张继凯
- 作品数：10 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猫疱疹病毒1型HR-1毒株的分离鉴定及致病性分析被引量：3
- 2019年
- 从哈尔滨市某宠物医院疑似感染1型猫疱疹病毒发病猫的眼、鼻拭子中分离到1株病毒,经过电镜观察、分子生物学、血清学和动物回归试验鉴定,分离到的病毒为猫疱疹病毒1型,命名为HR-1株。HR-1可在猫肾细胞(CRFK)上产生典型细胞病变,病毒滴度可达到108 TCID50/mL。提取病毒基因组DNA经过gD引物扩增后,得到1条1 125 bp大小的特异性条带,经测序表明其与C-27毒株gD基因序列相似性达100%。间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,接种HR-1的单层CRFK细胞出现特异性荧光。电镜观察可见圆形、有囊膜、直径约为150 nm的病毒颗粒。为了解该毒株的毒力及致病性,通过感染中国家猫进行致病性试验。结果表明,HR-1为强毒株,对家猫的致死率为100%;HR-1感染家猫后主要表现为眼结膜炎和鼻气管炎;通过实时荧光定量PCR能从感染家猫的眼、鼻拭子中检测到病毒粒子核酸,并且于感染后4~6 d病毒核酸达到最高峰。本试验为猫疱疹病毒的诊断和致病机制的研究提供了参考价值.
- 刘晓晓刘永相张继凯程晨曦黄佳培田进曲连东
- 关键词：GD基因
- 蓝舌病病毒新型NS4蛋白的亚细胞定位分析及功能预测被引量：8
- 2016年
- 蓝舌病病毒（bluetongue virus,BTV）编码4种非结构蛋白（NS1~NS4）,其中NS4是新发现的非结构蛋白。为深入探索该新型非结构蛋白的功能,本研究首先采用生物信息学分析其序列结构特征及可能的功能域,结果发现NS4蛋白的N端α-螺旋结构域中具有富含碱性氨基酸的核定位信号（NLS）,而C端α-螺旋结构域中具有亮氨酸拉链结构的核输出信号（NES）。为进一步证实NS4的亚细胞定位,本试验构建了表达NS4全长及其缺失突变体的重组质粒,结果显示缺失NLS的NS4重组蛋白弥散在胞浆,而缺失NES后NS4重组蛋白只定位于细胞核,表明NS4蛋白亚细胞定位具有核—胞浆穿梭过程。最后结合3D同源建模发现NS4与CCAAT增强子结合蛋白（C/EBPβ）等具有较高的同源性,据此推测NS4可能为转录调控蛋白,与DNA或其他转录因子存在相互作用。总之,本研究为NS4蛋白的功能研究提供了更多新线索和新思路,填补了BTV基础研究的空白。
- 吕爽杨涛孙恩成徐青元张继凯吴东来
- 关键词：蓝舌病病毒亚细胞定位同源建模
- 蓝舌病病毒衣壳蛋白VP2、VP5、VP7酵母双杂交诱饵质粒的构建及鉴定
- 2016年
- 蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)的结构主要由3层衣壳蛋白组成,其中VP2、VP5蛋白构成了BTV的外层衣壳,VP7蛋白构成了BTV的中间衣壳,最内层衣壳则由VP3蛋白构成。VP2、VP5及VP7蛋白在BTV侵染宿主细胞的过程中起着非常重要的作用。为了研究BTV与宿主细胞相互作用的分子机制,本研究将BTV的VP2、VP5、VP7基因分别克隆到pGBKT7载体中,成功构建了pGBKT7-VP2、pGBKT7-VP5与pGBKT7-VP7 3个诱饵质粒,且通过自激活和毒性验证,证明所构建的3个质粒均无自激活作用,对酵母细胞无毒性作用。本研究为今后利用酵母双杂交筛选VP2、VP5、VP7蛋白中与宿主细胞相互作用的蛋白做好了铺垫,为深入研究BTV与宿主细胞的相互作用奠定了基础。
- 张继凯孙恩成杨涛徐青元吕爽王海秀张沁吴东来
- 关键词：蓝舌病病毒自激活作用
- 蓝舌病病毒新型NS4蛋白的亚细胞定位分析及其功能预测
- ＜正＞研究目的:蓝舌病（Bluetongue,BT）是由蓝舌病病毒BTV引起的反刍动物绵羊等的虫媒传染病。NS4是新发现的BTV的一种非结构蛋白,位于S9基因上,与VP6的ORF相重叠,实验证实其是复制非必需蛋白,具有非...
