王洋
- 作品数：27 被引量：75H指数：5
- 供职机构：石河子大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划兵团青年科技创新资金专项更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 大黄素增加BK_(Ca)通道β_1亚基表达介导自发性高血压大鼠脑基底动脉舒张被引量：5
- 2014年
- 本文旨在研究大黄素干预后自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)脑基底动脉平滑肌细胞BKCa通道电生理特性和表达的变化。在使用大黄素干预处理前后,用尾动脉测压仪观察血压变化,用全细胞膜片钳记录技术观察SHR脑基底动脉平滑肌细胞BKCa通道电流的变化,用免疫组织化学染色和Western Blot观察平滑肌细胞BKCa通道表达变化。结果显示,大黄素干预后,SHR血压由(223±16)mmHg显著降低至(127±12)mmHg(P<0.01),与Wistar大鼠相比没有统计学差异。大黄素显著增加SHR平滑肌细胞外向电流(P<0.05),该增强作用可被BKCa通道特异性阻断剂IbTX所阻断。大黄素干预后SHR基底动脉平滑肌BKCa通道β1亚基表达明显上调(P<0.01)。以上结果提示,大黄素可能通过增加BKCa通道β1亚基表达,增强BKCa通道介导的外向电流,从而发挥舒张SHR脑基底动脉的作用。
- 张传林丛丽娜王蕊王洋马克涛赵磊司军强李丽
- 关键词：脑基底动脉大黄素大电导钙激活钾通道
- 神经病理性痛大鼠突触前抑制作用的改变及其第二信使系统变化的研究被引量：4
- 2012年
- 目的观察坐骨神经慢性压榨损伤(CCI)致神经病理性痛后,大鼠背根神经节(DR G)神经元γ-氨基丁酸A受体(GABAA受体)激活电流的改变及其细胞内第二信使系统的变化。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和CCI模型组。用穿孔膜片钳全细胞记录模式观察该3组大鼠DRG神经元GABAA受体特异性激动剂蝇蕈醇(muscimol)的激活电流,比较各组激活电流的特点;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测该3组大鼠DR G神经元内IP3、cAMP和cGMP的浓度变化。结果正常对照组、假手术组和CCI模型组大鼠DR G神经元在不同浓度muscimol时激活电流均为内向电流且幅值均呈浓度依赖性,各组的EC50值差异无统计学意义。CCI模型组在不同浓度muscimol时激活电流幅值与正常对照组、假手术组相比均显著减小,正常对照组和假手术组在不同浓度muscimol时激活电流幅值差异无统计学意义。CCI模型组DRG神经元中cAMP和cGMP的浓度与正常对照组和假手术组相比均显著升高,假手术组和正常对照组之间差异无统计学意义。正常对照组、假手术组和CCI模型组大鼠DRG神经元中IP3的浓度差异无统计学意义。结论在坐骨神经慢性压榨损伤的过程中,受损伤侧DRG神经元GABAA受体激活电流显著减小,受损伤侧DRG神经元内cAMP和cGMP的浓度显著升高。GABAA受体功能的减弱导致的突触前抑制作用减弱可能是神经病理性疼痛产生的重要原因之一,并且这种功能的减弱是细胞内cAMP和cGMP浓度的改变共同参与调节的结果。
- 王洋李思源马克涛司军强赵磊张忠双朱贺李丽
- 关键词：神经病理性痛背根神经节Γ-氨基丁酸A受体第二信使
- 豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞的原代培养及鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的联合2种常用的细胞培养方法从豚鼠耳蜗螺旋动脉中提取平滑肌细胞,为相关实验研究提供材料。方法从豚鼠耳蜗中分离出螺旋动脉,应用1.25g/L的胰蛋白酶进行消化并将组织块贴壁,运用自然纯化法及根据不同细胞贴壁能力的差异性对细胞进行纯化,通过形态学观察及免疫荧光、免疫组化和Western blot对细胞进行鉴定。结果 85%的组织块存活,第4代平滑肌细胞纯度达95%。镜下可见细胞呈典型的"峰-谷"样生长,免疫荧光、免疫组化及Western blot结果显示平滑肌细胞特异性的肌动蛋白呈阳性表达。结论通过本研究方法,可以得到大量高纯度的豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞,有望为内耳循环系统紊乱导致的病理生理变化的体外研究及血管平滑肌药物评价提供一个理想的研究材料。
