万敏
- 作品数：43 被引量：103H指数：6
- 供职机构：吉林大学白求恩医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 重组小鼠IFN-β原核表达载体的构建及包涵体溶解条件的筛选被引量：4
- 2013年
- 目的:通过重组小鼠干扰素β(IFN-β)原核表达载体的构建及对包涵体溶解条件的筛选,建立IFN-β原核表达模型,为筛选适合的包涵体溶解条件提供实验依据。方法:小鼠新鲜肝组织中提取DNA,传统方法构建小鼠IFN-β原核表达载体并命名为IFN-β′。SDS-PAGE检测以传统方法、pH环境、溶解液成分、干菌与溶解液比例、溶解温度和溶解时间的改变对包涵体溶解效果的影响。结果:IFN-β′成熟蛋白鉴定结果与预测结果吻合,诱导表达正常。改变pH值、在溶解液中加入DTT对包涵体溶解效果无影响,包涵体经洗涤液洗涤后亦不能被溶解液所溶解,温度对包涵体溶解几乎无影响,溶解液的比例由1g菌∶5mL溶解液增加为1g菌∶20mL溶解液时能溶解部分IFN-β′蛋白包涵体。结论:成功构建重组小鼠IFN-β原核表达载体,其蛋白以包涵体形式存在,且不易被溶解,在筛选的包涵体溶解条件中仅溶解液比例为影响包涵体蛋白溶解条件。
- 苏雅拉图张永胜陈宇杰胡小平王丽颖万敏吴柒柱
- 关键词：干扰素Β原核表达包涵体
- 卡介苗热休克蛋白70对肿瘤细胞裂解物免疫原性的影响
- 2011年
- 目的:观察卡介苗热休克蛋白70(BCGHSP70)对肿瘤细胞裂解物(TCL)免疫原性的影响,为TCL相关肿瘤疫苗的制备提供依据。方法:应用冻融法制备B16黑色素瘤细胞裂解物B16TCL,将BCGHSP70与B16TCL在体外混合制备BCGHSP70-B16TCL。将C57BL/6小鼠随机分为BCGHSP70-B16TCL组、PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组,分别于第1和14天皮下免疫BCGHSP70-B16TCL、PBS、BCGHSP70和B16TCL。于末次免疫后第7天处死小鼠,MTT法观察不同免疫组小鼠脾淋巴细胞在B16TCL体外刺激后的增殖情况,计算刺激指数(SI)。结果:应用冻融法能够使B16细胞完全裂解,所制备的B16TCL中含有丰富的蛋白成分。与PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组比较,BCGHSP70-B16TCL组免疫小鼠脾脏明显增大;BCGHSP70-B16TCL免疫组SI高于PBS免疫组(P=0.00)、B16TCL免疫组(P=0.01)和BCGHSP70免疫组(P=0.00)。结论:BCGHSP70能够增强B16TCL的免疫原性,提示BCGHSP70可能作为有效的免疫佐剂用于TCL相关肿瘤疫苗的研究。
- 李贺王华吴秀丽卫红飞孙陆果张永胜于永利王丽颖万敏
- 关键词：卡介苗热休克蛋白质类免疫原性免疫佐剂
- 重组人乳头瘤病毒CTL表位疫苗的构建与表达被引量：4
- 2007年
- 目的:构建人乳头瘤病毒的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位疫苗并在大肠杆菌中表达。方法:应用多轮PCR的方法合成CTL表位基因序列,将其亚克隆入pET28a表达载体中,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白质,用Western blotting对重组蛋白进行鉴定。结果:采用计算机表位预测的方法选取HPV6、11、16型的CTL表位,通过5轮PCR人工合成人乳头瘤病毒CTL表位疫苗的基因片段HPVepi,用亚克隆的方法构建了重组表达质粒pET28a-Tat-HPVepi,并在大肠杆菌高效表达了该重组蛋白质,经Western blotting鉴定显示出特异性条带。结论:结合计算机表位预测和PCR的方法构建并在大肠杆菌中高效表达了一种人乳头瘤病毒CTL表位疫苗。
- 王艳姝田亚萍万敏于永利王丽颖
- 关键词：病毒疫苗穿膜肽
- 临床医学专业硕士研究生分子生物学教学改革研究被引量：1
- 2017年
- 分子生物学理论和技术推动着整个生命科学领域的发展。为了提高硕士研究生分子生物学的教学效果,为分子生物学培养素质型人才提供有益的参考,文章通过研究新入学硕士研究生对分子生物学理论知识掌握程度,从教学内容的改革,理论知识与临床应用相结合的教学模式,理论与科研实例相结合的教学模式,教师引导下自主学习的教学方法,实验课考核方式的改革五个方面探讨了分子生物学教学改革。
- 房明丽王丽颖王华杨光万敏孙巍
- 关键词：分子生物学硕士研究生教学改革
- 新型CpG ODN与氢氧化铝联用作为乙肝疫苗佐剂能刺激IgG2a类抗体的产生
- 目的：寻找能增强乙肝疫苗刺激IgG2a类抗体产生、使机体处于Th1样免疫环境的新型乙肝疫苗佐剂.<br> 方法：选用自行设计的A、B、C型CpG ODN,与商品化重组乙肝疫苗(含Al(OH)3佐剂)混合后于...
