杨永龙
- 作品数：2 被引量：13H指数：1
- 供职机构：新疆农业大学动物医学学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划新疆维吾尔自治区高校科研计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 马疱疹病毒1型囊膜蛋白gD多克隆抗体制备及亚细胞定位
- 2017年
- 本研究通过间接免疫荧光技术,确定了EHV-1囊膜蛋白gD单独表达于BHK-21细胞内的亚细胞定位情况,为其亚细胞定位机制及病毒二级囊膜的研究奠定了基础。以EHV-1基因组为模板,利用PCR方法扩增gD部分基因,并构建其原核表达载体pET28-gD,转入BL21(DE3)感受态细胞内进行诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析法纯化gD重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫实验小鼠并制备抗囊膜蛋白gD的多克隆抗体;分别以间接ELISA方法及Western blot方法检测抗体效价及反应性;人工转染pVAX-Kozak-gD重组质粒至BHK-21细胞,利用IF技术对囊膜蛋白gD进行亚细胞定位。结果表明:成功表达了大小约29kD的gD重组蛋白;制备的多克隆抗体效价为1∶102 400,能较好地与囊膜蛋白gD真核表达产物特异性结合;通过IF方法确定囊膜蛋白gD大部分呈斑点状分布于宿主细胞核周围的胞质中,极少量定位于细胞核内。
- 王世民张艳楠杨永龙
- 关键词：多克隆抗体亚细胞定位
- 新疆伊犁地区马疱疹病毒1型的分离与鉴定被引量：13
- 2016年
- 为鉴定新疆伊犁地区某马场疑似感染马鼻肺炎感染的病原,本实验采集流产胎儿肺组织,通过细胞培养、PCR鉴定、毒价测定、病毒中和试验、透射电镜观察以及病毒理化特性测定等方法进行了病毒的分离与鉴定。结果表明:MDBK细胞接种病毒后出现典型的细胞圆缩、细胞融合、细胞脱落和聚堆成葡萄串状等病变特征;毒价测定为TCID50106.2/m L;选择EHV-1的g B基因经PCR扩增,得到622 bp的特异性DNA片段;经理化特性测定该病毒不耐酸、不耐热、对紫外/氯仿/乙醚处理敏感;电镜观察可见圆形、有囊膜、直径大约为130 nm的病毒颗粒。综上所述,经分离与鉴定获得的病毒株生物学性质符合马疱疹病毒1型,并命名为EHV-1-XJ2015株。本研究在新疆伊犁分离到的马疱疹病毒1型属首次报道,为我国马鼻肺炎的防治奠定了基础。
- 杨永龙刘建华宋焕堂李静卢亚宾胡月范斌况玲冉多良
- 关键词：伊犁马
