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猪卵母细胞体外发育系统的优化及转基因体细胞核移植系统的建立被引量：1: 2012年; 为改善猪卵母细胞体外发育系统,依次对卵母细胞体外成熟期激素处理、成熟后胚胎激活方式、激活后胚胎培养液选取进行优化,并将优化后系统应用于转基因体细胞核移植。结果显示,优化后的系统为:成熟前24.0 h添加10.0 IU/ml孕马血清促性腺激素(PMSG)和10.0 IU/ml人绒毛膜促性腺激素(hCG),激活方式为电脉冲(1.2 kV/cm,30μs)联合细胞松弛素B处理(5μg/ml,3.0 h),胚胎培养液为PZM3。在此系统下,卵母细胞成熟率达80.9%,卵裂率达92.8%,囊胚率达53.7%,将此系统应用于转EGFP基因胎儿成纤维细胞核移植,囊胚率达18.3%。以上结果表明,此系统可用于猪卵母细胞体外发育及转基因体细胞核移植。; 王慧利孟春花张庆晓李静心苏磊贺强朱前明曹少先; 关键词：卵母细胞体外发育体细胞核移植

人α-乳白蛋白转基因克隆奶山羊的获得与鉴定: 引言目前,世界上已获得乳白蛋白转基因小鼠、大鼠、猪和牛等动物,但山羊上的研究较少。此外,随体细胞克隆技术的发展,已诞生多种克隆动物,但克隆效率总体偏低,克隆操作程序仍需进一步优化。本实验目的是优化体细胞克隆操作中的激活及...; 王慧利孟春花张庆晓李静心贺强苏磊汪薇曹少先; 文献传递

猪卵母细胞体外成熟及胚胎体外发育系统的优化: 本研究通过优化猪卵母细胞体外成熟期间的激素添加方式及孤雌胚胎的激活方案，以期建立比较完善的猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育系统，并将其应用于转基因体细胞核移植胚胎的体外发育。; 王慧利孟春花张庆晓李静心苏磊贺强朱前明曹少先; 关键词：胚胎工程猪卵母细胞孤雌激活胚胎发育

猪PRRS抗性筛选单核细胞来源巨噬细胞模型的建立: 2013年; 采用密度梯度离心法分离猪外周血单核细胞(PBMCs),通过添加GM-CSF刺激使PBMCs转化为外周血单核细胞来源巨噬细胞(MDMs);比较了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染MDMs和肺泡巨噬细胞(PAMs)不同时间的病毒载量及病毒TCID50,研究了PRRSV体外感染猪MDMs后复制和滴度的变化规律。结果表明:PBMCs转化的MDMs具有很好的墨汁吞噬能力,MAC387标记阳性;GM-CSF刺激PBMCs转化为MDMs的最适质量浓度为20 ng.mL-1,刺激时间为72 h时MDMs转化率最高;PRRSV体外感染12 h时MDMs中病毒载量达到最高值,随后迅速下降;细胞上清液的病毒滴度在12～24 h进入平台期,然后转入衰亡期,与PRRSV在PAMs中增殖趋势相似。本试验建立的PRRS抗性筛选MDM模型,具有受检猪只损伤小、简便易行的特点,可代替PAM细胞模型用于评价猪对PRRS的抗性。; 孟春花贺强苏磊李静心王慧利刘铁铮舒邓群曹少先; 关键词：抗性

猪肺泡巨噬细胞的分离、纯化和冷冻保存研究被引量：5: 2012年; 通过冷PBS气管灌洗法分离猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM),优化了PAM的纯化和冷冻保存方法,并进行了PAM纯度鉴定、细胞吞噬功能和存活率检测。结果表明:RPMI-1640培养液比DMEM培养液更适于PAM的培养和冷冻保存;巨噬细胞抗体MAC387免疫荧光检测表明,贴壁2h后更换培养液获得的PAM纯度最高(P<0.05);用70%RPMI-1640+20%新生牛血清+10%DMSO的体系冷冻保存细胞密度为1×107个/mL的PAM可获得高达98.09%的存活率,冻存前后PAM的墨汁吞噬率无显著差异(P>0.05)。; 孟春花曹少先苏磊贺强王慧利丰秀静张庆晓刘铁铮; 关键词：肺泡巨噬细胞纯化冷冻保存

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贺强