公共文化服务平台

东北地区3株猪细小病毒7型毒株基因组测定及遗传进化分析被引量：3: 2018年; 从东北地区采集的150份猪肺脏样品中,检测出3株猪细小病毒毒株。根据PPV7标准株NCBI登录号KU563733设计3对引物,对3个病毒株的基因片段进行扩增测序,将测序结果依次进行拼接,获得3个病毒株的NS1和CP基因序列,然后进行序列的同源性比对及进化树分析。结果显示:3个毒株的NS1基因序列与经典PPV7毒株的同源性分别为94.4%～95.2%、94.1%～95.1%和93.5%～94.3%;CP基因序列与经典PPV7毒株的同源性分别为89.6%～91.8%、89.8%～92.0%和89.6%～91.7%。通过进化树比对分析,确认3株PPV毒株为PPV7亚型。通过对其他病毒进行检测,发现PPV7与PCV2、PPV2的混合感染率较高。该分析结果为我国东北地区猪病防控提供了依据。; 张涵张涵李太元李太元李卓昕李成辉李金凤李成辉郭影成赵冠宇金宁一; 关键词：遗传进化分析

气肿疽梭菌CctA基因的真核表达被引量：1: 2018年; 为了控制延边地区气肿疽病的发病率,制备出有效的核酸疫苗,根据NCBI上气肿疽梭菌细胞毒素A(CctA)的基因序列设计出一对特异性引物。将PCR扩增的CctA基因克隆到pMD19-Tsimple载体,对测序正确的基因进行序列分析,再次克隆至pcDNA3.1-1真核表达载体,并且将其转染Vero细胞。结果表明,pcDNA3.1-CctA组通过转染后的细胞存在绿色荧光的现象,同时pcDNA3.1-CctA重组质粒表达的产物大小约19ku,说明Vero细胞中的pcDNA3.1-CctA质粒成功表达了CctA蛋白。; 陈竞齐强罗永仁张皓李成辉任春宇车达姜永越于建华金鑫; 关键词：气肿疽梭菌真核表达

气肿疽梭菌NanA基因克隆及生物信息学分析被引量：1: 2020年; 为了对气肿疽梭菌NanA基因进行克隆及生物信息学分析,试验根据GenBank中已发表的气肿疽梭菌NanA基因序列设计并合成1对特异性引物,以气肿疽梭菌总DNA为模板,扩增出NanA目的基因并克隆至pMD18-T载体中,对测序正确的NanA基因进行序列对比分析,对NanA蛋白进行理化性质分析与二级结构预测,同时使用在线软件预测NanA蛋白三级结构。结果表明:成功扩增出气肿疽梭菌Nan A基因,与参考序列相比,共存在3处核苷酸突变,核苷酸序列和氨基酸序列与NCBI公布的JF4135 NanA基因序列的同源性均为99.8%。NanA蛋白分子质量约为71 ku,具有较高的抗原指数,二级结构以β-折叠和无规则卷曲为主,有多个抗原表位区域。; 于成东罗永仁姜永越马玉腾张皓陈竞李成辉方程金鑫; 关键词：气肿疽梭菌基因扩增克隆

PRRSV YN-LQ株的全基因序列测定及遗传进化分析被引量：2: 2018年; 从云南省某发病猪场分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），将该毒株命名为YN—LQ株。为了研究该毒株的遗传变异及分子生物学特征，根据PRRSV标准毒株NCBI登录号KC422728设计10对引物，对YNI。Q株全基因进行扩增及测序，将测序结果依次拼接获得YN—LQ株的全基因序列，并进行序列的比对分析。结果显示：PRRsVYN—LQ株基因组全长为15320bp；将YN—LQ株与经典PRRSV病毒株Nsp2、GP5及全基因进行比对分析，发现YN—LQ株与JXAl的同源性最高。Nsp2基因序列同源性为99．0％，其氨基酸序列有15个位点发生了改变；GP5基因序列同源性为97．7％，其氨基酸序列有9个位点发生了改变；全基因的同源性为98．7％。证实该毒株为JXA1变异株，为深入研究该病毒株的遗传与变异及其与生物学特性的关系奠定了基础。; 张涵解长占张世亨李卓昕李成辉李成辉马彬尧赵冠宇鲁会军金宁一李太元; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传进化分析

