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梅花鹿骨钙素的原核表达与活性研究被引量：1: 2017年; 目的利用基因工程技术表达纯化梅花鹿骨钙素重组蛋白(Bone gla protein,BGP)并初步研究其活性,为研究梅花鹿茸生长发育提供技术支撑。方法通过PCR技术获取BGP基因,构建p GEX-BGP-His表达载体,并转化至Rosseta(DE3)宿主菌中,IPTG诱导表达。经Ni Sephrose 6 Fast Flow分离纯化,SDS-PAGE鉴定纯化产物。MTT法分析BGP对鹿茸软骨细胞chon-sv40的生物活性。结果经双酶切、测序证实p GEX-BGP-His表达载体构建成功;成功诱导表达相对分子量33.5 KDa的重组蛋白;以37℃,0.1 mmol/L IPTG诱导5 h条件下重组蛋白表达量较高;蛋白纯化后纯度可达95%;重组蛋白对鹿茸软骨细胞chon-sv40具有明显促增殖作用。结论骨钙素与鹿茸软骨细胞chon-sv40的增殖密切相关,为后续BGP在骨代谢机制以及鹿茸有效成分的研究奠定基础,对鹿茸生长机制的研究具有重要意义。; 张楠楠李宏灵李帅军张鹏飞赵雨曲毅; 关键词：梅花鹿骨钙素原核表达

重组人参脂质转运蛋白表达载体构建及抗疫病活性研究被引量：1: 2016年; 目的研究人参脂质转运蛋白(Lipid transfer protein,LTP)对人参疫病菌的抑制作用。方法采用RT-PCR技术克隆人参LTP基因,构建表达载体,并转化到大肠杆菌中,IPTG诱导表达。采用Ni–NTA亲和层析纯化目的蛋白,纸片扩散法验证目的蛋白的抗菌活性。结果人参LTP基因全长为363个碱基,编码120个氨基酸;目的蛋白经纯化后,SDS-PAGE电泳检测为单一条带;抑菌试验表明,重组LTP可明显抑制人参疫病菌丝的生长。结论人参LTP对人参疫病菌具有显著抑制作用。; 才可新秦晓晔李帅军王敏张鹏飞赵雨曲毅; 关键词：人参抑菌活性

人参亲环素蛋白原核表达及其抗真菌活性被引量：3: 2016年; 目的研究人参亲环素蛋白(pgCyP)体外抗真菌活性。方法采用RT-PCR技术,扩增人参cyclophilin(pgCyP)基因片段,构建原核表达质粒并转入大肠杆菌中,利用IPTG诱导表达目的蛋白,通过亲和纯化获得pgCyP蛋白,纸片扩散法验证目的蛋白的抗菌活性。结果人参CyP基因全长为522个碱基,编码174个氨基酸;目的蛋白经纯化后,SDS-PAGE分析显示单一条带;抑菌试验表明该重组蛋白可明显抑制疫霉菌菌丝的生长。结论成功克隆并表达具有抗菌活性的pgCyP蛋白,为进一步研究pgCyP在人参抗真菌中的作用机制奠定了基础。; 李帅军才可新张楠楠孙天霞赵雨曲毅; 关键词：亲环素人参原核表达纯化抗真菌活性

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李帅军