谢水林
- 作品数：11 被引量：32H指数：4
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 人脐带间充质干细胞来源外泌体对小鼠压疮的治疗作用及机制被引量：4
- 2022年
- 目的探索人脐带间充质干细胞(huc MSC)来源外泌体(huc MSC-Exo)对小鼠4期压疮创面愈合的作用及其机制。方法原代分离、培养人脐带间充质干细胞,取第5代(P5代)细胞培养上清,通过差速离心法提取huc MSC-Exo。将27只成功制备4期压疮模型的BALB/c小鼠随机分为huc MSC-Exo治疗组(创周皮下注射100μg溶解于100μL PBS中的huc MSC-Exo)、PBS对照组(创周皮下注射100μL PBS)及模型对照组(未给予huc MSC-Exo和PBS处理)。治疗后评估压疮创面愈合情况,于0、3、7、10、14d拍照并计算创面愈合率;取治疗后7、14 d皮肤样本行H-E染色和Masson染色观察创面病理变化;取治疗后7 d皮肤样本行免疫组织化学染色检测与瘢痕形成相关的α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;取治疗后7、14 d血清检测氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的动态变化。结果huc MSC-Exo治疗组较PBS对照组及模型对照组创面愈合速度加快,瘢痕形成减少,创面愈合率升高。组织病理学结果显示,与PBS对照组及模型对照组比较,huc MSC-Exo治疗组创面损伤程度、炎性浸润情况明显减轻,胶原沉积量增多,胶原纤维排列分布有序。免疫组织化学染色结果显示,huc MSC-Exo治疗组α-SMA蛋白表达少于PBS对照组及模型对照组。血清生物化学检测结果示,huc MSC-Exo治疗组SOD活性在治疗后7 d高于PBS对照组及模型对照组(P均<0.05),到14 d接近正常水平;MDA含量在7 d和14 d均低于PBS对照组及模型对照组(P均<0.05)。结论皮下注射huc MSC-Exo可促进小鼠4期压疮创面愈合,减少瘢痕形成,其机制可能与huc MSC-Exo改善体内氧化应激水平有关。
- 罗雅婷解婧许涛谢水林张坚松刘劼
- 关键词：脐带间充质干细胞外泌体压疮氧化性应激
- LC-MS/MS法评价卡维地洛对人肝微粒体细胞色素P450酶5种亚型的体外抑制作用被引量：1
- 2013年
- 目的建立LC-MS/MS法评价卡维地洛对混合人肝微粒体细胞色素P450酶5种主要亚型(CYP1A2、2C9、2C19、2D6和3A4/5)的体外抑制作用情况。方法在混合人肝微粒体孵育体系中,分别以非那西汀O-脱乙基化(CYP1A2)、双氯芬酸4'-羟基化(CYP2C9)、S-美芬妥英4'-羟基化(CYP2C19)、右美沙芬O-去甲基化(CYP2D6)、咪达唑仑1'-羟基化(CYP3A4/5)和睾酮6β-羟基化(CYP3A4/5)反应作为5种P450酶亚型代谢活性的标志,用阳性抑制剂对试验体系进行验证。建立LC-MS/MS法检测各特征性反应的代谢物生成量,并计算各阳性抑制剂与卡维地洛的IC50值。结果卡维地洛对人肝微粒体CYP3A4/5和CYP2D6存在不同程度的抑制作用,其IC50值分别为4.3μmol.L-1(CYP3A4/5咪达唑仑羟基化反应)、5.6μmol.L-1(CYP3A4/5 6β-羟基睾酮羟基化反应)和27.2μmol.L-1;对其余3种CYP酶亚型则无显著抑制作用。结论建立的LC-MS/MS分析方法灵敏、准确、可靠,卡维地洛对人肝微粒体CYP3A4/5具有中等强度抑制作用,对CYP2D6亦存在较弱的抑制作用。
- 冯才林土生邓继锋戴仁科谢水林
- 关键词：卡维地洛细胞色素P450LC-MS
- 实验用西藏小型猪CYP3A46基因扩增梯度PCR方法的建立
- 2018年
- 目的:建立西藏小型猪CYP3A基因梯度PCR扩增方法。方法:以西藏小型猪肝脏总cDNA为模板,基于CYP3A46基因引物,对CYP3A46进行梯度PCR扩增(设计温度梯度55-65℃)。PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,获得特异性好的最佳退火温度。结果:各退火温度均能特异的扩增出1500bp左右的目的条带。结论:本反应体系及各温度梯度均可特异性扩增西藏小型猪CYP3A46基因,为进一步克隆表达奠定了基础。
