华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室
- 作品数：282 被引量：1,052H指数：17
- 相关作者：江云波胡睿铭李婷婷梁婉李文洁更多>>
- 相关机构：山西农业大学动物科技学院河南科技大学动物科技学院河南科技学院动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 蛋白修饰的金簇、金银簇及银簇对PK-15细胞的生物效应研究
- 金属纳米团簇是近年来发展起来的新型荧光探针,在离子检测、细胞成像、活体诊断等方面具有潜在的应用前景[1]。本论文参考文献[2, 3]合成了以牛血清白蛋白修饰的金簇、金银簇及银簇,研究了三种纳米荧光团簇对PK15细胞的生物...
- 白艳丽杜婷冯晨晨韩鹤友梁建功肖少波
- 关键词：PK15细胞生物效应
- 文献传递
- 利用单抗免疫组化技术检测猪肺炎支原体
- 以制备的猪肺炎支原体p36蛋白单抗为一抗，建立了检测肺脏组织中猪肺炎支原体的免疫组化方法，检测临床样品，免疫组化方法能直观反映出该病原在组织中的分布。
- 马丰英刘晓丽何启盖
- 关键词：猪肺炎支原体技术方法病原分布
- 2018年伪狂犬病病毒的流行特征及其遗传变异分析被引量：19
- 2020年
- 为了了解当前伪狂犬病病毒(PRV)在我国猪群中的流行现状及其遗传变异情况,本研究利用PCR的方法对2018年1-12月来源于我国28个省、市、自治区的1 328份疑似猪伪狂犬病发病猪的组织样品开展了PRV-gE的检测及病毒的分离鉴定,同时针对所分离的病毒的gB、gC和gE基因进行PCR扩增和DNA测序,并展开遗传变异分析。结果显示,共有92份样品为PRV-gE基因检测阳性,阳性检出率为6.93%。从92份PRV-gE阳性样品分离到13株PRV。分别基于gB基因部分片段、gC和gE基因进行遗传变异分析发现13株PRV与我国2012年以后流行的毒株(如HeN1等变异株)亲缘关系较近,而与2012年以前所分离的毒株(如Ea等经典毒株)的亲缘关系较远;此外,绝大多数中国分离株与国外分离毒株(如NIA-3、Bartha、Kaplan等)在遗传进化树中位于不同的进化分支;相对于国外分离株及国内早期流行的经典毒株而言,13株PRV分离株的gB、gC和gE蛋白中均存在许多特征性的氨基酸位点变异。本研究对于了解我国PRV流行现状及当前流行的PRV毒株的生物学特征具有十分重要的意义。
- 孙颖王雪莹梁婉谢思思彭忠陈宏建华琳宋文博汤细彪陈焕春吴斌
- 关键词：伪狂犬病病毒PCR检测病毒分离遗传变异分析
- 支气管败血波氏杆菌PRN黏附素R1区蛋白的免疫原性被引量：2
- 2009年
- 百日咳杆菌黏附素(PRN)是支气管败血波氏杆菌最重要的保护性抗原。为研究PRN的R1区多肽的免疫原性,分别将prn基因的全长编码区2 040 bp及5′端1 173 bp的片段(prnR1)克隆到原核表达载体pGEX-KG,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达。SDS-PAGE和Western blot检测证实2种表达产物GST-R1和GST-PRN均具有良好的免疫学反应活性。在主动免疫保护试验中,GST-R1和GST-PRN免疫组小鼠均能产生较高的PRN抗体水平;当使用3 LD50的Bb强毒株HH0809进行鼻腔攻毒后,其保护率均为100%(9/9);当使用10 LD50HH0809攻毒时,其保护率分别为33.3%(3/9)和77.8%(7/9)。在被动免疫保护试验中,腹腔免疫GST-R1和GST-PRN兔抗血清均能100%(10/10)保护小鼠抵抗10 LD50HH0809的腹腔攻击,但经PRN吸附后的2种兔抗血清均失去了保护力(0/5)。这些研究结果表明,重组PRN的N端R1区多肽具有良好的免疫原性。
