张琪
- 作品数：12 被引量：43H指数：4
- 供职机构：南京军区疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 贝氏柯克斯体可视化等温扩增法建立被引量：1
- 2017年
- 目的建立针对贝氏柯克斯体的快速可视化环介导等温扩增(LAMP)方法。方法体外合成贝氏柯克斯体的IS1111a基因,构建重组质粒。利用在线引物设计软件设计3组LAMP引物,用实时浊度仪筛选出最佳引物,同时对羟基萘酚蓝浓度进行优化,建立可视化LAMP反应体系,并评价其敏感性和特异性。结果建立的可视化LAMP反应可准确检测出贝氏柯克斯体的重组质粒和新桥株,不与其他立克次体产生交叉反应,最低可检测到3.6×10~2拷贝/反应,较普通聚合酶链反应(PCR)法的灵敏度提高了一个数量级,等同于实时浊度法和实时荧光定量PCR方法的检测灵敏度。结论建立的可视化LAMP方法可敏感、特异地检测出贝氏柯克斯体感染,操作简单快捷,适用于基层卫生防疫和疫情现场的病原筛查。
- 张琪徐睿瑶胡梦佳李俊韩一芳吕恒秦瑶操敏张锦海王长军
- 关键词：贝氏柯克斯体环介导等温扩增可视化
- 安徽三界地区媒介恙螨感染东方体的分离、56KD截短蛋白基因克隆及表达
- 目的：了解安徽三界地区恙螨媒介种类,东方体的基因型别,并对其56kD蛋白部分片段进行克隆表达,为下一步研制诊断试剂提供诊断抗原.方法：将三界地区捕获的恙螨分类、制成研磨液,接种小白鼠分离病原体.PCR扩增恙螨分离株东方体...
- 操敏徐睿瑶马亚坤张琪韩一芳张锦海王长军
- 关键词：恙螨蛋白表达
- HCVF蛋白和APC基因甲基化与慢性HCV感染的相关研究被引量：1
- 2017年
- 目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)F蛋白与多发性腺瘤样息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)基因甲基化在慢性HCV感染中的关系。方法收集慢性HCV患者(chronic hepatitis patient,CHP)的血样,检测F抗体(F antibody,F-Ab)的阳性率并且分成两组(F-Ab(+)CHP组、F-Ab(-)CHP组),收集健康者的血样作为对照组;分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),分别用HCV Core/F蛋白刺激,72 h后,分别提取DNA,用二代测序检测APC基因的甲基化水平,分析各组APC基因甲基化程度的差异。结果APC基因甲基化程度在F-Ab(+)CHP组、F-Ab(-)CHP组及健康对照组三组间差异有统计学意义(F=185.185,P<0.001),F-Ab(+)CHP组APC基因甲基化程度高于F-Ab(-)CHP组,健康对照组最低(均有P<0.05);三组样本PBMC分别经Core/F蛋白体外刺激后,APC基因甲基化程度各组总体比较差异均有统计学意义(均有P<0.05),Core蛋白与F蛋白共刺激组细胞APC基因甲基化程度高于F蛋白刺激组,Core蛋白刺激组为最低。结论在慢性HCV感染患者中,HCV F蛋白的产生能够影响APC基因甲基化程度。
- 季晓伟肖雯裴家平石丽萍蒋龙凤王长军邓小昭张琪韩一芳张锦海朱丹燕徐孝东
- 关键词：甲基化肝炎病毒属
- 乙型肝炎病毒环介导等温扩增检测法的建立被引量：8
- 2016年
- 目的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是近年来发展起来的一种新型核酸扩增技术,文中旨在建立一种LAMP方法用于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的快速检测。方法利用在线引物设计软件,针对B型和C型HBV基因序列的相对保守区域,设计LAMP引物、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)引物和探针序列。采用羟基萘酚蓝作为显色剂,优化反应条件,分别建立HBV的可视化LAMP反应体系和q PCR反应体系。