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阳媛: 作品数：13 被引量：13H指数：2; 供职机构：重庆医科大学更多>>; 发文基金：重庆市教育委员会科学技术研究项目国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学社会学更多>>

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妇产科专业学位研究生培养模式的改革与创新研究: 王佳石全红杨竹孙聪聪毛艳华阳媛吴本媛陈芯培田静赵腾飞; 主要技术内容：对妇产科专业学位研究生培养模式现况进行调查，以培养临床实践能力为重点的专业学位研究生培养模式需求进行分析。采用问卷调查、小组访谈、关键人物访谈、文献法、观察法等方法。研究发现：学生总体临床技能、临床思维能力...; 关键词：; 关键词：专业学位研究生

GRP78蛋白双抗夹心ELISA法检测试剂盒及其检测方法: 本发明提供一种GRP78蛋白双抗夹心ELISA法检测试剂盒，包括兔多克隆抗体、腹水型单克隆抗体、标准品GRP78蛋白、HRP标记的山羊抗兔IgG、显色液、终止液、封闭液和洗涤液。本发明还提供一种GRP78蛋白双抗夹心EL...; 汪德强黄爱龙阳媛夏露露师悦嫄魏杰; 文献传递

14-3-3家族在HBV复制的肝癌细胞中的表达研究被引量：1: 2017年; 目的:研究14-3-3家族在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的肝癌细胞中的表达。方法:运用q RT-PCR和Western blot分析14-3-3家族在HBV复制细胞系中的表达水平;q RT-PCR、Western blot检测HBV复制在Hep G2细胞中对14-3-3ζ表达的影响;Western blot检测HBV复制在小鼠肝组织中对14-3-3ζ表达的影响。结果:在Hep G2.2.15中,14-3-3η、γ、ζm RNA和蛋白的表达水平较Hep G2对照组明显增加(m RNA:t=16.5、27.86、17.23,P=0.000、0.000、0.000;蛋白:t=35.7、16.97、22.51,P=0.000、0.000、0.000);在Hep AD38(Tet-)中只有14-3-3ζm RNA和蛋白的表达水平较Hep AD38(Tet+)对照组明显增加(m RNA:t=14.27,P=0.000;蛋白:t=12.11,P=0.000);HBV复制能使Hep G2中14-3-3ζm RNA和蛋白的表达显著升高(m RNA:F=98.8,P=0.000;蛋白:F=118.3,P=0.000);HBV复制能使小鼠肝组织中14-3-3ζ蛋白的表达显著升高(F=109.4,P=0.000)。结论:HBV可以促进肝癌细胞内14-3-3η、γ、ζ的表达,这一发现为控制HBV感染的治疗策略提供新的靶点。; 张祥魏杰靳鑫王石磊阳媛师悦嫄牛司强汪德强; 关键词：乙型肝炎病毒

人NGAL克隆表达及抗体的制备与鉴定被引量：2: 2019年; 目的:高效表达人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)重组蛋白并制备其多克隆及单克隆抗体。方法:人工合成经密码子优化的 NGAL 基因,构建原核表达重组质粒 pW28-NGAL,IPTG 诱导表达后分离纯化并分析在溶液中的聚集状态;获得的 rhNGAL 抗原免疫兔子制备多克隆抗体,免疫小鼠筛选高效价的特异性单克隆抗体并鉴定抗体亚型;Protein G 亲合柱纯化,等温滴定量热法及非竞争 ELISA 法检测抗体的亲和力,SDS-PAGE 分析纯度;最后运用 Western blot、免疫荧光和免疫组化对抗体进行鉴定。结果:高效获得高纯度 NGAL 重组蛋白,主要以单体形式存在;成功制备兔多抗,同时筛选获得 6 株高效价单克隆抗体;其中,25 号单抗为 IgG1 亚型,余者均属 IgG2a 亚型,且 19、35 号单抗的亲和常数分别为 3.06×10^9、2.14×10^9。SDS-PAGE 分析表明纯度均大于 90%。进一步的鉴定结果表明制备的抗体皆具有良好免疫反应性及特异性,且单抗的特异性明显高于多抗。结论:本研究利用密码子优化技术高效表达制备了 NGAL 重组蛋白,获得了其高效价多克隆抗体和高特异性单克隆抗体,为 NGAL 的病理生理作用等功能研究提供了良好的实验材料,为NGAL临床免疫检测诊断试剂的国产化奠定了有力的基础。; 王石磊靳鑫魏杰张祥阳媛牛司强汪德强; 关键词：密码子优化中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白多克隆抗体单克隆抗体

