刘开兴
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：贵州大学更多>>
- 发文基金：国家科技部农业科技成果转化资金贵州省优秀科技教育人才省长资金项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- EDS1多肽抗体的制备和应用被引量：1
- 2011年
- EDS1蛋白是植物寄主SA信号转导通路中具有重要调控功能的蛋白,为获得效价高和选择性强的EDS1抗体,根据NCBI GenBank中报道的EDS1蛋白一级结构信息,采用Blastn、Blastx和ExPASy等生物信息学软件进行序列同源性分析,获得三段序列特异性较高的多肽,并从中优选一段序列特异性多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法获得序列特异性最好的多肽,采用HPLC和GC-MS测定合成多肽的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达89.37%,目的多肽分子量为1978.33。采用碳化二亚胺法将多肽与KLH进行偶联获得免疫原——Pep-KLH,并将其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体,采用间接-ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经间接-ELISA检测表明抗血清和多克隆抗体可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别烟草叶片特异性条带,其相对分子量为70kD,与预测分子量相符,表明利用该方法制备的EDS1多肽抗体具有较高特异性和灵敏度。
- 陈卓刘开兴于丹丹刘家驹王贞超李向阳毕亮胡德禹杨松宋宝安
- 关键词：多肽合成多克隆抗体
- 病程相关蛋白-1a多克隆抗体的制备与应用
- 2012年
- 为获得效价高和选择性强的PR-1a抗体。根据NCBI GenBank中普通烟PR-1a一级结构信息,采用Blastn、Blastx和Expasy等软件进行序列同源性分析,获得1段序列特异性多肽,采用9-氟甲氧羰基固相合成法获得目的多肽,采用HPLC和LC-MS测定目的多肽的浓度和分子量。结果表明:目的多肽纯度达93.92%、分子量为2088.17;采用碳化二亚胺法制备获得Pep-KLH,并通过免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,采用间接-ELISA和Western blotting测定其抗体效价和特异性,结果表明:抗血清在1:32000条件下,抗血清的吸光值(OD)约为1.0;经Westernblotting试验表明:抗血清和多克隆抗体可特异性识别烟草叶片组织内的PR-1a;同时,试验采用系统性获得性的免疫激活剂-BTH作用普通烟K-326,对作用后的0、6、12、24、48、76、144、96h的烟草叶片总蛋白进行间接-ELISA,发现:BTH作用普通烟K-326144h后,PR-1a蛋白表达呈上调趋势;同时采用半定量RT-PCR试验也同样证实了BTH可诱导PR-1a基因表达上调,其表达上调趋势与间接-ELISA的研究结果相似。表明采用该方法制备的PR-1a多肽抗体具有较高的特异性和灵敏度,可用于免疫诱导剂等方面的研究。
- 陈卓刘开兴刘家驹王贞超毕亮李向阳杨松宋宝安
- 关键词：多肽合成多克隆抗体