- 吴庭才赵战勤王臣张春杰吴斌程相朝何启盖
- 关键词：支气管败血波氏杆菌免疫原性
- H1N1亚型猪流感病毒的拯救被引量：11
- 2008年
- 利用8质粒拯救系统成功拯救出了猪流感病毒毒株A/Swine/TianJin/01/2004(H1N1)(A/S/TJ/04)。将猪流感病毒8个基因节段经RT-PCR合成cDNA后,分别克隆到RNA聚合酶I/II双向表达载体PHW2000中,构建成8个重组质粒。用8个重组质粒共转染COS-1细胞,30h后加入TPCK-胰酶至终浓度0.5μg/mL。共转染48小时后收获COS-1细胞及其上清,经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚。收获死亡鸡胚尿囊液并继续用SPF鸡胚传3代,得到有感染性的病毒。经血凝、血凝抑制验、测序分析、电镜观察等均证实了A/S/TJ/04猪流感病毒的成功拯救。这是目前国内首次报道拯救出H1N1亚型猪流感病毒,为进一步研究猪流感病毒基因组结构与功能的关系、流感跨种传播的机制以及构建新型猪流感疫苗株奠定了基础。
- 彭亚平周红波李春金梅林
- 关键词：猪流感病毒拯救共转染
- 猪链球菌2型表面精氨酸肽酶的鉴定与其功能的研究
- 引言猪链球菌2型（SS2）是一种主要的人畜共患病原菌,可导致猪和人感染脑膜炎、关节炎、败血症等多种疾病,造成全球养猪业巨大经济损失[1]。近年在我国爆发的两次大规模人畜感染事件,引起全球对该病原菌的高度关注和研究[2]。...
- 黄开松袁增智李敬涛张强许仲旻刘亮张安定金梅林
- 猪源艰难梭菌的分离鉴定与生物学特性分析被引量：2
- 2022年
- 为了了解我国猪源艰难梭菌(Clostridioides difficile,CD)的病原学及分子生物学特征,本研究收集湖北和广东地区疑似患有肠炎的病猪粪便样品,提取基因组DNA,利用已经报道的5重PCR方法对艰难梭菌的16S rDNA基因、毒素A的编码基因tcdA、毒素B的编码基因tcdB以及二元毒素编码基因cdtA和cdtB进行检测,同时采用厌氧培养法,对PCR检测毒素编码基因为阳性的粪便样品进行艰难梭菌的分离培养,并对所分离到的菌株进行药物敏感性测试和全基因组重测序。结果发现:本研究所采集到的97份粪便样品经PCR检测显示有80份样品为16S rDNA阳性,其中仅有2份样品为tcdA和tcdB阳性。从这两份样品中分离出一株tcdA和tcdB阳性的艰难梭菌,命名为HuB01。药敏试验发现,HuB01对头孢菌素(FOX)、氯霉素(CHL)、克林霉素(CLI)、氨苄西林(AMP)、头孢曲松钠(CRO)耐药,对莫西沙星(MXF)和万古霉素(VAN)表现出中度耐药,而对利福西明(RFX)、甲硝哒唑(MTZ)、非达霉素(FDX)敏感。全基因组重测序发现HuB01的全基因组大小为3.93 Mb,平均GC含量为28.31%,编码3691个蛋白基因及63个tRNA和10个rRNA;3691个基因中含有31个耐药基因和164个毒力相关基因。多序列位点分型(MLST)结果显示HuB01为ST11。由于目前国内对于艰难梭菌的研究大多集中在人医领域,因此本研究可为兽医领域艰难梭菌的相关研究奠定基础。
- 张悦艾伟诚王斐梁婉谢思思华琳李春辉彭忠吴斌
- 关键词：艰难梭菌PCR检测药敏试验
- 猪支原体肺炎亚单位疫苗的免疫应答被引量：3
- 2012年