反应体系中酶量为1.5μL、反应温度为65℃为LAMP扩增的最佳条件。用2种方法同时检测临床样本(96例乙型肝炎患者、5例丙型肝炎患者、5例获得性免疫缺陷综合症患者及50例健康对照样本的血清核酸),以q PCR检测结果为金标准,评价可视化LAMP方法诊断HBV的敏感性和特异性。结果建立的LAMP方法和q PCR方法最低可检测到10 copies/μL。96例乙型肝炎患者中,q PCR法共55例扩增阳性,其中LAMP方法共42例阳性,敏感性为76.4%(42/55);对病毒滴度高于102copies/μL和低于102copies/μL样本的检测敏感性分别为96.8%(30/31)和50%(12/24)。LAMP方法可成功检出B型和C型HBV,且不会和其他经血传播的病毒发生交叉反应,特异性为100%。结论建立的LAMP方法操作简便快捷、结果判读方便,能在1 h内敏感、特异地检测出血清中的HBV,为基层单位筛查HBV提供新的方法。
- 邵靓婧张琪徐睿瑶唐慧娴韩一芳张锦海王长军
- 关键词：环介导等温扩增乙型肝炎病毒特异性灵敏度
- 克里米亚-刚果出血热病毒可视化逆转录环介导等温扩增快速检测法的建立被引量：1
- 2016年
- 目的 建立克里米亚刚果出血热病毒（Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV）的可视化逆转录环介导等温扩增（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RTLAMP）快速检测法.方法 体外合成CCHFV的S基因,构建重组质粒,体外转录为模板RNA,在线设计3组LAMP引物,使用实时浊度仪筛选出最佳引物,以羟基萘酚蓝（Hydroxynaphthol blue,HNB）作为指示剂,建立可视化RT-LAMP反应体系.结果 实时浊度检测结果显示合成的3组LAMP引物中第1组引物的扩增效率最高,峰值出现于20 min.添加环引物后,扩增效率进一步提高,13 min即可达到峰值.利用最佳引物建立的CCHFV可视化RT-LAMP检测法最低检测限浓度为10拷贝/μl,检出时间为30 min,较巢式RT-PCR法和实时定量RT-PCR法分别高1-3个数量级.该方法稳定性好,不会与症状相近的病原体如肾综合征出血热汉坦病毒（汉滩型和汉城型）、马尔堡病毒、新型布尼亚病毒、埃博拉病毒（GP蛋白和VP蛋白）产生交叉反应.结论 建立的CCHFV可视化RT-LAMP检测法,灵敏度好、特异度高、快速廉价、操作简单,无需开盖即可直接观察结果,适用于条件有限的基层单位和偏远地区.但仍需临床样本进行进一步验证.
- 韩一芳钟璟皓张晨张琪吕恒胡丹张锦海王长军
- 关键词：克里米亚-刚果出血热
- 炭疽杆菌双重可视化LAMP检测方法的建立被引量：3
- 2016年
- 目的建立同时检测炭疽杆菌cap A基因、PA基因的双重环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,用于防范生物恐怖威胁。方法设计和合成分别针对炭疽杆菌cap A基因、PA基因的引物对,通过优化参数,建立可同时检测cap A基因、PA基因的双重LAMP方法,测试敏感性和特异性,并应用于模拟样本和实战检测。结果双重LAMP的检测cap A基因、PA基因的敏感性均可达到50模板拷贝每反应,并具有良好的特异性,在重大保障活动中得到检验。结论双重LAMP方法具有可以同时筛查、简单快速、灵敏度高等优点,在炭疽杆菌检测方面有良好应用前景。
- 刘玉陈文琦王平操敏韩一芳张琪张锦海王长军
- 关键词：炭疽杆菌环介导等温扩增
- CRISPR/Cas9技术用于清除乙型肝炎病毒的研究进展被引量：6
- 2017年
- 乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染作为中国乃至全球的重大健康问题,使乙肝患者长期处于肝硬化及肝癌的巨大威胁中。乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(ccc DNA)是HBV在肝细胞内复制中必不可少的一环,是乙肝彻底治愈的关键。然而,目前针对乙肝的治疗药物尚无法彻底清除肝细胞内的ccc DNA,且服药周期长、副作用大。利用新兴的基因编辑技术CRISPR/Cas9,人工设计靶向HBV系统可高效清除潜藏在胞内的ccc DNA,为乙肝的彻底治愈带来希望。文章就CRISPR/Cas9技术用于清除HBV的研究进行综述。
