刘莉
- 作品数：10 被引量：17H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用单克隆抗体鉴定人类肝脏线粒体蛋白质组中的抗原优势蛋白
- 2010年
- 对线粒体蛋白质组的鉴定和分析有助于理解线粒体的功能和相关疾病的发病机制,包括能量代谢、凋亡、自由基产生、产热作用、钙离子信号通路等.本实验旨在鉴定人类肝脏线粒体蛋白质组中的抗原优势蛋白.用线粒体蛋白质作为免疫原,经过细胞融合、筛选和克隆,制备了240多个单克隆抗体杂交瘤细胞系.单克隆抗体识别的线粒体蛋白抗原通过人类肝脏cDNA表达文库筛选方法鉴定,相应的线粒体蛋白质的亚细胞定位通过免疫组化证实.发现了肝脏线粒体中6个抗原优势蛋白,分别被至少两种特异性的单克隆抗体所识别.这6个蛋白分别是乙酰辅酶A酰基转移酶(线粒体3-酮酯酰辅酶A硫解酶)2、醛脱氢酶1家族A1、氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺S乙酰转移酶(丙酮酸脱氢酶复合物的E2组分)、烯酰辅酶A水合酶1和羟基类固醇(11β)脱氢酶1.这些单克隆抗体有望应用于人类肝脏蛋白质组计划的相关研究,如去除优势蛋白、蛋白与蛋白之间相互作用的研究和验证等.
- 鞠艳芳杨金菊刘蓉柳晓兰杜雪梅刘莉陈志成迟俊刘淑娥高媛高建恩贺福初孙启鸿
- 关键词：线粒体单克隆抗体肝脏
- 血红蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定
- 2007年
- 本研究目的是制备鼠抗人血红蛋白A2(HBA2)单克隆抗体(McAb)并进行初步鉴定。将正常人胎肝组织匀浆离心并分离出人胎肝核总蛋白,用人胎肝核总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组织化学的方法对单克隆抗体进行特异性鉴定,通过免疫沉淀和Uni-ZAPXR表达文库筛选鉴定抗原。结果表明:通过间接ELISA筛选获得分泌AEE091抗体的杂交瘤细胞1株,其分泌的单克隆抗体Ig亚类(型)为IgG1(κ);Western blot结果显示,该抗体识别分子量为15kD的蛋白;Western blot识别AEE091免疫沉淀获得的分子量为15kD的抗原;同时应用单克隆抗体AEE091对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAPXR)进行筛选,筛选所获得的阳性噬菌斑测序结果显示两个阳性克隆插入序列均为HBA2。结论:经筛选获得了分泌AEE091抗体的杂交瘤细胞株。AEE091抗体能特异识别HBA2抗原,因而其在HBA2的功能研究和珠蛋白生成障碍性贫血筛查等方面具有应用价值。
- 陈志成杨金菊刘蓉曲海霞王婉刘莉柳晓兰陈勇刘莹高建恩孙启鸿
- 关键词：血红蛋白A2单克隆抗体CDNA表达文库地中海贫血
- 单克隆抗体识别PDC-E2表位的鉴定
- ＜正＞目的原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis,PBC）是一种慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病,好发于中年女性。肝硬化是PBC的晚期结果。近年来国外及我国对本病的报道均有上升趋势。迄今为止本...
- 刘莉高媛鞠艳芳杨金菊何湘吴琼李戬宋颖博陈勇杜雪梅徐菡柳晓兰高建恩孙启鸿
- 文献传递
- 兔抗人CXCR3-B分子N端多肽多克隆抗体的制备与初步应用被引量：7
- 2006年
- 目的： 获得兔抗人CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽的多克隆抗体, 并对多克隆抗体进行初步鉴定和应用.方法： 应用Fmoc法化学合成CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的CXCR3-B分子的多肽与KLH交联;皮下注射抗原免疫日本大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫印迹、免疫组化等初步鉴定和应用.结果： 分别化学合成CXCR3-B分子N端第1～19、第17～35及第33～51个氨基酸多肽, 纯化后多肽纯度分别为98%、 88.54%及80%, 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价分别为1∶ 32 000（0.1 mg/L）, 1∶ 4 000（3 mg/L）和1∶ 1 000（10 mg/L）.3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中相对分子质量（Mr）约为50的CXCR3-B分子, 相应抗原定位于3种多肽的抗体可特异识别胎心组织中的血管内皮细胞.结论： 所制备的多克隆抗体可应用于ELISA、免疫印迹和免疫组化等实验, 为确定CXCR3-B分子的组织及细胞分布和定位、寻找CXCR3-B相互作用的分子提供了有力的工具.