分化抑制因子1重组腺病毒的构建及其动物模型的建立被引量：1: 2018年; 目的:构建分化抑制因子-1(inhibitor 1 of differentiation,Id1)重组腺病毒(recombinant adenovirus,Rad),并建立Id1过表达的小鼠动物模型。方法:在HEK293细胞中将腺病毒重组质粒Ad Easy-Id1进行包装以获得Id1重组腺病毒(RAd-Id1);通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记法测定腺病毒滴度;通过q RT-PCR和Western blot验证RAd-Id1感染的Hep G2细胞中的Id1过表达效果,用MTS比色法检测RAd-Id1对Hep G2细胞增殖的影响;通过尾静脉注射RAd-Id1的感染方式建立肝组织中过表达Id1的小鼠动物模型,病毒载量梯度实验分PBS空白组、RAd-GFP对照组及RAd-Id1实验组(n=5/组)以测定RAd-Id1感染小鼠的适合载量;病毒感染时间梯度实验每5 d检测1次为1组,共7组(n=5/组)以测定感染小鼠的适合时间;通过Western blot检测小鼠肝组织中Id1的过表达效果及甲胎蛋白(alpha fetal protein,AFP)和癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的表达水平,再采用ELISA检测小鼠血清中Id1的免疫原性及AFP和CEA的表达情况。结果:成功包装获得RAdId1,测得其滴度为1.5×1011 GFU/m L;RAd-Id1感染Hep G2细胞48 h和72 h后,Id1的转录和蛋白水平均明显升高(P<0.01);96 h时RAd-Id1实验组的MTS检测值较PBS空白组和RAd-GFP对照组(2.00±0.06 vs.1.18±0.05,2.00±0.06 vs.1.10±0.07;F=51.350,P=0.000)明显升高;Western blot结果显示:在RAd-Id1感染的小鼠肝组织中,Id1、AFP和CEA蛋白水平较PBS空白组和RAd-GFP对照组升高;ELISA实验结果表明:血清中AFP和CEA蛋白水平与RAd-Id1的载量呈正相关(rs AFP=0.903,PAFP=0.014;rs CEA=0.964,PCEA=0.002),不同载量RAd-Id1感染小鼠的血清中Id1抗体滴度无显著差异(P>0.05)。结论:成功构建了RAdId1及其介导的小鼠动物模型;RAd-Id1可作为细胞水平上研究Id1对肝癌影响的载体工具;AFP和CEA的升高提示Id1可能参与诱导AFP和CEA的表达。; 魏杰张祥王石磊靳鑫阳媛师悦嫄牛司强汪德强; 关键词：重组腺病毒分化抑制因子1 肝癌动物模型

GRP78调控抗乙型肝炎病毒颗粒分泌的抑制剂: 本发明提供一种基于GRP78的抗乙型肝炎病毒抑制剂。本发明以GRP78蛋白为靶点，通过抑制/阻断乙肝病毒颗粒分泌实现抗乙型肝炎病毒功能。本发明通过质谱鉴定发现GRP78可以与乙肝病毒包膜的preS1相互作用，并证实GRP...; 汪德强刘俊叶师悦嫄靳鑫吴爽张宏鹏黄爱龙蔡雪飞魏杰阳媛张祥伍晓莉毛胜蓝王雯沈仕梅马园艳

GRP78单抗多抗的制备鉴定及其免疫学检测方法的建立: 2020年; 目的:制备与鉴定抗GRP78兔多克隆抗体与腹水型单克隆抗体,进一步建立可检测GRP78蛋白的双抗夹心ELISA方法。方法:利用课题组前期已经成功构建的pW28-GRP78重组质粒,IPTG诱导表达后经过Ni2+-NTA亲和层析柱分离纯化获得高纯度GRP78重组蛋白;获得的GRP78蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,辛酸-硫酸铵沉淀后DEAE离子交换层析法纯化;制备GRP78腹水型单克隆抗体并鉴定其亚型,Protein G亲合柱纯化;采用Western blot、免疫荧光、免疫组化等方法对获得的GRP78兔多抗与鼠单抗进行鉴定;建立一个可检测GRP78蛋白的双抗夹心ELISA免疫学方法。结果:高效获得高纯度GRP78重组蛋白,成功制备兔多抗,同时获取8株腹水型单克隆抗体,选择效价最高的McAb-1用于后续双抗夹心ELISA实验,McAb-1为G2a型;进一步的鉴定结果表明制备的抗体皆具有良好免疫反应性及特异性;单抗作为捕获抗体,多抗作为检测抗体,HRP标记的羊抗兔酶标二抗,成功建立可检测人GRP78的双抗夹心ELISA方法,检测下限为152.3 ng/mL。结论:成功获取了高效价、高灵敏度及高特异性的GRP78兔多抗及腹水型鼠单抗,并在此基础上建立了可检测人GRP78蛋白的双抗体夹心ELISA检测系统,为GRP78的进一步研究奠定重要基础,具有良好的临床应用前景。; 阳媛夏露露师悦嫄魏杰汪德强牛司强; 关键词：GRP78 多克隆抗体

