李金桐
- 作品数：1 被引量：5H指数：1
- 供职机构：哈尔滨医科大学大庆校区更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省卫生厅科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人血清淀粉样蛋白SAA1蛋白的原核重组表达被引量：5
- 2016年
- 目的:重组及表达人血清淀粉样蛋白SAA1融合蛋白,为进一步制备早期诊断冠心病的单克隆抗体做准备。方法:应用PCR技术,以成人肝脏的c DNA文库做模板,扩增出长度为315 bp的人血清淀粉样蛋白SAA1基因,并将其分别与带有HIS标签的PET-32a载体及GST标签的PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α感受态细胞中进行克隆并测序鉴定。并在大肠杆菌表达菌BL21菌中表达SAA1融合蛋白,之后分别应用SDS-PAGE及Western blot技术检验重组蛋白的纯度。结果:经SDS-PAGE凝胶电泳后,我们分别看到了分子量为32k D和分子量为38k D的两个蛋白条带,这两个条带分别为PET-32a-SAA1重组蛋白和PGEX-4T-1-SAA1重组蛋白,且这两种蛋白在超声后存在于菌液的沉淀中,证明在大肠杆菌中实现了不溶性的包涵体形式的表达,经Western blot鉴定,分别以HIS标签抗体和GST标签抗体为第一抗体,以鼠二抗为第二抗体,证明所表达的蛋白质为SAA1融合蛋白。结论:采用原核表达方法,经免疫纯化可获得高纯度的SAA1融合蛋白,为进一步制备相应的单克隆抗体和开发以SAA1增高为指标之一的冠心病诊断试剂盒打下基础,为冠心病的诊断开辟新途径。
- 郝雪微马翠吴静红李金桐陈硕
- 关键词：血清淀粉样蛋白冠心病
