王楠
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：潍坊医学院更多>>
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- 布鲁氏菌OMP25的表达、纯化、鉴定及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2017年
- 目的表达和纯化布鲁氏菌OMP25重组蛋白并制备OMP25多克隆抗体,为建立布鲁氏菌病的诊断方法奠定基础。方法采用PCR方法扩增M16羊布鲁氏菌标准菌株的OMP25外膜蛋白基因,连接载体质粒pET-30a(+)并导入受体细胞DH5α中,构建重组PET-30a(+)-OMP25质粒,转化至Rosetta(DE3)菌株,收集表达的蛋白,用Ni2+NTA柱纯化试剂盒进行纯化。用纯化的重组蛋白免疫家兔,制备OMP25多克隆抗体,Western blot检测抗体特异性。结果成功构建重组质粒PET-30a(+)-OMP25,导入受体细胞Rosetta(DE3),获得重组蛋白,纯化后免疫家兔,制备的OMP25多克隆抗体与OMP25重组蛋白发生特异性反应。结论成功构建重组质粒PET-30a(+)-OMP25,表达的重组蛋白具有免疫原性,并制备了高纯度、高效价的多克隆抗体,为布病免疫诊断方法的建立奠定了基础。
- 吴倩倩冯佳佳孙铭艳王保强王楠陶元勇
- 关键词：布鲁氏菌纯化多克隆抗体