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- 蓝舌病病毒1型衣壳蛋白VP2、VP5、VP7酵母双杂交诱饵质粒的构建及鉴定
- 研究目的:蓝舌病(Bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起的反刍动物虫媒(如库蠓、伊蚊等)传染病。蓝舌病病毒基因组由10个大小不同的双股RNA组成,分别编码7种结构蛋白(VP1P7)和4种非结...
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- 蓝舌病病毒1型衣壳蛋白VP2、VP5、VP7酵母双杂交诱饵质粒的构建及鉴定
- <正>研究目的:蓝舌病(Bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起的反刍动物虫媒(如库蠓、伊蚊等)传染病。蓝舌病病毒基因组由10个大小不同的双股RNA组成,分别编码7种结构蛋白(VP1~VP7)...
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- 文献传递
- 蓝舌病病毒新型NS4蛋白的亚细胞定位分析及其功能预测
- <正>研究目的:蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病病毒BTV引起的反刍动物绵羊等的虫媒传染病。NS4是新发现的BTV的一种非结构蛋白,位于S9基因上,与VP6的ORF相重叠,实验证实其是复制非必需蛋白,具有非...
- 吕爽杨涛徐青元孙恩成张继凯吴东来
- 文献传递
- 蓝舌病病毒1型衣壳蛋白VP2、VP5、VP7酵母双杂交诱饵质粒的构建及鉴定
- 蓝舌病(Bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起的反刍动物虫媒(如库蠓、伊蚊等)传染病.蓝舌病病毒基因组由10个大小不同的双股RNA组成,分别编码7种结构蛋白(VP1～VP7)和4种非结构蛋白...
- 张继凯孙恩成杨涛徐青元吴东来
- 关键词：蓝舌病病毒基因酵母双杂交
- 文献传递
- 水貂杯状病毒SD1株的分离鉴定及序列分析
- 2020年
- 为分析水貂杯状病毒中国分离株的遗传特征,本研究于2018年在山东地区某水貂养殖场内感染圆环病毒死亡的水貂中分离到1株水貂杯状病毒(mink calicivirus,MCV),命名为SD1株,本研究对其进行了PCR鉴定、电镜观察和遗传演化分析。结果显示,SD1株可在MDCK细胞上产生明显细胞病变。电镜观察可见病毒粒子表面成楔形杯状样凹陷,无囊膜,具有杯状病毒的形态特征。遗传演化分析显示,SD1株与2007年国内2株MCV的同源性分别为92.0%和91.2%,为水疮性病毒属新成员;RdRp基因编码的氨基酸序列比对分析显示其相对保守,蛋白变异不大,而vp1基因推导的氨基酸序列比对分析显示其变异较大,与国内分离株(MF677852)相比存在47处替换,该变异是否会引起病毒致病力的改变有待进一步解析。本研究为MCV流行株病原学研究提供参考,同时提示需重视MCV在水貂病毒感染中的作用。
- 黄佳培康洪涛刘晓晓刘永相张继凯李志杰田进曲连东
- 关键词：遗传演化分析
- 蓝舌病病毒新型NS4蛋白的亚细胞定位分析及其功能预测
- 研究目的:蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病病毒BTV 引起的反刍动物绵羊等的虫媒传染病.NS4是新发现的BTV 的一种非结构蛋白,位于S9 基因上,与VP6 的ORF 相重叠,实验证实其是复制非必需蛋白,具...
- 吕爽杨涛徐青元孙恩成张继凯吴东来