表达高致病性PRRSV GP3和GP5基因的核酸疫苗构建及小鼠免疫效果评价被引量：1: 2018年; 目的构建针对美洲型蓝耳病病毒的重组核酸疫苗,评价其与5种佐剂联合免疫BALB/C小鼠的效果。方法构建含有美洲型蓝耳病病毒GP3基因和GP5基因以及CpG-佐剂序列的重组核酸疫苗pVAX-N35HP,分别加入A1佐剂、A2佐剂、A3佐剂、A4佐剂和A8佐剂,免疫BALB/C小鼠,通过中和性抗体、T淋巴细胞亚群及细胞因子检测分析免疫效果。结果成功构建重组核酸质粒pVAX-N35-HP。用重组核酸质粒转染BHK-21细胞,Western blot显示重组核酸质粒稳定表达目的蛋白。中和性抗体结果显示,重组核酸疫苗免疫后35d,pVAX-N35HP+A1组和pVAXN35HP+A2组抗体滴度为1∶12;pVAX-N35HP+A3组抗体滴度为1∶16。pVAX-N35HP组细胞因子IL-4含量为阴性对照组的1.39倍,CD4+T淋巴细胞亚群百分率为阴性对照组的2.35倍(P<0.01)。重组核酸质粒分别与5种佐剂联合免疫小鼠,pVAX-N35HP+A1组CD8+T淋巴细胞亚群百分率为pVAX-N35HP组的1.93倍;pVAX-N35HP+A3组免疫细胞因子IL-4为pVAX-N35HP组的1.41倍(P<0.05),IFN-γ为pVAX-N35HP组的3.79倍(P<0.01);pVAX-N35HP+A2、pVAX-N35HP+A4和pVAX-N35HP+A8组IFN-γ水平升高,CD8+T淋巴细胞数量增多。结论成功构建重组核酸疫苗pVAX-N35HP。该疫苗具有良好的免疫原性,其中A1、A3免疫佐剂的加入可增强小鼠细胞免疫和体液免疫水平。; 赵冠宇解长占李卓昕张赫孙文超马彬尧张克龙李成辉李成辉张英金宁一; 关键词：佐剂

猪逆转录病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：2: 2022年; 目的开发一种能够准确、灵敏、特异检测猪逆转录病毒(PERV)的荧光定量PCR方法。方法根据GenBank数据库中PERV Gag基因的高度保守序列,设计1对特异性引物,建立用于检测PERV的SYBR GreenⅠqPCR检测方法,并验证其灵敏性、重复性和特异性。结果建立的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数R^(2)=0.998。该方法检测PERV下限为2.04×10^(2)copies/μl,批内批间变异程度较低,变异系数小于2%,且与PCV2、PRRSV、PEDV、TGEV和SVA等均无交叉反应。利用该qPCR方法对采集的49份猪组织样品进行检测,阳性率为81.63%,高于普通PCR阳性检出率的73.47%。结论建立的快速、定量检测PERV的SYBR Green I qPCR方法敏感、特异,具有一定的应用前景。; 曾嘉庆高岩仇相书李成辉李成辉张赫鲁会军金宁一; 关键词：GAG基因

