陈健
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡脂肪源间充质干细胞的分离与鉴定被引量：3
- 2014年
- 【目的】建立鸡脂肪源间充质干细胞的分离与鉴定方法.【方法】用I型胶原酶消化法分离天露黄鸡脂肪间充质干细胞(AMSCs),CCK-8检测细胞生长活力,RT-PCR鉴定其特异性标记物,化学法对其进行成脂和成骨分化诱导.【结果和结论】原代及传代的细胞呈成纤维细胞样形态,并能传代至10代,其活力无明显变化;细胞生长曲线呈S型;RT-PCR检测显示AMSCs的特异性标志物CD71、CD44和CD29表达呈阳性,而属于造血干细胞的特异性标志物CD34和CD45呈阴性;AMSCs通过不同诱导液被成功诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,在成脂分化过程中有脂滴形成,油红O染色呈阳性,过氧化物酶体增殖物激活受体基因γ(PPARγ)和脂肪酸基因(FAS)的mRNA表达量升高;在成骨分化过程中有钙结节形成,茜素红染色呈阳性,碱性磷酸酶(ALP)活性检测对照组与诱导组比较差异显著(P﹤0.05),ALP基因和骨形态发生蛋白基因(BMP2)的mRNA表达量升高.研究表明,鸡AMSCs具有分化为多种细胞的潜能.
- 唐小洪叶亚琼李道通马浩然欧阳丹陈健马勇江张媛李玉谷
- 关键词：间充质干细胞分化诱导
- 小鼠Ghrelin基因真核表达质粒的构建及对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响被引量：2
- 2015年
- 为构建小鼠Ghrelin基因的真核表达质粒,并研究Ghrelin对3T3-L1细胞增殖的影响,以小鼠肠cDNA为模板,通过PCR扩增Ghrelin基因,插入到pMD18-T克隆载体中。对经鉴定的重组质粒pMD-Ghrelin进行双酶切,将目的基因连接到经同样双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)上。重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后,用Lipofectamine 3000转染试剂将重组表达质粒转染到3T3-L1细胞中,采用qRT-PCR和Real-time PCR检测Ghrelin基因在3T3-L1细胞中的表达。采用CCK-8法检测细胞的生长活力;流式细胞术检测Ghrelin基因对细胞周期和凋亡的影响;采用Real-time PCR检测部分周期相关基因的mRNA表达水平。结果显示,成功构建了小鼠Ghrelin基因的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Ghrelin,并能在3T3-L1细胞中得到很好地表达,其表达倍数是空质粒组的5倍(P<0.01);转染后第48、72和96小时,Ghrelin转染组3T3-L1细胞的生长活力明显高于空载体组(P<0.05或<0.01);转染后第24小时,Ghrelin转染组S期细胞数量明显高于空载体组(P<0.05);Ghrelin过表达对3T3-L1细胞的凋亡无明显影响(P>0.05)。qRT-PCR结果显示,Ghrelin转染组细胞的c-myc(P<0.05)、E2F1、CDK2(P<0.05)等mRNA的表达量也明显高于空载体组,P53表达低于空载体组,差异显著(P<0.05)。以上结果表明,Ghrelin过表达能显著促进3T3-L1细胞的增殖,但不影响凋亡。
- 陈健叶亚琼欧阳丹马浩然马勇江张媛李玉谷
- 关键词：GHRELIN基因真核表达质粒3T3-L1细胞细胞增殖小鼠
- 3T3-L1前脂肪细胞中Ghrelin对miRNAs表达的影响被引量：1
- 2020年
- 为探讨3T3-L1前脂肪细胞增殖分化过程中Ghrelin对microRNAs(miRNAs)表达的影响,将pcDNA3.1(+)-Ghrelin转染至3T3-L1前脂肪细胞,real-time PCR检测10种miRNA的表达变化,并对显著差异表达的miRNA进行生物信息学分析。结果显示,pcDNA3.1(+)-Ghrelin的表达明显上调,约是对照组的5倍;real-time PCR结果显示,miR-125b-5p(P<0.05)表达显著上调,miR-21a-5p(P<0.01)、miR-30c-5p(P<0.05)、miR-181-5p(P<0.01)表达显著下调;生物信息学分析结果显示,预测调节的1062个靶基因与细胞的生长、分化和发育功能相关,核因子1b(Nfib)是其共同调节的重要潜在靶基因;丝裂原活化蛋白激酶(MAPK signaling pathway)和成脂基因信号通路是其调节差异最为显著的信号通路,与脂肪细胞的增殖和分化密切相关。结果表明,Ghrelin可通过调节miRNA的表达影响3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化。研究结果为进一步探讨Ghrelin发挥效应的分子调节机制和分子调控网络奠定了基础。
- 郭东光陈明艳陈健朱艳平崔芳微李文明孙丽莎李玉谷
- 关键词：GHRELINMIRNA3T3-L1前脂肪细胞真核表达质粒