- 肖靖杰张治平张治平司超王洋张伟李丽张亮马克涛
- 关键词：细胞培养肌动蛋白
- 豚鼠脑基底动脉平滑肌细胞的原代培养及鉴定
- 2018年
- 目的本研究联合使用直接贴壁法和酶消化法培养细胞,从豚鼠脑基底动脉中提取平滑肌细胞,为相关实验研究提供材料。方法从豚鼠颅内分离出脑基底动脉,用0.125%胰蛋白酶进行消化并将组织块贴壁,细胞用含20%胎牛血清的DMEM/F-12培养基进行培养。采用自然纯化法,并根据不同细胞贴壁能力的差异性对细胞进行纯化。通过形态学观察、免疫荧光、免疫组织化学法及Western blot检测对细胞进行鉴定。结果 85%组织块存活,第4代平滑肌细胞纯度达95%。镜下可见细胞呈典型的"峰-谷"样生长,免疫荧光、免疫组织化学法及Western blot检测显示,平滑肌细胞特异性的肌动蛋白呈阳性表达。结论通过本实验可以得到大量高纯度的豚鼠脑基底动脉平滑肌细胞,有望为颅内动脉粥样硬化等病理生理变化的体外研究及脑血管平滑肌药物评价提供一个理想的实验材料。
- 肖靖杰张治平王洋司超张亮张伟李丽李新芝马克涛
- 关键词：脑基底动脉细胞培养肌动蛋白
- 豚鼠耳蜗血管纹TMEM16A随鼠增龄的表达变化
- 2017年
- 目的探讨跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16A,TMEM16A)在不同鼠龄豚鼠耳蜗血管纹上的表达及其与年龄相关性听力下降之间的关系。方法将健康豚鼠按照年龄分为:2周组、3月组、1年组、D-半乳糖(D-galactose,D-gal)衰老模型组;听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测不同鼠龄豚鼠的听力变化;免疫荧光技术和免疫印迹实验(Western blot)检测TMEM16A在不同鼠龄豚鼠耳蜗血管纹中的分布和表达改变。结果 ABR反应阈值随鼠龄增长呈逐渐增高趋势,D-gal组与其他3组之间的差异具有统计学意义(P<0.01)。TMEM16A在不同鼠龄豚鼠耳蜗血管纹中均有表达,且表达量从2周组到1年组随鼠龄的增加呈上升趋势(P均<0.05);D-gal组表达量减少,与3月组和1年组均有统计学意义(P<0.05)。结论 TMEM16A在豚鼠耳蜗血管纹表达的变化可能与年龄相关性听力下降相关。
- 宋佳王洋刘艳辉马克涛李丽司军强
- 关键词：血管纹年龄相关性听力损失听性脑干反应
- 缝隙连接在自发性高血压大鼠肾叶间动脉收缩增强中的作用被引量：3
- 2014年
- 目的探讨肾叶间动脉(RIA)的缝隙连接(GJ)在自发性高血压病中的变化。方法应用压力肌动图技术观察自发性高血压大鼠(SHR)及Wistar大鼠RIA对内皮非依赖血管收缩剂氯化钾(KCl)和苯肾上腺素(PE)的收缩反应的差异,以及应用GJ阻断剂后血管收缩反应的变化。应用Western blot技术比较SHR及Wistar大鼠RIA连接蛋白45(Cx45)的表达差异。结果 1 KCl和PE诱导SHR RIA的收缩反应要强于Wistar大鼠,应用GJ阻断剂18β-甘草次酸(18β-GA)(100μmol/L)干预后,KCl和PE引起的RIA血管的收缩明显降低,SHR较Wistar大鼠收缩降低幅度更为显著。2 SHR大鼠RIA Cx45蛋白表达升高(P<0.05)。结论SHR RIA收缩作用的增强可能是通过上调Cx45增强平滑肌细胞间GJ通讯引起的。
- 张雯马克涛刘卫东王洋李丽司军强
- 关键词：自发性高血压大鼠蛋白
- 尼氟灭酸对CCI模型鼠DRG神经元TMEM16A表达的抑制作用被引量：4
- 2015年