- 唐慧娴王长军张琪
- 关键词：乙肝病毒共价闭合环状DNA
- 寨卡病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立与应用被引量：5
- 2017年
- 本研究建立了一种简单、快速、准确的寨卡病毒可视化逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。在线设计3套LAMP引物,利用实时浊度仪筛选最佳引物,加入羟基萘酚蓝,评估可视化RT-LAMP检测方法的灵敏度和特异性。建立的可视化RT-LAMP方法可检测的最低浓度为101copies/μL,高于普通PCR和荧光定量PCR 1~2个数量级;同时,该方法不与其他虫媒病毒产生交叉反应。该方法可为虫媒监测和临床诊断提供实验依据。
- 艾乐乐丁晨曦龚秀芳朱长强张琪韩一芳谭伟龙王长军
- HCVF蛋白和负性共刺激分子2B4与慢性HCV感染的关联研究
- 2018年
- 目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)F蛋白的产生与负性共刺激分子2B4在慢性HCV感染中的关联性。方法收集慢性HCV患者(chronic hepatitis patient,CHP)的血液样本,检测F抗体(F antibody,F-Ab)的阳性率并依据结果分成(HCV-F(+)组、HCV-F(-)组)两组,收集健康者的血液样本作为对照组;分离并培养外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),收集各孔细胞,酶联免疫吸附试验检测2B4抗体阻断前后白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)、干扰素γ(interferonγ,IFN-γ)的表达水平。结果 2B4抗体阻断前,HCV患者PBMCs中IFN-γ和IL-4分泌水平均较健康组高(均有P<0.05),且HCV-F(-)组分泌IFN-γ水平高于HCV-F(+)组(F=1.908,P=0.020),而IL-4分泌水平低于HCV-F(+)组(F=1.342,P=0.009)。2B4抗体阻断后,健康组中IFN-γ和IL-4水平较阻断前均无统计学意义(均有P>0.05),CHP IFN-γ分泌水平较阻断前升高(F=1.214,P=0.003),且HCV-F(-)组升高程度高于HCV-F(+)组(F=1.434,P=0.009);而IL-4分泌水平较阻断前明显降低(F=1.505,P=0.015),且HCV-F(-)组降低程度低于HCV-F(+)组(F=1.444,P=0.032)。结论在慢性HCV感染中,F蛋白的信号调控机制与负性共刺激分子2B4具有相关性。
- 石丽萍李森森肖雯裴家平季晓伟蒋龙凤王长军邓小昭张琪韩一芳张锦海
- 关键词：丙型肝炎病毒F蛋白丙型肝炎病毒感染
- 某部2007-2016年病毒性肝炎发病情况分析被引量：1
- 2018年
- 目的统计分析某部2007-2016年10年间病毒性肝炎的发病情况,为进一步做好军队病毒性肝炎预防控制工作提供依据。方法数据来源于中国人民解放军突发公共卫生事件和传染病疫情报告信息系统,使用Excel、SPSS 18.0软件对数据进行统计分析。结果 2007-2016年该部共报告病毒性肝炎病例452例,其中甲型肝炎占6.64%、乙型肝炎占41.37%、丙型肝炎占13.94%、戊型肝炎占5.53%、未分型肝炎占32.52%;总体发病情况呈逐年下降趋势;发病月份主要集中在3月及9月;男性多于女性,发病人群主要集中在35岁以下的年轻人,占报告发病总数的77.21%;战士、干部为主要发病人群。结论病毒性肝炎仍是危害部队官兵健康的重要传染病之一,尤其是乙型肝炎,应重视肝炎疫苗免疫接种的落实,加强疫情监控。
- 史富全韩一芳张锦海叶福强张琪王长军
- 关键词：病毒性肝炎发病情况
