倪婷婷
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
- 供职机构：延边大学农学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技厅青年科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 瑟氏泰勒虫病文献综述
- 2017年
- 本文旨在介绍泰勒虫的分类,瑟氏泰勒虫病的临床症状、剖检变化、诊断方法及防治。伴随着全球经济迅速飞快的发展,养牛产业逐渐快速的扩大,瑟氏泰勒虫病的感染区域也随之不断地扩大。这种血液原虫病给我国的养殖业造成了不可挽回的经济损失以及引起兽医界的高度关注,因此,系统全面地了解瑟氏泰勒虫病变得十分必要。
- 赵云伍生军倪婷婷王淼陈健
- 关键词：瑟氏泰勒虫
- 猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒的构建及真核表达被引量：3
- 2018年
- 为构建猪附红细胞体ENO基因重组腺病毒穿梭质粒,试验根据GenBank中登录的猪附红细胞体ENO基因序列(登录号:CP002525.1)设计特异性引物,对ENO基因进行PCR扩增,并将纯化后的PCR产物克隆到pMD19-T载体中。用KpnⅠ和XhoⅠ对pMD19T-ENO进行双酶切后,将其亚克隆至腺病毒穿梭载体PCR^259中,构建PCR^259-ENO重组质粒,提取重组质粒进行鉴定。应用脂质体介导转染法将鉴定正确的PCR^259-ENO重组穿梭质粒转染293细胞,应用间接免疫荧光法(IFTA)检测ENO基因在293细胞中的表达。结果显示,试验克隆的ENO基因长为1 182bp,编码393个氨基酸,与GenBank中ENO基因序列(登录号:CP002525.1)同源性为99%。构建的重组腺病毒穿梭质粒PCR^259-ENO经PCR和酶切鉴定正确,并且能在293细胞中表达,表明ENO基因成功插入腺病毒穿梭质粒PCR^259中,重组腺病毒穿梭质粒PCR^259-ENO构建成功。
- 王淼倪婷婷伍生军赵云宋建臣董亮薛书江
- 关键词：猪附红细胞体
- 猪附红细胞体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5
- 2017年
- 为建一种快速、高效、灵敏的猪附红细胞体(M.suis)检测方法。本研究根据GenBank中的猪附红细胞体α-烯醇化酶(Eno)基因(序列号:AB265823.1),设计并合成了1对引物P5和P6,通过常规PCR方法对Eno基因中的一段序列进行扩增,并将其纯化后的PCR产物克隆入pMD-18T载体中,从而构建重组质粒。以阳性重组质粒为模板,建立了猪附红细胞体SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并对其灵敏性、特异性进行检测。在1.44×10~6~1.44×10~2拷贝/μL范围内具有较好的线性关系,相关系数R^2=0.965,检测到的浓度下限为1.44拷贝/μL。特异性试验中仅对猪附红细胞体的检测结果呈阳性,而对猪肺炎支原体、弓形虫、猪链球菌、猪呼吸与繁殖综合征病毒的检测结果均呈阴性。重复性试验结果表明,其组内和组间变异系数均小于2.0%。用该检测方法对49份猪附红细胞体疑似血液样品进行检测,所建立的荧光定量PCR方法检测的阳性率为40.8%(20/49),高出常规PCR方法检测的阳性率1.33倍。SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的成功建立,为猪附红细胞体感染的早期诊断及定量分析提供了可靠依据。
- 伍生军倪婷婷张守发许应天孙兴忠薛书江
- 关键词：猪附红细胞体SYBR
- 猪附红细胞体病研究进展
- 2017年
- 附红细胞体（EPerythrozoon）是一类能够引起贫血的病原体，又称为嗜血支原体。附红细胞体病也被称为附红体病、血虫病、红皮病，主要是由附红细胞体寄生在人畜的红细胞表面、血浆所引起的，主要症状表现为贫血、黄疸等，是一种人畜共患病。该病主要靠吸血昆虫来进行传播，也可能和其它疾病混合感染，表现出不同的交叉症状。该病给畜牧业带来了很大的经济损失，尤其是养猪业。
- 王淼倪婷婷伍生军赵云陈健
- 关键词：养猪业人畜共患病症状表现病原体支原体
- 基于ENO基因的猪附红细胞体病 PCR-ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2019年
- 为建立猪附红细胞体病的PCR-ELISA检测方法,试验根据猪附红细胞体ENO基因序列,设计合成1对分别标记生物素(BIOT)和地高辛(DIG)的引物,进行PCR-ELISA检测。通过对包被液的种类和浓度、结合抗体的反应条件、封闭条件、PCR产物的稀释度及显色时间等条件进行优化,确定阴性、阳性判定的阈值,并进行特异性、敏感性及重复性验证。结果表明:该方法与猪链球菌、猪大肠杆菌、猪肺炎支原体、弓形虫等均无交叉反应;敏感性比常规PCR高10倍,最低检出量为1.77×10^6拷贝/μL;对40份猪血液样品的,阳性检出率为22.5%。该试验建立的方法具有特异、敏感、安全等优点,将为猪附红细胞体病的临床诊断提供更准确、实用的检测方法。