- 目的：观察尼氟灭酸（niflumic acid,NFA）干预后,TMEM16A在坐骨神经压榨性损伤（chronic constriction injury,CCI）模型鼠背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）神经元上的表达,研究TMEM16A是否参与神经病理性疼痛。方法：制备CCI模型,热板实验检测热缩足反射潜伏期（thermal withdrawal latency,TWL）。在模型制备后第1 d开始以腹腔注射形式给予不同浓度的NFA干预14 d,取大鼠L4-6 DRG神经元进行实验。免疫荧光实验明确TMEM16A在DRG神经元中的分布;运用RTPCR技术和Western Blot技术在给予不同浓度NFA干预后,检测CCI模型DRG神经元上TMEM16A的mRNA水平和蛋白的表达。结果：（1）CCI组的TWL较正常组明显缩短,给予10μM、50μM和300μM的NFA干预后,各组TWL较CCI组均明显延长（P〈0.01,n=6）;50μM的NFA干预组较10μM的NFA干预组TWL也明显延长（P〈0.05,n=6）;但300μM的NFA干预组与50μM的NFA干预组相比,TWL时间差异无统计学意义。（2）免疫荧光显示TMEM16A主要存在于DRG神经元上;（3）CCI组mRNA水平较正常组明显增高;随着NFA浓度的增加,DRG神经元TMEM16A的mRNA水平较CCI组逐渐降低,差异具有统计学意义（P〈0.01,n=6）。（4）CCI组TMEM16A蛋白表达较正常组的明显增高;随着NFA浓度的增加,DRG神经元上TMEM16A蛋白表达较CCI组逐渐减低,差异具有统计学意义（P〈0.01,n=6）。结论：尼氟灭酸能抑制神经病理性疼痛大鼠DRG神经元TMEM16A的表达,而且与尼氟灭酸的剂量相关,提示钙激活氯通道可能参与或调控神经病理性疼痛的发生。
- 田镇溥王洋张文雯王艳萍马克涛李丽司军强
- 关键词：钙激活氯通道尼氟灭酸背根神经节
- 2-APB对自发性高血压大鼠脑微动脉平滑肌细胞缝隙连接的影响被引量：2
- 2014年
- 为探讨正常血压Wistar大鼠(Wistar rat,WR)和自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive rat,SHR)脑微动脉段平滑肌细胞电生理学及偶联力的异同,并观察2-氨基乙基二苯硼酸酯(2-Aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)对脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接的影响。应用全细胞膜片钳技术方法,观察2-APB对WR和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞膜电容(Cinput)、膜电导(Ginput)和膜电阻(Rinput)的影响。结果显示,(1)SHR收缩压明显高于正常WR,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)SHR脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput和Ginput高于WR,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)2-APB可以浓度依赖性的降低脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput和Ginput(或者增加Rinput)。(4)2-APB抑制WR和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞Ginput的IC50分别为0.21μmol/L和0.83μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)2-APB浓度≥100μmol/L时,WR和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput、Ginput或Rinput与单个平滑肌细胞十分接近。由此可知,SHR较WR脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接耦联力增强,2-APB可以浓度依赖地抑制WR和SHR脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接,且对SHR的抑制效力较强。