葡萄糖调节蛋白GRP78与HBV的PreS1相互作用位点的初步研究被引量：1: 2018年; 目的:初步研究78 k D的葡萄糖调节蛋白(the 78 k D glucose-regulated protein,GRP78)与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的前S1蛋白(Pre S1)的相互作用位点。方法:利用PCR技术扩增GRP78的基因,将扩增的目的基因克隆至p W28载体质粒,在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)B834中表达,经过镍离子亲和层析柱纯化GRP78蛋白;将Pre S1 3个截短片段的重组质粒(p GST-Pre S1-X1/X2/X3)在B834中表达后,经过GST亲和层析柱纯化相应蛋白;利用蛋白质体外结合实验(pull down)、微量热泳动(microscale thermophoresis,MST)检测GRP78与Pre S1 3个截短片段的相互作用。结果:成功构建重组质粒p W28-GRP78;获得GRP78蛋白及Pre S1 3个截短片段的融合蛋白;pull down及MST实验验证了GRP78可以与Pre S1的3个片段结合,且GRP78与GST-Pre S1-X1结合效果最好。结论:利用分子克隆技术及蛋白质表达纯化技术,获得GRP78蛋白及Pre S1截短片段的融合蛋白,并初步筛选了Pre S1与GRP78的相互作用位点,为后续研究打基础。; 靳鑫王石磊吴爽张祥魏杰阳媛师悦嫄牛司强汪德强; 关键词：葡萄糖调节蛋白前S1蛋白

乙型肝炎病毒复制对肝细胞Id家族表达的影响被引量：1: 2019年; 目的:研究肝细胞中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制对分化抑制因子(inhibitor of differentiation,Id)家族表达的影响。方法:利用q RT-PCR、Western blot检测分析Id家族在HBV瞬时或稳定复制的肝癌细胞中表达水平的变化,并在HBV复制质粒PCH9-HBV1.1转染的正常肝细胞和HBV转基因小鼠肝组织细胞模型中进一步验证。将乙型肝炎病毒S蛋白(hepatitis B virus S protein,HBs)、乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)、乙型肝炎病毒DNA聚合酶(hepatitis B virus DNA polymerase,HBp)、乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)的过表达质粒转染HepG2细胞,检测各组与载体对照组细胞中Id家族表达水平的变化,分析比较乙肝病毒编码的4种蛋白对Id家族的调控作用。利用荧光素酶报告基因检测病毒各组分蛋白对Id蛋白启动子活性的影响。结果:瞬时转染HBV表达质粒的HepG2细胞较对照组细胞,Id1、Id3的mRNA和蛋白表达水平均降低(mRNA:t=3.952、3.189,P=0.017、0.033;蛋白:t=10.532、4.155,P=0.000、0.014);HepG2.2.15中Id1、Id3 mRNA和蛋白的表达水平较HepG2对照组均下降(m RNA:t=5.553、7.211,P=0.005、0.002;蛋白:t=4.193、3.849,P=0.014、0.018);HepAD38(Tet-)中Id1、Id3蛋白的表达量较HepAD38(Tet+)组均降低(t=3.052、3.712,P=0.038、0.021)。同时,HBV的复制可以抑制LO2细胞及小鼠肝组织中Id1、Id3的表达(mRNA:t=14.564、3.281、3.489、3.495,P=0.000、0.030、0.025、0.025;蛋白:t=5.651、5.336、4.948、5.149,P=0.005、0.006、0.008、0.007)。转染HBV病毒各编码蛋白质粒的HepG2细胞中,HBc组Id1、Id3较载体对照组的mRNA表达水平降低最明显(77.7%、76.2%,F=9.945、37.528,t=6.481、10.915,P=0.000、0.000),Western blot结果显示HBx组Id1、Id3蛋白表达量下降最明显(86.2%、68.4%,F=38.225、7.159,t=12.550、5.295,P=0.000、0.001)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,HBc组Id1、Id3启动子活性较对照组降幅最大(62.2%、56.3%,F=16; 王石磊汪德强魏杰靳鑫阳媛师悦嫄夏露露牛司强; 关键词：乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒X蛋白

GRP78调控抗乙型肝炎病毒颗粒分泌的抑制剂: 本发明提供一种基于GRP78的抗乙型肝炎病毒抑制剂。本发明以GRP78蛋白为靶点，通过抑制/阻断乙肝病毒颗粒分泌实现抗乙型肝炎病毒功能。本发明通过质谱鉴定发现GRP78可以与乙肝病毒包膜的preS1相互作用，并证实GRP...; 汪德强刘俊叶师悦嫄靳鑫吴爽张宏鹏黄爱龙蔡雪飞魏杰阳媛张祥伍晓莉毛胜蓝王雯沈仕梅马园艳; 文献传递

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