- 卢康荣白静张嘉宁谢水林顾为望黄黎珍王万山
- 关键词：细胞色素P450酶西藏小型猪克隆
- 他汀类药物在高脂血症大鼠体内的PK-PD关系研究被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨他汀类药物在高脂血症大鼠体内暴露水平(药代动力学参数AUC)与药效之间的关系。方法:建立大鼠高脂血症模型,给予不同剂量的他汀类药物干预治疗,进行药代动力学和药效学测定,计算药代动力学/药效学(PK/PD)值,并进行相关分析。结果:TG-AUC在药代动力学(AUC)变化范围内(0～10.96倍)线性关系良好,Y=0.01036 X-7.6445(γ=0.9599)。胆固醇(CHOL)-AUC、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)-AUC、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)-AUC由于中间数据偏低,与预测样本数据偏差太大,线性关系不明显。结论:TG-AUC在药代动力学(AUC)变化范围内(0～10.96倍)线性关系良好,可以在知道药代动力学的相关数据基础上对药效进行预测。
- 李静远蔡家利戴仁科谢水林邓继锋卢沛枫李认书孙鹤刘延淮
- 关键词：高脂血症动物模型他汀类药物药代药效学
- 基于非靶向代谢组学的缺血性脑卒中生物标志物的分析
- 2025年
- 缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)生物标志物的探索仍未满足临床需求。本研究应用非靶向代谢组学方法,探索IS后血浆和脑组织中的差异代谢物和代谢通路,寻找新的潜在生物标志物和治疗靶点。将12头西藏小型猪随机分为模型组和假手术组,采用额颞入路电凝闭塞大脑中动脉构建缺血性脑卒中模型。术后36 h收集血浆及脑组织样本,采用液相色谱-质谱联用技术进行检测,在p<0.05的条件下进行主成分分析与偏最小二乘判别分析,筛选差异代谢物并剔除外源性代谢物,最后进行HMDB(Human Metabolome Database)化合物分类、KEGG通路分析及VIP分析。血浆代谢组学结果显示,86个差异代谢物上调,149个下调,显著差异代谢产物包括(Z)-3-氧代-2-(2-戊烯基)-1-环戊乙酸、反式肉桂酸和肉桂酰甘氨酸。脑组织代谢组学结果显示58个差异代谢物上调,53个下调,显著差异代谢物包括2,3-二氢黄酮-3-醇、胍基乙酸(GAA)、N-乙酰-D-色氨酸、氧化型谷胱甘肽、2-羟基喹啉和N-乙酰-L-天冬氨酸(NAA)。在血浆和脑组织中,前五类化合物中共同化合物类别为有机酸及其衍生物、脂质和脂质样分子、有机杂环化合物以及有机氧化合物。血浆和脑组织的共同代谢通路涉及氨基酸代谢、消化系统、癌症概述和脂类代谢通路。(Z)-3-氧代-2-(2-戊烯基)-1-环戊乙酸、GAA、氧化型谷胱甘肽及NAA可能是潜在的生物标志物。本研究为IS的早期筛查和临床治疗方法的开发提供了理论基础。
- 徐菲刘天平关雅今郝伟超温鼎声谢水林别亚男
- 关键词：缺血性脑卒中生物标志物血浆脑组织
- LC-MS/MS同时测定复方救必应胶囊中3种同分异构体的含量被引量：6
- 2018年
- 目的建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法,以同时分离测定复方救必应胶囊中3种互为同分异构体的有效成分(α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮),并对随机抽样的3批复方救必应胶囊进行质量分数比较。方法采用Simpsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液(体积比95∶5)为流动相,25 min内进行等度洗脱。流速为0.3 mL/min,柱温为室温,进样量为20.0μL。选用电喷雾离子源(ESI),正离子模式下多反应监测扫描(MRM),优化相关质谱参数,对3种有效成分进行检测和定量分析。结果α-香附酮、香附烯酮在质量浓度0.45～200μg/L范围内线性关系良好(r≥0.996 6);圆柚酮在质量浓度3～1 500μg/L范围内线性关系良好(r=0.996 0)。α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮的平均加样回收率皆在95%～105%,RSD<3.5%(n=6)。3批复方救必应胶囊中α-香附酮、香附烯酮、圆柚酮的平均质量分数分别为437.17、847.39、42.92μg/g,RSD<15%。结论本方法准确可靠、结果稳定、重复性良好、灵敏度高,可用于复方救必应胶囊中3种同分异构体有效成分的质量分数测定。