- 高媛杨金菊柳晓兰刘莉刘超燕Gian P.Visentin高建恩孙启鸿
- 关键词：多克隆抗体多肽抗原
- 抗尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2007年
- 本研究制备抗人尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2(UDP-glucose pyrophosphorylase2)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。将正常成人肝组织匀浆离心并分离肝脏胞浆总蛋白,用肝脏胞浆总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,通过间接ELISA法、Western blot及免疫组织化学的方法对单克隆抗体进行特性鉴定,通过Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗体特异性。结果表明:通过间接ELISA筛选获得1株可稳定分泌抗人UGP2mAb的杂交瘤细胞系BAD062,其分泌的单克隆抗体的Ig亚类(型)为IgG2b(κ),Western blot结果显示该抗体可以特异地识别分子量为56kD的蛋白;应用单克隆抗体BAD062对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAPXR)进行筛选,阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为UGP2。结论:单克隆抗体BAD062特异地识别抗原UGP2,该抗体可用于ELISA检测、Western blot、免疫组织化学实验,为UGP2的研究提供了有力的工具。
- 王婉高媛杨金菊柳晓兰鞠艳芳刘莉陈志成刘蓉迟俊邢维贤高建恩安立国孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体CDNA表达文库
- 抗11β-羟类固醇脱氢酶1的单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:制备抗人11β-羟类固醇脱氢酶1(homo sapi-ens hydroxysteroid 11-beta dehydrogenase 1,HSD11B1)的单克隆抗体(mAb)并初步鉴定其特性。方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Westernblot、免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀、Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原。结果:通过间接ELISA筛选获得1株可稳定分泌抗人HSD11B1 mAb的杂交瘤细胞系。其分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),Western blot结果显示该mAb可以特异地识别相对分子质量(Mr)为35 000的蛋白;应用mAb CBF245对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAP XR)进行筛选,阳性噬菌斑测序结果显示5个阳性克隆插入序列均为HSD11B1。结论:mAb BAD062特异地识别抗原HSD11B1,该mAb可用于ELISA检测、Westernblot、免疫组化和免疫沉淀实验,为HSD11B1的研究提供了有力的工具。
- 王婉杨金菊刘莉陈志成高媛高建恩安立国孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体线粒体
- 混合抗原免疫结合蛋白质芯片通量化制备单克隆抗体体系的初步建立
- 单克隆抗体具有高度的特异性及均一性，应用广泛，目前制备单克隆抗体的方法成本高，产量低，程序繁杂，周期长。近年来蛋白质组学研究的迅速发展对高亲和力的单克隆抗体的需求迅速增加，对传统的杂交瘤技术提出了挑战。蛋白质芯片是将大量...
- 刘莉
- 关键词：混合免疫单克隆抗体蛋白质芯片高通量
- 文献传递
- 抗丙酮酸脱氢酶复合体E2(PDC—E2)的抗体相应抗原表位的鉴定及应用
- 原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosiS,PBC)是一种慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病,好发于中年女性,近年来国外及我国对本病的报道均有上升趋势。迄今为止本病病因仍不十分明确,一般认为本病的发...
- 刘莉杨金菊何湘高媛鞠艳芳吴琼李戬宋颖博陈勇杜雪梅柳晓兰高建恩孙启鸿
- 文献传递
- 抗丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的制备抗人丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(pyruvate dehydrogenase complex E2,PDC-E2)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原。结果获得1株可稳定分泌抗人PDC-E2mAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化和免疫沉淀实验。结论成功制备了抗人PDC-E2的mAb,为PDC-E2的研究提供了有力的工具。
- 刘莉鞠艳芳杨金菊柳晓兰高媛王婉刘蓉曲海霞陈志成刘莹高建恩孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体线粒体
- Neuropilin-1(NRP1)的研究进展被引量：5
- 2007年
- 刘莉高建恩孙启鸿
- 关键词：NEUROPILIN-1血管内皮生长因子
