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抗氧化性丝素蛋白水解产物的生产工艺及其改善过氧化氢所致HepG2细胞损伤机制: 2016年; 目的:抗氧化性丝素蛋白(SF)胰酶水解工艺的优化。研究水解物对过氧化氢(H2O2)造成人肝癌Hep G2细胞损伤的改善作用,对其机制进行初步探讨。方法:以超氧自由基清除率为指标,设计正交试验考察丝素蛋白胰酶水解过程中反应时间、p H、温度、底物浓度、酶浓度对水解工艺的影响。测定水解产物的分子量分布及其对羟基自由基清除率和H2O2诱导的红细胞氧化溶血抑制率。用不同浓度H2O2处理细胞24 h,测定细胞活性,选择合适浓度的H2O2损伤细胞。然后再将细胞分为空白组(不加药物处理),H2O2损伤组,H2O2损伤+5 mmol·L-1N-乙酰半胱胺酸(NAC)治疗组,H2O2损伤+10,20,30,50 g·L-1SF治疗组。观察细胞活性,丙二醛(MDA)含量,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)的变化。结果:最佳水解工艺是酶浓度6%,反应时间160 min,底物质量浓度20 g·L-1,p H 8,温度38℃,此水解条件下所得水解液对超氧自由基清除率为72.73%,水解物分子量在10 k Da以下,对羟基自由基清除率和红细胞氧化溶血抑制率均提高。H2O2损伤细胞后细胞活性降低并且细胞中MDA含量增加(P<0.05)。与H2O2损伤组比较SF治疗组中细胞活性升高,MDA的含量也降低(P<0.05)。H2O2损伤细胞后,TNF-α含量上升,SOD,CAT的活性和T-AOC能力均下降(P<0.05),SF治疗能降低TNF-α含量,提高SOD,CAT分泌量和增强T-AOC能力(P<0.05)。结论:抗氧化性丝素蛋白水解物对过氧化氢致Hep G2细胞损伤有改善作用,机制是通过降低TNF-α含量,提高细胞活力和增加细胞中抗氧化酶活性。; 朱震王小娟邓晗依李春春银华安艳; 关键词：丝素蛋白水解细胞活性脂质过氧化

亚砷酸钠致人支气管上皮细胞恶性转化过程中氧化应激指标变化被引量：3: 2014年; 目的探讨在亚砷酸盐致人支气管上皮(HBE)细胞恶性转化过程中氧化应激指标的变化趋势,初步探讨其对细胞恶性转化的作用。方法用1μmol/L亚砷酸钠连续染毒HBE细胞。通过形态学观察、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及软琼脂克隆实验鉴定细胞恶性转化情况,分别于暴露1、8、15、22、29、36、43代,以流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平,检测细胞丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果亚砷酸钠长期染毒HBE细胞至43代时,细胞生长速度明显加快,且呈浸润型生长,MMP-9分泌量升高,细胞集落数量增多。与正常对照(0代)比较,22代及以前HBE细胞内ROS、MDA及SOD的水平均呈先升高后下降的波浪形趋势;29代及以后,ROS、MDA水平逐渐下降,且以ROS表现更为明显,而SOD水平呈逐渐升高趋势。结论细胞内氧化-抗氧化平衡失调可能在低剂量砷化合物诱导HBE细胞恶性转化过程中发挥重要作用。; 杨旭王大朋许熙国马园王小娟朱震赵莹莹陈敏许菲菲付乐朱继刚高芬芳安艳; 关键词：人支气管上皮细胞亚砷酸盐恶性转化氧化应激

线粒体DNA在砷致人支气管上皮细胞毒性中的作用: 【目的】线粒体(mitochondrion)是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器,是细胞中制造能量的结构,线粒体DNA(mtDNA)是唯一存在于人类细胞质中的DNA分子,独立于细胞核染色体外的基因组,具有自我复...; 王小娟朱震邓晗依李春春安艳; 关键词：砷人支气管上皮细胞线粒体DNA 细胞毒性; 文献传递

长期低剂量亚砷酸钠染毒对人支气管上皮细胞和人角质形成细胞增殖的影响被引量：3: 2017年; 目的探讨1.0μmol/L亚砷酸钠慢性染毒对人支气管上皮细胞(HBE)和人角质形成细胞(Ha Ca T)体外增殖的改变及其调控机制。方法以体外培养的HBE和HaCaT细胞恶性转化模型为研究对象,应用MTT法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期改变,利用Western blot检测细胞周期相关蛋白cyclin E、cyclin D1、cylin A蛋白的表达。结果染砷组HBE细胞36代和43代、HaCaT细胞28代和35代相对增殖率均高于传代对照组(P<0.01和P<0.05);细胞周期G1期细胞比例下降(P<0.05),S期细胞比例上升(P<0.05);此外,细胞周期相关蛋白cyclin E表达升高(P<0.05),并在晚期持续性高表达。结论低剂量亚砷酸钠可通过上调HBE和Ha Ca T细胞中cyclin E的表达从而使细胞从G1期逃逸至S期,加速细胞增殖,最终导致细胞发生恶性转化。; 邓晗依王小娟朱震李春春倪一平安艳; 关键词：亚砷酸钠细胞增殖 CYCLIN

