刘杏
- 作品数：6 被引量：36H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院特产研究所更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金公益性行业(农业)科研专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 胞内劳森菌PCR检测方法的建立及初步应用被引量：5
- 2017年
- 为建立一种用于检测胞内劳森菌的检测方法,本试验根据GenBank中公布的胞内劳森菌16SrRNA设计引物建立PCR诊断方法。结果显示:获得了大小为481bp的PCR产物,核苷酸序列同源性分析结果均为99%以上;特异性试验表明该方法对大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、猪流行性腹泻病毒和金黄色葡萄球菌均为扩增阴性;敏感性试验表明该方法的最低检出量为32.8μg/L;对20份临床样品阳性检出率为15%。结果表明:该方法具有较好的特异性和敏感性,适用于临床检测胞内劳森菌。
- 孙娜刘杏陈强刘莹温永俊程世鹏
- 关键词：PCR
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型混合感染的流行病学调查被引量：17
- 2016年
- 为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)在我国猪场混合感染的发病情况,根据Gen Bank中PRRSV ORF5及PCV2 ORF1基因序列设计合成引物,建立了分别用于检测PRRSV、PCV2的RT-PCR及PCR方法,对2013—2015年采自吉林、辽宁、黑龙江、山西、山东、广东6省192份样品进行检测。结果发现:PRRSV感染率为22.9%,PCV2感染率为64.3%,28份样品为混合感染阳性,阳性率达14.58%。猪群中PRRSV和PCV2的感染比较普遍,混合感染率也较高,加重了疫病防控的难度。
- 刘杏王凤雪温永俊武华
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型流行病学调查
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒感染和复制机制及其毒力研究进展被引量：9
- 2015年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)能引起母猪繁殖障碍及仔猪和育成猪呼吸道症状。本文总结国内外猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染和复制机制研究进展,介绍了影响PRRSV毒力的因素及这方面的研究进展,为疫苗研究提供新的方向。猪繁殖与呼吸综合征病毒感染和复制机制及其毒力的基础研究为控制和消灭猪繁殖与呼吸综合征提供参考。
- 刘杏王凤雪温永俊
- 关键词：病毒毒力
- PRRSV-N蛋白单抗制备与直接免疫荧光方法建立被引量：1
- 2017年
- 为了建立一种快速的PRRSV诊断方法,本研究以纯化的PRRSV-TJ-PGEX-6P-N重组蛋白处理抗原免疫BALB/C小鼠,利用淋巴瘤细胞融合技术,包被带有His标签的PRRSV-N蛋白,通过间接ELISA方法筛选到两株可以稳定分泌的N蛋白特异性单克隆抗体,命名为N-13、N-29。通过间接ELISA方法,WB与IFA方法对其进行鉴定,并测定其亲和常数。腹水效价分别为1:4 000与1:5 000,选择腹水效价高的N-13进行纯化标记,并对标记抗体的特异性、敏感性与保存期进行鉴定;通过DFA条件的摸索,建立了一种敏感的DFA诊断方法,并对其和PRRSV分离鉴定常用的CPE观察法进行比较。结果表明该DFA方法结果准确,可以作为实验室病毒分离鉴定和猪生产中该疾病诊断的有效手段。
- 何民辉李真光王凤雪宋妮朱洪伟刘杏温永俊武华
- 关键词：PRRSV单抗直接免疫荧光特异性细胞病变
- 高致病性PRRSV JL-04/12株核衣壳蛋白的表达与抗原性分析被引量：2
- 2015年
- 为获得高浓度、高质量的有效原核表达蛋白作为ELISA诊断抗原,通过RT-PCR法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JL-04/12株的核衣壳蛋白(N蛋白)基因并克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,转入到大肠埃希菌BL-21感受态细胞,经IPTG诱导表达,通过温度和IPTG浓度的优化,进行重组蛋白的高效表达,经SDS-PAGE和Western blot对表达产物的特性进行分析,利用GST柱纯化表达蛋白,并免疫小鼠,ELISA检测其刺激产生抗体的能力-抗原的免疫原性。结果表明,0.1mmol/L的IPTG、28℃诱导4h可高效诱导重组蛋白的表达,在表达上清中目的蛋白达40%,原核表达的重组N蛋白可诱导小鼠产生抗体,抗体效价为1∶256。原核表达的N蛋白与PRRSV具有相同的抗原性。
- 王凤雪刘莹杨勇朱洪伟孙娜刘杏程世鹏温永俊
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白原核表达
- 狂犬病病毒G蛋白V区特异性单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2017年
- 为制备狂犬病病毒糖蛋白(G蛋白)特异性单克隆抗体(McAb)及鉴定其识别范围,采用人工合成多肽"PPDQLVNLHDFRSDEIEHLVVEE"与KLH的偶联物免疫小鼠,经筛选制备出1株阳性杂交瘤细胞,记作4D3,其亚类鉴定为IgG2b/κ链。构建了真核表达载体pCAGGS-G/pCAGGS-13G,经鉴定可正确表达G蛋白,用于鉴定McAb。免疫荧光与Western-blot分析显示,该株McAb与真核表达的人工减毒株LBNSE G蛋白可发生特异反应,而与强毒株IMDRV-13的G蛋白不反应。本试验结果可为进一步研究G蛋白的结构、功能和毒株的初步筛查提供参考。
- 汪孟航朱洪伟刘莹刘杏李新培王西西杨勇孙娜程世鹏温永俊
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白真核表达单克隆抗体
