量代谢关键基因AMPK在mRNA、蛋白和磷酸化修饰水平均显著升高(P<0.05),同时促进与脂肪酸摄取与合成代谢相关的CD36和ATGL等基因表达上调(P<0.05);慢速氧化型肌纤维(I型)和快速氧化型肌纤维(IIa型)相关基因表达极显著升高(P<0.01),而快速酵解型纤维(IIb型)相关基因表达显著降低(P<0.05)。本研究结果显示,Glut4葡萄糖结合关键位点突变降低了骨骼肌和脂肪葡萄糖摄取能力,通过上调其它转运蛋白增加葡萄糖摄取;激活AMPK信号通路及分泌肌细胞因子调控脂肪分解以满足能量需求;促进线粒体丰富的氧化型肌纤维生成以提高能量利用效率。Glut4突变不仅可以为骨骼肌胰岛素抵抗提供有效的动物模型,还可以为家畜生物育种提供基因编辑参考位点。; 谢宁张凯艺阮进学陶聪陶聪吴添文王彦芳; 关键词：GLUT4 骨骼肌脂代谢肌纤维类型

小型猪2型糖尿病模型的构建方法及应用: 本发明公开了小型猪2型糖尿病模型的构建方法及应用。本发明提供了一种构建猪2型糖尿病模型的方法，可包括如下步骤：将GIPRdn蛋白的编码基因、hIAPP蛋白的编码基因和PNPLA3I148M...; 杨述林张凯艺朱文娟阮进学王彦芳吴添文陶聪; 文献传递

冷刺激小鼠脂肪组织差异表达长链非编码RNA的初步研究被引量：1: 2015年; 脂肪组织主要有白色脂肪组织(WAT)和褐色脂肪组织(BAT)两种类型;WAT储存能量,BAT通过特异性表达解耦联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)消耗能量产热。与BAT不同,WAT具有很强的可塑性,在寒冷刺激下,呈现褐色脂肪表型、获得褐色脂肪的产热活性("褐色化")。根据对冷刺激组(6℃)和对照组(28℃)小鼠的肩胛区褐色脂肪组织(iBAT)和皮下白色脂肪组织(sWAT)的RNA转录组测序分析结果,初步筛选出1个差异明显的长链非编码RNA(lncRNA-6030408B16Rik)。通过qRT-PCR检测lncRNA-6030408B16Rik在野生型小鼠的脾脏、肌肉、肾脏、十二指肠、大脑、肝脏、sWAT和iBAT中的表达;24只雄性C57BL/6野生型小鼠随机分成冷刺激组(6℃)和对照组(28℃),两组小鼠分别在6和28℃环境下处理10d,分别采集两组的iBAT和sWAT;并分离出生1d的野生型小鼠褐色前脂肪细胞,诱导分化后,收集0、1、3、5d的细胞,检测UCP1基因和lncRNA-6030408B16Rik在分化过程中的时空表达。qRT-PCR结果显示iBAT和sWAT中lncRNA-6030408B16Rik的表达量均明显高于其他组织;与对照组相比,冷刺激组iBAT中lncRNA-6030408B16Rik的表达量极显著上调(P<0.01),冷刺激组sWAT中lncRNA-6030408B16Rik的表达量显著上调(P<0.05);前脂肪细胞诱导分化的过程中,lncRNA-6030408B16Rik的表达量呈先上调后下调的趋势。lncRNA-6030408B16Rik在脂肪组织中特异性高表达。lncRNA-6030408B16Rik可能对白色脂肪组织"褐色化"及褐色前脂肪细胞的分化具有重要的调控作用。; 黄素娟陶聪甄二东王亚君魏刚白立景杨述林王彦芳李奎敖红; 关键词：小鼠白色脂肪组织褐色脂肪组织前脂肪细胞分化长链非编码RNA

环指蛋白Rnf20基因的应用: 本发明提供环指蛋白Rnf20基因的应用。本发明利用Cre‑loxp系统，通过Rnf20Flox/Flox鼠与Adiponectin‑Cre+鼠交配，成功制备脂肪组织特异性Rnf...; 王彦芳梁小娟陶聪王超王亚君; 文献传递

蓖麻蛋白对人外周血B淋巴细胞的作用及相关基因表达的研究: 2016年; 试验旨在研究蓖麻蛋白对人外周血B淋巴细胞(IM-9)毒性作用及对相关基因表达的影响。将提取的蓖麻蛋白按不同浓度添加到培养基培养6、12h,研究剂量-时间效应,确定半数抑制浓度,然后以半数抑制浓度培养细胞2、6、10、12h,在每个时间段检测免疫相关基因CD40、IL-1β、TNF-α和凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达情况。结果表明,蓖麻蛋白对IM-9细胞的毒性作用随浓度和时间的增加而增强。取接近半数抑制浓度20ng/mL作用IM-9细胞2、6、10、12h,免疫相关基因中,TNF-α和CD40基因在6h试验组表达量与对照组相比显著升高(P<0.05),10、12h达到极显著水平(P<0.01);IL-1β基因表达量试验组、对照组间差异不显著(P>0.05)。凋亡基因中,与对照比相比,试验组Bax基因表达量10h极显著降低(P<0.01),12h显著降低(P<0.05);Bcl-2基因表达量4个时间段均达到显著水平(P<0.05),2、12h达到极显著水平(P<0.01);Caspase-3基因除6h表达量降低外,其他时间段表达量均显著升高(P<0.05),2h为极显著水平(P<0.01)。表明蓖麻蛋白能显著影响IM-9细胞的基因表达,TNF-α和CD40基因是两个潜在用IM-9细胞评价蛋白毒性的检测基因。; 甄二东黄素娟化朝举陶聪杨述林王彦芳周荣敖红李奎; 关键词：蓖麻蛋白外周血B淋巴细胞基因表达

王彦芳

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