车腾飞
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 供职机构：河北师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 绵羊肺炎支原体Y98 P26-P40融合基因的表达及免疫原性被引量：2
- 2013年
- 根据猪肺炎支原体(Mycoplasma Hyopneumoniae,Mhp)外膜蛋白P30基因和P46基因序列设计引物,通过PCR克隆了绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)标准株Y98膜蛋白P26基因和P40基因片段。通过对该序列的同源性分析表明MO P26基因与Mhp P30基因核酸序列同源性为79%,MO P40基因与Mhp P46基因核酸序列同源性为74%。分别将MO P26基因、MO P40基因以及P26-P40融合基因与原核表达载体pET28a连接构建了表达质粒pET28a-P26,pET28a-P40,pET28a-P26-P40,并转化受体菌BL21(DE3)得到重组菌株BL21(DE3)(pET28a-P26),BL21(DE3)(pET28a-P40),BL21(DE3)(pET28a-P26-P40)。经IPTG诱导后SDS-PAGE表明有26 000,40 000和66 000左右的目的条带出现;Western blotting表明表达的目的蛋白具有良好的反应原性;小鼠免疫试验表明重组菌株BL21(DE3)(pET28a-P26),BL21(DE3)(pET28a-P40),BL21(DE3)(pET28a-P26-P40)表达的蛋白对小鼠的保护率分别为90%,90%和100%;重组菌株BL21(DE3)(pET28a-P26-P40)表达的蛋白对绵羊的保护率为85%。本试验结果为研制绵羊肺炎支原体基因工程疫苗奠定了坚实的基础。
- 刘文青范琼瑛赵红艳车腾飞赵宝华
- 关键词：基因表达免疫原性
- 绵羊肺炎支原体Y98 P26-P40融合基因的表达及免疫原性
- 范琼瑛赵红艳刘文青车腾飞赵宝华
- 绵羊肺炎支原体Y98 P30基因的克隆、表达及免疫试验被引量：8
- 2012年
- 根据猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)跨膜蛋白P30基因序列设计引物,通过PCR克隆出绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)膜蛋白P30基因片段。通过对该序列的同源性分析表明MOP30基因与Mhp P30基因核苷酸序列同源性为79%。抗原表位及跨膜结构预测的结果表明,MO P30基因与Mhp P30基因的抗原表位及跨膜结构均具有高度的一致性。该片段中含1个TGA编码Trp,而不是终止密码子。将P30基因与原核表达载体pET-28a连接构建pET-28a-P30表达质粒,转化受体菌Rossta得到重组菌株Rossta(pET-28a-P30)。经诱导后SDS-PAGE表明有30 000左右的目的条带出现;Western blot表明Rossta(pET-28a-P30)表达的30 000蛋白主要以包涵体的形式存在;小鼠免疫试验表明Rossta(pET-28a-P30)原核表达的蛋白对小鼠具有一定的保护作用。
- 赵红艳刘文青车腾飞卢金华宋静岚赵宝华
- 关键词：P30基因基因表达免疫动物