猪细小病毒7型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及临床样品的检测被引量：2: 2019年; 采用PCR方法扩增猪细小病毒7型(PPV7)衣壳蛋白基因保守区域493 bp,将其克隆到pMD18-T载体,构建重组质粒作为标准阳性质粒,以其为模板建立用于检测PPV7的SYBR GreenⅠ实时PCR检测方法,并验证其灵敏性、特异性和重复性。结果表明,本试验建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法在2.85×10^1~2.85×10^8拷贝/μL呈良好的线性关系,相关系数为0.995,斜率为4.158,灵敏度可达到2.85×10^1拷贝/μL。该方法对于猪繁殖障碍性传染病常见病原如PRRSV、PCV2和PRV未出现特异性扩增,表明特异性好。所有标准曲线在溶解温度为83.103℃时出现单一的特异峰。使用本方法检测了2017年山东地区7家养猪场216份临床样品,总阳性率为12.5%。; 赵冠宇解长占孙文超张赫那少龙李卓昕张涵张涵哈卓李成辉韩继成南福龙庄忻雨张英金宁一; 关键词：实时荧光定量PCR 衣壳蛋白基因

2018年云南省思茅地区猪场蚊PCV2检测及ORF2基因遗传进化分析被引量：1: 2019年; 目的了解云南省思茅地区猪场蚊携带猪圆环病毒2型(PCV2)情况及蚊源PCV2的遗传进化特征。方法采集云南省思茅地区3个猪场周围蚊标本94份并检测PCV2携带情况,PCR扩增ORF2基因,对得到的ORF2基因进行同源性、系统进化树分析和抗原位点比对分析。结果PCR检测蚊PCV2阳性率为15.96%(15/94),得到的14个ORF2序列之间的核苷酸同源性为89.5%~99.9%,对应氨基酸同源性为86.2%~99.6%;与NCBI GenBank收录的22个参考ORF2序列的核苷酸同源性为79.9%~99.9%,对应的氨基酸同源性为79.5%~99.6%。系统进化树分析PCV2a亚型1个,PCV2b亚型5个,PCV2d亚型8个。抗原位点比对分析显示,PCV2Cap蛋白氨基酸变异位点主要位于50-70aa,131-140aa,200-220aa 3个区段。结论云南省猪场蚊PCV2携带率较高,主要毒株为PCV2b和PCV2d亚型,且以PCV2d亚型较多,与我国当前猪感染PCV病毒型群体内流行情况相符。; 李金凤哈卓哈卓李成辉李卓昕张涵张涵鲁会军张英金宁一; 关键词：猪圆环病毒2型 ORF2基因同源性分析遗传进化分析

延边株气肿疽梭菌鞭毛蛋白FliA基因克隆及生物信息学分析被引量：4: 2017年; 根据气肿疽鞭毛基因(GenBank登录号:AB058932)的参考序列,PCR扩增并克隆延边株气肿疽梭菌鞭毛蛋白FliA基因。成功克隆后测序,并采用生物信息学方法对鞭毛蛋白FliA基因的蛋白质二级结构、结构功能域、三级结构及抗原表位等重要参数进行了预测和分析。结果表明:与AB058932序列相比,存在38处突变,核苷酸序列的同源性和氨基酸序列的同源性均为97%;FliA蛋白的理论等电点为6.99,不存在跨膜区和信号肽序列,二级结构以α-螺旋和β-折叠为主,主要有15个潜在B细胞抗原表位区,17个限制性CTL抗原表位区。本试验为延边株气肿疽FliA蛋白功能的深入研究奠定了基础。; 张永佳张皓李成辉金鑫; 关键词：气肿疽梭菌克隆生物信息学分析

一例犬胫骨骨折的诊断及髓内针联合外固定支架的治疗被引量：3: 2018年; 骨折是骨组织的整体性、连续性由于外力和病理性因素破坏,使软组织受到不同程度的伤害,如神经血管、肌肉断裂挫伤、皮肤破裂等,但一般以血肿为主。骨折的固定有两种方法,第一种是外固定,第二种是内固定。内固定治疗骨折所需要的手术器材有髓内针、骨螺钉、金属丝和接骨板等,外固定需要硬化绷带、夹板绷带、改良托马斯绷带等,在正常情况下都应使用内固定对骨折进行开放复位治疗。; 陈竞张皓李成辉于建华金鑫; 关键词：骨折胫骨骨组织

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

李成辉

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

李成辉

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