目的通过构建针对p53凋亡抑制蛋白(inhibitory member of the apoptosistimulating protein of p53,i ASPP)的RNAi质粒,研究在体内外抑制i ASPP基因表达后对大肠癌细胞HT-29凋亡的影响。方法构建i ASPP的腺病毒RNAi质粒p Ad-i ASPP-RNAi,体外转染HT-29细胞,同时建立HT-29的裸鼠移植瘤模型;采用RT-PCR和Western blotting检测转染后瘤细胞i ASPP基因在mRNA和蛋白质水平的变化;采用流式细胞仪检测转染前后瘤细胞凋亡的变化。结果转染i ASPP RNAi后,与阴性对照组、空载病毒对照组相比,HT-29细胞的i ASPP mRNA及蛋白表达量均降低;i ASPP-RNAi组HT-29细胞的凋亡率、坏死率与阴性对照组及空白病毒对照组相比显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。裸鼠移植瘤细胞在病毒转染后,细胞体积增大,核染色质浓集,出现凋亡;移植瘤细胞的凋亡率、坏死率与阴性对照组、空载病毒对照组相比显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论在体内外抑制i ASPP基因的表达能够促进大肠癌细胞HT-29的凋亡,i ASPP有可能成为大肠癌分子免疫治疗的靶标。