- 黄明萍谢水林戴仁科
- 关键词：液质联用Α-香附酮同分异构体
- 两种造模方法建立小鼠先兆子痫模型比较研究被引量：2
- 2023年
- 目的对比分析小鼠先兆子痫(pre-eclampsia,PE)模型两种造模方法的差异,为不同类型先兆子痫动物模型的选择提供参考。方法将24只CD-1孕鼠随机分成4组:脂多糖对照组、脂多糖组、雷西莫特(R848)对照组、R848组,每组6只。脂多糖对照组和脂多糖组于妊娠第13、14、15、16、17天分别尾静脉注射生理盐水或LPS(4 mg/kg);R848对照组和R848组于妊娠第13、15、17天分别腹腔注射R848溶剂(5%DMSO+40%PEG300+5%Tween-80+50%saline)或R848(10 mg/kg);同时于妊娠第12、14、16、18天测量尾动脉收缩压;给药后于妊娠第18天解剖,进行尿蛋白/尿肌酐检测、抗血管生成因子检测及HE染色。结果与对照组相比,两种造模方法均出现妊娠期高血压(LPS组的妊娠第14、16、18天的血压分别为:(142.16±4.81)mmHg、(144.07±2.91)mmHg和(143.31±4.61)mmHg;R848组的妊娠第14、16、18天的血压分别为:(154.00±5.29)mmHg、(147.44±3.24)mmHg和(140.77±2.00)mmHg);尿蛋白/尿肌酐检测结果显示,LPS模型组比值升高(P<0.05),R848组无统计学差异(P>0.05);血清抗血管生成因子检测结果显示,与对照组相比,脂多糖组sFlt-1和sEng表达量无统计学差异(P>0.05),R848组血清内sFlt-1和sEng表达量均升高(P<0.01);HE结果显示,与对照组相比,R848组出现孕鼠胎盘血管慢性损伤,合胞体滋养层广泛增生。结论两种造模方法均能使孕鼠出现高血压、胎儿生长受限、内皮功能障碍等PE症状。腹腔注射R848造模法较尾静脉注射LPS法对动物的损伤程度更严重,且给药方式为腹腔注射,操作简单。
- 许佳欢别亚男陈千晴陈柏羽欧宝芳谢水林吴少瑜
- 关键词：先兆子痫脂多糖动物模型
- 改良后Hulth法和Ⅱ型胶原酶注射法建立兔膝骨关节炎模型的比较研究被引量：8
- 2022年
- 目的对比分析兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型两种常用造模方法的差异,为不同类型膝骨关节炎动物模型的选择提供参考。方法将9只健康新西兰大白兔随机分为3组:空白组、改良后Hulth组、胶原酶组。改良后Hulth组和胶原酶组分别给予改良后Hulth法、关节腔内注射胶原酶干预,1周后每日促使其活动,6周后进行Lequesne MG评分、X-ray、Micro-CT、Pelletier评分、Mankin评分、ELISA检测,观察膝关节大体及病理改变。结果与空白组相比,两种造模方法的兔膝关节软骨表面均出现缺损;病理结果显示软骨层出现裂隙,番红O染色减退,潮线扭曲并伴有血管通过;ELISA结果显示空白组、改良后Hulth组和胶原酶组血清内TNF-α含量分别为(624.99±17.82),(1140.56±129.81)和(1480.69±492.08)pg/mL,血清内IL-1β含量分别为(30.23±0.25),(46.67±0.71)和(46.82±1.04)pg/mL,改良后Hulth组和胶原酶组与空白组相比,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。另外,改良后Hulth组膝关节伴有骨赘生成,股骨内髁软骨损伤更为严重,而胶原酶组损伤部位主要为胫骨内髁。结论两种造模方法均能构建理想的KOA模型。改良后Hulth法的损伤程度更严重;胶原酶诱导的模型损伤方式更接近人KOA进程与发病机制。