活性氧、丙二醛及超氧化物歧化酶在NaAsO_2致人角质形成细胞恶性转化过程中的动态变化被引量：7: 2015年; 目的探讨氧化应激相关指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)在砷致人角质形成细胞(human keratinocytes,Ha Ca T)恶性转化不同阶段的动态变化。方法以含1.0μmol/L Na As O2的DMEM高糖完全培养基连续培养Ha Ca T细胞35代后,用基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平变化、细胞生长动力学改变和软琼脂集落形成实验鉴定其是否发生恶性转化。分别收集0、1、7、14、21、28和35代细胞,采用流式细胞仪检测不同代数细胞内ROS活性,生化法检测细胞内MDA含量及SOD活性变化。结果 1.0μmol/L Na As O2处理Ha Ca T细胞28代开始MMP-9相对蛋白水平明显上升,35代后细胞生长速度明显增快,倍增时间明显缩短;软琼脂集落形成数为(107±11)个,较对照组(24±7)明显增多(P<0.01)。ROS水平在染毒0到14代间呈先上升后下降随后再上升趋势,14代以后ROS水平逐渐降低。MDA含量在染毒1代时达到峰值,随后呈缓慢下降趋势。SOD活性在染毒0到21代呈先上升后缓慢下降趋势,21代以后其活性再次升高,呈持续上升趋势,且较0代明显升高(P<0.05)。结论低剂量亚砷酸钠长期诱导Ha Ca T细胞发生恶性转化过程中伴随细胞内氧化-抗氧化平衡失调,染毒后期SOD活性持续增加而ROS水平持续降低。; 马园王大朋许熙国杨旭王小娟朱震赵莹莹陈敏许菲菲付乐朱继刚高芬芳安艳; 关键词：亚砷酸盐 HACAT细胞恶性转化

长期低剂量亚砷酸钠染毒对HBE和HaCaT细胞增殖的影响: [目的]探讨1.0μmoL亚砷酸钠慢性染毒对人支气管上皮细胞(HBE)和人角质形成细胞( HaCaT)体外增殖的改变及其调控机制.[方法]以体外培养的HBE和 HaCaT细胞悉性转化模型为研究对象,应用MTT法检测细胞增...; 邓晗依王小娟朱震李春春倪一平安艳; 关键词：亚砷酸钠细胞增殖 CYCLIN

丝素肽对过氧化氢致A549细胞损伤的修复作用被引量：2: 2016年; [目的]探究丝素肽(SF)对过氧化氢(H2O2)致人肺癌(A549)细胞损伤的修复作用。[方法]将细胞分为空白对照组,H2O2组(600μmol/L),SF前处理组(10、20、30、50 mg/m L SF预孵育24 h再加600μmol/L H2O2损伤24 h),SF后处理组(600μmol/L H2O2损伤24 h再加10、20、30、50 mg/m L SF孵育24 h)及阳性对照前、后处理组[抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)]。用MTT法测定细胞活力,生物化学法测定细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的含量和总抗氧化能力(T-AOC)。[结果]H2O2组细胞活力为(46.67±2.19)%,MDA含量为(64.31±3.22)nmol/mg(以蛋白计)。与H2O2组相比,前处理组和后处理组中细胞活力增加,而MDA含量降低(P<0.05);SF后处理组细胞活力的增加和MDA含量的降低更明显(P<0.05);尤其50 mg/m L SF后处理组比前处理组细胞活力增加值高2.33%,而MDA含量降低值少44.51 nmol/mg(以蛋白计)。H2O2组中SOD、CAT活性和T-AOC都明显降低(P<0.05),SF后处理明显提高SOD、CAT活性和T-AOC水平(P<0.05)。[结论]SF对H2O2致A549细胞损伤有修复作用,部分原因可能是由于其可增加细胞活力和提高细胞中抗氧化酶活性。; 朱震王小娟邓晗依李春春银华安艳; 关键词：丝素肽过氧化氢抗氧化细胞活力脂质过氧化抗氧化酶

慢性砷暴露对人支气管上皮细胞超微结构的影响: 2017年; 目的研究长期亚砷酸钠诱导人支气管上皮细胞(HBE)恶性转化过程中线粒体及其他细胞器超微结构的改变,为砷致癌的机制研究提供动态细胞形态学改变基础资料。方法用1.0μmol/L亚砷酸钠连续染毒HBE细胞至43代,分别取正常和亚砷酸钠暴露1、8、15、22、29、36、43代HBE细胞,用流式细胞仪和生化法分别检测不同组别细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力的变化,用透射电镜观察亚砷酸钠暴露15、29、43代和传代对照的HBE细胞内各细胞器超微结构的改变,用real-time PCR检测不同组别细胞内线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的变化。结果与正常HBE细胞(0代)比较,亚砷酸钠染毒组22代及以前的ROS、MDA及SOD水平均呈先升高后下降的趋势;染毒29代及以后的ROS、MDA水平逐渐下降,SOD水平逐渐升高。透射电镜观察,与传代对照组细胞比较,染毒15代细胞的线粒体开始出现肿胀,嵴模糊,内质网扩张,且细胞mtDNA拷贝数增加;染毒29代及以后线粒体肿胀明显,嵴断裂,呈明显空泡状态,且有膜增殖、盘绕现象,mtDNA拷贝数先降低后升高,且均高于传代对照,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 1.0μmol/L亚砷酸钠在诱导HBE细胞恶性转化的过程中发生了细胞内氧化-抗氧化状态失衡,且随着染毒代数的增加,细胞线粒体DNA拷贝数增加明显,超微结构观察有细胞内线粒体肿胀、内质网扩张及膜增殖等变化。; 王小娟杨旭王大朋许熙国马园朱震邓晗依李春春安艳; 关键词：亚砷酸钠人支气管上皮细胞超微结构

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朱震

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