- 利用分子克隆、定点突变以及重组表达技术获得猪肺炎支原体的主要免疫原蛋白p36、p46、p65和p97R1-Nrdf。设立以重组蛋白p36、p46和p65为试验Ⅰ组,以p36、p46、p65和p97R1-Nrdf为试验Ⅱ组,猪支原体疫苗安百克(M+PAC)为试验Ⅲ组,PBS+佐剂为空白对照组来免疫BALB/c小鼠。检测小鼠血清、肺脏以及经蛋白刺激脾淋巴细胞的猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4。结果显示,Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体水平极显著高于Ⅰ、Ⅲ组(P<0.01);Ⅱ组IFN-γ水平极显著高于Ⅲ组,而Ⅱ组与Ⅰ组、Ⅰ组与Ⅲ组的IFN-γ水平无显著差异(P<0.05);但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的IL-4水平差异不显著(P<0.05),但都极显著高于对照组(P<0.01);肺的检测结果中猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4水平呈现一致性,都为Ⅱ组>Ⅰ组>Ⅲ组>对照组;而经刺激脾淋巴细胞检测结果为Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体和IFN-γ水平最高,而IL-4水平为Ⅲ组最高。由此可见,Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫途径,产生的猪支原体肺炎抗体水平最高;Ⅰ组亦能通过这2种免疫途径达到与Ⅲ组同样的免疫效果。
- 马丰英姚睿玉邹浩勇刘新军何启盖
- 关键词：猪支原体肺炎亚单位疫苗免疫效果IFN-ΓIL-4
- 苏云金杆菌晶体蛋白不同给药途径对小鼠体内日本血吸虫的作用被引量：1
- 2002年
- 将小鼠人工感染日本血吸虫尾蚴 40条 /只 ,30 d后将苏云金杆菌伴胞晶体蛋白以不同的给药方式 (静脉注射、肌肉注射、灌胃、腹腔注射 )给药 ,用药后 15 d剖检查虫。结果发现 ,各种给药方式对小鼠体内的日本血吸虫成虫均有一定的效果 ,但以静脉注射效果最好 ,肌肉注射次之 ,灌胃和腹腔注射效果较差。这表明苏云金杆菌制剂作用于小鼠体内的日本血吸虫时 ,静脉注射是最佳给药途径。
- 周艳琴姚宝安夏雪山赵俊龙孙明俞子牛
- 关键词：苏云金杆菌晶体蛋白日本血吸虫小鼠微生物杀虫剂
- 犬细小病毒的分离鉴定与生物学特性分析被引量：11
- 2011年
- 本研究旨在获得华中地区的犬细小病毒分离株并对其基因型分型、生物学特性及致病力进行探讨。从武汉部分宠物医院采集胶体金初检阳性的14份可疑病料,用猫肾细胞(F81)进行病毒分离。根据犬细小病毒2型(CPV-2)保守的VP2,先后设计2对引物,进行PCR扩增。在细胞上对其进行空斑纯化,进行一步法生长曲线测定,并进行电镜观察。最后对这5株病毒都进行动物回归试验。细胞传代结果表明得到5株细小病毒。PCR扩增结果表明获得390和583bp 2个片段。将2个片段测序的结果与GenBank发布的CPV-2比对,表明所获得的5株病毒中,有4株属于2a型,1株属于2b型。空斑纯化及生长曲线绘制结果表明分离毒株增殖滴度可达105.5 PFU.mL-1。电镜观察结果表明,感染细胞的线粒体肿胀。动物试验结果表明犬都能表现不同程度的发病状况,大体解剖发现肠管有坏死、心肌变薄。将病变的心脏制作切片观察,结果表明心肌细胞变性、坏死。本研究结果为进一步研究CPV-2的分子生物学和分子致病机理奠定了基础。
- 周云朵康真玉陈月平史小娜陈建国赵雅心刘正飞
- 关键词：犬细小病毒电镜动物回归试验
