孙俊超
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
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- 猪带绦虫重组质粒pMG36e-TSOL18和pMG36e-SP-TSOL18在乳球菌中的表达被引量：2
- 2018年
- 目的观察猪带绦虫重组质粒pMG36e-TSOL18和pMG36e-SP-TSOL18在乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)中的表达情况。方法将胞内型表达载体pMG36e-TSOL18和分泌型表达载体pMG36e-SP-TSOL18电穿孔转化至L.lactis MG1363,PCR鉴定阳性克隆,经热诱导后采用SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。结果 PCR鉴定重组质粒pMG36e-TSOL18和pMG36e-SP-TSOL18成功转入L.lactis MG1363。SDS-PAGE检测重组质粒pMG36eTSOL18转化菌仅在胞内表达相对分子质量(Mr)约为15×103的TSOL18目的蛋白,pMG36e-SP--TSOL18转化菌胞内和胞外均表达相应的TSOL18目的蛋白,其相对分子质量(Mr)为15×10~3,与预期相符;Western blot分析重组pMG36e-TSOL18/L.lactis胞内表达的TSOL18重组蛋白以及pMG36e-SP-TSOL18/L.lactis胞内和胞外表达的TSOL18重组蛋白均能被相应兔抗血清识别。结论猪带绦虫重组质粒pMG36e-TSOL18转化L.lactis MG1363后仅在胞内表达TSOL18蛋白,pMG36e-SP-TSOL18转化L.lactis MG1363后胞内胞外均有TSOL18蛋白表达,但产量较低,表达的重组蛋白均具有免疫反应性。
- 李想孙俊超周必英
- 关键词：猪带绦虫TSOL18重组蛋白乳球菌
- 基因工程重组乳酸菌研究进展被引量：4
- 2017年
- 乳酸菌是人和动物肠道内常见的益生菌,具有提供营养、改善胃肠道功能、提高免疫力、抗菌等作用,随着基因工程技术的发展,选择乳酸菌作为载体传递系统,在细菌、病毒、肿瘤、寄生虫等领域构建了一系列重组乳酸菌。本文就基因工程重组乳酸菌的制备及防治效果作一综述。
- 孙俊超周必英
- 关键词：乳酸菌基因工程
- 猪带绦虫重组乳酸乳球菌分泌型表达系统的构建和鉴定方法
- 本发明公开了猪带绦虫重组乳酸乳球菌分泌型表达系统的构建和鉴定方法，包含基因合成和引物设计、重组质粒pMG36e‑SP‑TSOL18的构建及鉴定、猪带绦虫重组pMG36e‑SP‑TSOL18/L.lactis的构建及鉴定和...
- 周必英孙俊超李想罗波江楠
- 文献传递
- 猪带绦虫重组乳酸乳球菌胞内型表达系统的构建和鉴定方法
- 本发明公开了猪带绦虫重组乳酸乳球菌胞内型表达系统的构建和鉴定方法，包含TSOL18基因合成和引物设计、重组质粒pMG36e‑TSOL18的构建及鉴定、猪带绦虫重组pMG36e‑TSOL18/L.lactis的构建及鉴定和...
- 周必英孙俊超李想罗波江楠
- 文献传递
- 猪带绦虫TSOL18基因重组乳球菌疫苗的稳定性分析
- 2018年
- 目的研究猪带绦虫TSOL18基因重组乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)疫苗的人工传代稳定性。方法将重组质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18电转入L.lactis,经PCR鉴定阳性菌株pMG36e-TSOL18/L.lactis、pMG36e-SP-TSOL18/L.lactis,在无红霉素抗性和含红霉素抗性条件下,连续人工传代20次,通过测定质粒遗传稳定率和双酶切鉴定,分析质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中的稳定性情况。结果质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中连续传代20代后,在无红霉素抗性条件下,质粒稳定率均为100%,在含红霉素抗性条件下,质粒稳定率均为99%。将各代次的质粒采用限制性内切酶SacI/HindIII进行双酶切鉴定,琼脂糖凝胶电泳显示大小正确,连续传至20代时,与原代质粒相符。结论提示质粒pMG36e-TSOL18、pMG36e-SP-TSOL18在L.lactis中连续传代20代时,均有较好的遗传稳定性,为猪带绦虫TSOL18基因重组乳球菌疫苗的进一步研究奠定了基础。
- 周必英孙俊超
- 关键词：猪带绦虫
- 双歧杆菌介导的寄生虫基因工程疫苗研究进展
- 2017年
- 寄生虫病是危害人和动物的重要传染病之一，疫苗是防治该病传播、流行较为经济有效的手段。双歧杆菌是人和动物肠道内的一种重要益生菌，近年来，随着基因工程技术的发展，选择双歧杆菌作为载体传递系统，在细菌、病毒、肿瘤及寄生虫等领域构建了一系列重组双歧杆菌。作者就双歧杆菌介导的几种寄生虫基因工程疫苗的制备及免疫效果作一综述。
- 孙俊超周必英
- 关键词：寄生虫双歧杆菌基因工程疫苗
- 猪带绦虫TSOL18重组乳球菌分泌型和非分泌型疫苗构建及鉴定被引量：3
- 2018年
- 目的构建猪带绦虫重组非分泌型pMG36e-TSOL18／L．lactis和分泌型pMG36e-SP-TSOL18／L．1actis疫苗。方法以GenBank中登录的猪带绦虫TSOL18基因序列为模板，以乳酸菌为宿主系统进行基因优化，采用基于PCR的精确合成（PAS）方法，设计引物，在其两端分别加入酶切位点Sac I/HindⅢ以及保护性碱基，在其N端添加SPUSP45分泌信号肽序列，分别合成TSOL18和SP-TSOL18目的基因。将目的基因克隆至大肠埃希菌-乳球菌穿梭表达质粒pMG36e，构建胞内型表达载体pMG36e-TSOL18和分泌型表达载体pMG36e-SP-TSOL18．进行测序和酶切鉴定；采用电穿孔转化法将两种重组质粒转化至乳酸乳球菌（Llactis）MG1363，构建猪带绦虫重组pMG36e-TSOL1／L．lactis和pMG36e-SP-TSOL18／L．lactis疫苗，并进行PCR鉴定。结果经SacI和HindⅢ双酶切．获得了相应的TSOL18基因片段和pMG36e载体片段，与预期结果相符；与TSOL18基因标准序列作比对，匹配度均为100％，均插入到pMG36e载体的SacI和HindⅢ中。重组pMG36e-TSOL18／L．lactis和pMG36e-SP-TSOL18／L．lactis的PCR结果均可见393bp的基因片段产物。结论成功构建了猪带绦虫重组pMG36e-TSOL18／L.lactis和pMG36e-SP-TSOL18／L．lactis疫苗。
- 孙俊超李想周必英
- 关键词：猪带绦虫
- 猪带绦虫重组乳酸乳球菌表达系统的稳定性分析方法
- 本发明以GenBank中登陆的猪带绦虫<I>TSO</I>L18基因序列为模板，以乳酸乳球菌MG1363为宿主系统进行基因优化，合成目的基因<I>TSO</I>L18和SP‑<I>TSO</I>L18，构建表达载体和表达...
- 周必英孙俊超李想罗波江楠
- 文献传递