- 王洋马克涛张雯李丽赵磊魏丽丽司军强
- 关键词：自发性高血压大鼠平滑肌细胞
- 咪达唑仑对大鼠背根神经节神经元GABAA受体激活电流的影响被引量：2
- 2012年
- 目的咪达唑仑对大鼠背根神经节（DRG）神经元GABAA受体激活电流的影响。方法健康SD大鼠，体重200—250g，4周龄，雌雄不拘，分离DRG神经元，采用全细胞膜片钳技术记录GABAA受体激活电流。采用无糖细胞外液进行药物配制。记录咪达唑仑（终浓度3．00μmol／L，）与不同浓度（终浓度0．03、0．10、1．00、10．00、100．00、1000．00μmol／L）GABA混合液作用下的GABAA受体激活电流、不同浓度（终浓度0．03、0．10、1．00、3．00、10．00、100．00μmol／L）咪达唑仑作用下的GABAA受体激活电流、不同浓度（终浓度0．03、0．10、1．00、3．00、10．00、100．00μmol／L）咪达唑仑与GABA（终浓度100．00μmol／L）合液作用下的GABA。受体激活电流和不同咪达唑仑预灌注时间（灌注即刻、20、40、60、120s）时咪达唑仑（终浓度1．00μmol／L）与GABA（终浓度100．00μmol／L）混合液作用下的GABA。受体激活电流。计算咪达唑仑给药前后电流的增强率。结果对GABA敏感的神经元灌注咪达唑仑均未记录到可检测的膜电流变化；各浓度GABA下，咪达唑仑给药后GABAA受体激活电流均较给药前增强（P〈0．01）；各浓度咪达唑仑给药后DRG神经元GABAA受体激活电流均较给药前增强，且随咪达唑仑浓度升高，对DRG神经元GABAA受体激活电流的增强率逐渐升高，咪达唑仑3．00μmol／L时达峰值（P〈0．05或0．01）；随咪达唑仑预灌流时间延长，DRG神经元GABAA受体激活电流增强率逐渐升高，预灌流40s时达峰值（P〈0．05或0．01）。结论咪达唑仑可增强DRG神经元GABAA受体激活电流，提示咪达唑仑可通过增强GABAA受体活性，从而增强GABA的作用，在脊髓水平产生镇痛作用。
- 樊超马克涛杨越成洪聚王洋李丽司军强
- 关键词：咪达唑仑背根神经节
- 豚鼠耳蜗血管纹周细胞电生理特性的研究被引量：3
- 2016年
- 目的 了解豚鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞的电生理特性以及周细胞膜上钾通道的类型.方法 通过免疫荧光技术标记豚鼠耳蜗血管纹毛细血管周细胞相关蛋白,结合形态学特点进行单个周细胞的鉴定.利用全细胞膜片钳技术观察周细胞的基本电生理特性,并探讨给予钾通道阻断剂后周细胞外向电流的变化.结果 通过免疫荧光技术标记周细胞结蛋白desmin,结合形态学进行鉴定,发现豚鼠耳蜗血管纹存在周细胞,消化成单个周细胞后,形态保持完好.周细胞的膜电容为（5.9 ±0.3）pF,膜电阻为（2.2±0.3） GΩ,膜静息电位为（-30.9±1.2）mV;当指令电压为0 mV、＋ 20 mV、＋40 mV、＋60 mV时,周细胞的电流密度分别为（3.2±0.7）、（10.6±1.0）、（15.7±0.9）和（21.3±1.2）pA/pF.单个周细胞膜电流I/V关系呈明显的外向整流特性,并对1 mmol/L四乙胺和1 mmol/L 4-氨基吡啶敏感.给四乙胺前后的外向电流值分别为（296.2±35.9）pA和（163.7±16.8）pA,差异具有统计学意义（n=6,P＜0.01）;给4-氨基吡啶前后的外向电流值分别为（248.7±39.8）pA和（158.0±38.0） pA,差异具有统计学意义（n=6,P＜0.05）.结论 豚鼠耳蜗血管纹周细胞上的钾离子通道为大电导钙激活钾通道和电压依赖性钾通道.
- 刘艳辉王艳萍王洋马克涛司军强李丽
- 关键词：耳蜗周细胞钾通道膜片钳术