- 相思宇倪婷婷薛书江
- 关键词：猪附红细胞体PCR-ELISA
- 表达猪附红细胞体ENO基因的质粒DNA的构建及免疫效果研究被引量：3
- 2018年
- 试验旨在构建表达猪附红细胞体ENO基因的质粒DNA,并测定其免疫效果。将猪附红细胞体ENO基因克隆到PVAX1真核表达载体上,然后转染到Vero细胞中进行表达并测定其免疫效果。将18只BALB/c小鼠(雌雄各半)随机分为3组(PVAX1-ENO质粒DNA免疫组、PVAX1空载体对照组及PBS对照组),每组6只,每组小鼠对应免疫接种PVAX1-ENO质粒DNA、PVAX1空质粒和PBS。分离血清并通过ELISA方法测定血清中ENO蛋白抗体效价、IgG1和IgG2a抗体水平及IFN-γ和IL-4细胞因子水平。三免2周后每组选取3只小鼠检测CD4+和CD8+含量。结果显示,本试验成功构建了PVAX1-ENO质粒DNA,经PCR和酶切鉴定正确,并能在Vero细胞中成功表达。PVAX1-ENO质粒DNA免疫组ENO蛋白抗体水平、IgG1和IgG2a抗体水平、IFN-γ和IL-4细胞因子水平及CD4+和CD8+含量均显著高于PVAX1空载体对照组及PBS对照组(P<0.05)。结果表明,PVAX1-ENO质粒DNA可显著提高BALB/c小鼠的体液免疫水平,并在一定程度上刺激BALB/c小鼠细胞免疫。
- 赵云伍生军倪婷婷王淼张守发许应天薛书江
- 关键词：猪附红细胞体质粒DNA细胞免疫体液免疫
- 抗猪附红细胞体单克隆抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2017年
- 为了制备特异的抗猪附红细胞体单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb),将纯化的猪附红细胞体抗原浓缩后免疫6周龄BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术制备MAb。制备的MAb分别通过抗体亚类试剂盒、Western blot进行单抗亚类和特异性检测。结果显示,共获得了2株能稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株,命名为3F7和2C4。2株MAb的亚型均为IgG2a,其腹水效价分别可达1:16 000和1:14 000。特异性检测表明,2株MAb均能特异性地与猪附红细胞体结合,而与弓形虫、猪链球菌、猪肺炎支原体和猪繁殖与呼吸综合症病毒均无反应。2株MAb的获得有望为猪附红细胞体病的诊断和防治提供新的材料。
- 任春宇薛书江薛书江梁晚枫倪婷婷伍生军
- 关键词：猪附红细胞体单克隆抗体
- 猪附红细胞体吉林感染株二维电泳图谱分析
- 2017年
- 为获得猪附红细胞体吉林感染株2-DE图谱,并筛选猪附红细胞体吉林感染株免疫原性蛋白,本试验采用2-D电泳分析猪附红细胞体蛋白表达谱,利用感染血清与二维电泳凝胶进行免疫印迹。结果表明:二维电泳共检测到(60±5)个蛋白质点,蛋白主要集中在pH值6~9和分子量45~25ku。二维电泳中的9个蛋白点被猪附红细胞体感染血清所识别。本研究将为进一步开展猪附红细胞体病的疫苗和诊断候选分子研究奠定基础。
- 丛艳昭倪婷婷伍生军齐楷薛书江
- 关键词：猪附红细胞体蛋白组学
- 猪附红细胞体小鼠感染模型建立条件的优化被引量：4
- 2017年
- 为探究猪附红细胞体感染特性,进而优化猪附红细胞体小鼠感染模型建立的条件,本试验设计了不同小鼠处理方式感染试验(A试验)、不同病原形式感染试验(B试验)、冻存病原感染试验(C试验)和小鼠模型血液再感染小鼠试验(D试验)。通过对每个试验中各组小鼠血液感染情况、感染首现时间、临床症状和平均感染时间的综合评估,分析不同小鼠处理方式、不同病原形式、冻存病原及小鼠模型血液再感染是否对小鼠模型的建立有影响。通过PCR检测、电镜观察和特异基因片段序列测定,进一步鉴定小鼠模型感染的病原与猪附红细胞体是否一致。结果显示,A试验中,昆明小鼠切除脾脏组感染效果最优;B试验中,猪附红细胞体阳性血液样本组感染效果最优;C试验中,阳性血液未冻存组感染效果优于冻存组;D试验中,猪阳性血液样本组、小鼠模型阳性血液样本组无明显差异。PCR检测、电镜观察和特异基因片段序列测定结果显示,小鼠模型感染的病原与猪附红细胞体一致。结果表明,不同小鼠处理方式、不同病原形式和病原的冻存等条件对猪附红细胞体小鼠感染模型的感染效果均有影响,通过对比,以猪阳性血液感染切除脾脏的昆明小鼠的方式建立小鼠感染模型效果最优。
- 倪婷婷伍生军梁晚枫许应天吴金桐薛书江
- 关键词：猪附红细胞体小鼠
