王晓惠
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：沈阳农业大学生物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 柞蚕丝氨酸蛋白酶基因ApSP13的克隆及序列与表达分析被引量：4
- 2014年
- 丝氨酸蛋白酶在昆虫的多种生理生化过程中起重要作用。为了解柞蚕体内丝氨酸蛋白酶的分子特性及功能,克隆得到一个编码柞蚕丝氨酸蛋白酶基因的cDNA序列,命名为ApSP13(GenBank登录号:KF039687)。该基因的开放阅读框(ORF)长855 bp,编码284个氨基酸,蛋白质分子质量为29.59 kD,等电点(pI)为9.37。ApSP13的信号肽序列包含16个氨基酸残基,具有组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)催化中心,在成熟蛋白质中由6个保守的半胱氨酸残基组成3对二硫键,对维持蛋白质的三级结构起重要作用。将ApSP13氨基酸序列与其它昆虫的同源序列进行比对,结果与蓓带夜蛾(Mamestra configurata)的同源氨基酸序列相似度最高,达到67%。半定量RT-PCR检测表明,ApSP13在柞蚕4个发育阶段和5龄4 d幼虫各组织中均有表达,其中在幼虫期及5龄幼虫脂肪体中的表达水平最高。推测ApSP13可能在柞蚕的免疫及蛋白质消化吸收过程中发挥作用。
- 王晓惠黄伶姜义仁王勇钟亮文竹秦利
- 关键词：柞蚕丝氨酸蛋白酶基因克隆表达谱
- 柞蚕微孢子虫全长cDNA文库的构建及EST分析被引量：2
- 2014年
- 柞蚕微粒子病的病原为柞蚕微孢子虫（Nosemapernyi）。采用SMART（switchingmechanismat5＇-endofRNAtranscript）技术构建柞蚕微孢子虫全长cDNA文库，初始文库滴度4．2×10^pfu／mL，文库容量1．0×10^7pfu，重组率为98．39％。随机挑取32个克隆，经PCR检测插入的片段长度在750—3000bp之间，平均长度〉1000bp。挑选文库中864个克隆进行表达序列标签（EST）测序，得到626条高质量的EST，拼接后得到197条单一基因（unigenes），包含64条重叠群（contigs）和133条单一EST，冗余度为68．53％。将这些Unigenes与NCBI数据库进行比对，146条Unigenes在蜜蜂微孢子虫（Nosemaceranae）、家蚕微孢子虫（Nosemabombycis）、兔脑炎微孢子虫（Encephalitozooncuniculi）等的基因组中比对到同源基因。在随机EST测序中克隆获得一个孢子形成蛋白（spomlationprotein）基因，命名为脚s尸一1。该基因ORF长度为1014bp，编码337个氨基酸，蛋白质的理论分子质量为39．2kD，等电点5．71。柞蚕微孢子虫cDNA文库的构建及EST测序的完成，为进一步发现和研究柞蚕微孢子虫的功能基因奠定了基础。
- 王勇姜义仁王晓惠钟亮黄伶秦利
- 关键词：柞蚕微孢子虫CDNA文库表达序列标签