- 欧宝芳别亚男陈千晴陈柏羽许佳欢谢水林吴少瑜
- 关键词：膝骨关节炎动物模型
- 人脐带间充质干细胞治疗小鼠急性肺损伤的安全性及有效性研究被引量：2
- 2022年
- 目的 探讨人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)治疗脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠模型的安全性及有效性。方法 通过致瘤性实验、体外溶血实验、急性毒性实验评价HUC-MSCs安全性。以6~8周龄C57BL/6雄性小鼠为实验对象,使用LPS滴鼻或腹腔注射构建急性肺损伤模型。造模后6 h给予HUC-MSCs治疗,将治疗组分为:尾静脉注射组(5×10^(7)cells/kg)、雾化组(HUC-MSCs条件培养基)。造模后96 h观察各组小鼠肺组织病理结果,瑞氏-姬姆萨染色法观察小鼠肺泡灌洗液(BALF)炎性细胞计数和分类。结果 HUC-MSCs无致瘤性、无明显溶血反应,无急性毒性。与对照组相比,两种造模方法均出现一定程度的肺损伤,肺组织病理切片McGuigan评分结果显示腹腔注射LPS引起的肺损伤较滴鼻组严重。与模型组相比,治疗组肺组织损伤程度明显减轻,其中尾静脉注射组治疗效果优于雾化组,BALF中巨噬细胞数明显升高(P<0.001)。结论 LPS腹腔注射诱导的小鼠急性肺损伤模型优于滴鼻给药。尾静脉注射人脐带间充质干细胞可有效治疗小鼠急性肺损伤,使用HUC-MSCs条件培养基雾化给药可缓解小鼠肺部炎症。
- 陈千晴别亚男陈柏羽许佳欢欧宝芳谢水林吴少瑜
- 关键词：急性肺损伤人脐带间充质干细胞安全性
- piggyBac转座子介导HepG2细胞不同亚型药物代谢酶稳定共表达方法比较被引量：1
- 2018年
- 目的在piggy Bac(PB)转座子介导下,探索在HepG2细胞中实现多个药物代谢酶稳定共表达的策略,为建立体外药物代谢和肝毒性研究的理想细胞模型奠定基础。方法首先选择3种目前针对大片段DNA使用较广的转染方法:Lipofectamine~?LTX,Gen Jet^(TM)(Ver.Ⅱ)和Neon~?Transfection System,分别转染N端标记增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-N2)和2A串联重组细胞色素3A4(CYP3A4)和CYP2C19的PB转座子质粒(pPB-CYP3A4-2A-2C19)至HepG2细胞,48 h后比较不同方法的转染效率和细胞毒性,确立高效低毒的HepG2细胞转染方法。然后选择该法进行转染,将设计的3组PB重组转座子:单基因转座子(PB-CYP3A4)、2A串联多基因转座子(PB-CYP3A4-2A-2C19)、多个单基因转座子混合物[PB-CYP3A4,PB-CYP2C8,PB-CYP2A6,有机阴离子转运多肽1B1的PB转座子(PB-OATP1B1)]分别转染HepG2细胞,利用嘌呤霉素和GFP进行单克隆细胞筛选:挑选具有抗性且表达GFP的细胞单克隆并进行扩大培养,采用实时荧光定量PCR、Western蛋白质印迹和高效液相色谱-串联质谱联用法分别检测各组药物代谢酶m RNA、蛋白质水平及酶活性,并进行统计分析。结果 3种转染方法比较发现,Gen Jet^(TM)法的转染效率显著高于其他2种(P<0.01),介导pEGFP-N2和pPB-CYP3A4-2A-2C19的转染效率分别高达(94.2±2.5)%和(89.3±3.3)%,且该法具有较低的细胞毒性。因此选择Gen Jet^(TM)法进行后续PB转座子转染。分别转染3组PB重组转座子发现,单个转座子PB-CYP3A4和PB-CYP3A4-2A-2C19转染后,筛选获得的抗性细胞克隆中各个药物代谢酶在m RNA、蛋白质及活性水平均显著提高,其中2A可实现CYP3A4和CYP2C19药物代谢酶协同稳定表达;而多个转座子混合共转染细胞中,仅有随机几个基因表达;且各药物代谢酶基因的表达不均衡,仅CYP3A4药物代谢酶基因在单克隆细胞中表达水平明显升高。结论 Gen Jet^(TM)法可成为PB重组转座子转染HepG2细胞的有效方法。
- 庞士慧钟国瑞谢水林李浩健邹淑香贾英戴仁科黄黎珍
- 关键词：PIGGYBAC转座子HEPG2细胞药物代谢酶