- 丛中一包木胜万敏王莉李大鹏王丽颖于永利
- 关键词：乙型肝炎疫苗佐剂免疫应答反应动物模型
- 重组卡介苗热休克蛋白70的纯化及内毒素去除的效果评价被引量：6
- 2010年
- 目的:表达、纯化重组卡介苗热休克蛋白70(BCGHSP70)并去除其中的内毒素。方法:采用10L发酵罐经IPTG诱导表达含有重组表达质粒pET28a/HSP70的BL21(DE3)工程菌(pET28a/HSP70/BL21),SDS-PAGE检测BCGHSP70的表达。超声破碎菌体,裂菌后上清依次经过NiSepharose4B亲和层析、TritonX-114洗涤、SuperdexG-25凝胶过滤层析、Q-SepharoseFF离子交换层析进行纯化。SDS-PAGE鉴定纯化蛋白,Lowry法检测蛋白浓度,37℃水浴孵育0～4h检测纯化蛋白的稳定性,鲎试剂法检测内毒素含量。结果:工程菌pET28a/HSP70/BL21在发酵表达3h后获得96g湿菌,其中相对分子质量约为70000的蛋白约占菌体总蛋白量的29.6%;表达产物纯化后在相对分子质量约70000处可见特异性条带,该分子质量蛋白约占总蛋白量的96.5%;纯化后蛋白浓度约1.2g.L-1;37℃水浴中放置4h后相对分子质量为70000的蛋白约占总蛋白量的95.1%;纯化产物内毒素含量<0.01EU.μg-1。结论:成功表达、纯化了重组BCGHSP70,并有效地去除了其中的内毒素。
- 李贺张培因卫红飞曹昭王影王华胡小平万敏王丽颖于永利
- 关键词：热休克蛋白70纯化TRITON内毒素类
- 用MTT比色法建立B型CpGODN活性检测标准被引量：2
- 2008年
- 目的:B型CpG ODN,BW006作为疫苗佐剂已进入临床试验阶段,所以需要建立稳定、安全、简便易行的活性检测方法以控制不同批次BW006的生产质量。方法:根据BW006具有刺激人PBMC和小鼠脾细胞增生的特点,选择无放射性污染的MTT比色法作为首选检测方案。用BW006刺激BALB/c小鼠脾细胞作为筛选平台,确定如下反应条件:脾细胞用量、培养板形状、BW006浓度、培养液体积和培养时间以及如何优化MTT检测过程以提高反应灵敏度。结果:用3 mg/LBW006与96孔平底板中含100 mL/LFBS的200μL无酚红RPMI1640培养的6×105个小鼠脾细胞在37℃含50 mL/L CO2孵箱中共孵育36 h。随后每孔弃100μL上清,加入MTT(5 g/L)10μL,37℃避光孵育4 h使各孔充分形成甲瓒颗粒。每孔加入DMSO 150μL,经平板振荡器振荡20 min至颗粒完全溶解,在酶标仪上检测A578值即可。结论:建立了无污染、造价低、可操作性强的BW006活性检测方法。
- 王学菊刘璟万敏王莉吴秀丽卫红飞于永利王丽颖
- 关键词：活性
- 接种卡介苗对热休克蛋白65-MUC1抗原肽融合蛋白抑瘤作用的影响被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨接种卡介苗对热休克蛋白65-MUC1抗原肽融合蛋白(HSP65-MUC1)所激发的抑瘤作用的影响。方法:给经卡介苗免疫后产生HSP65抗体的小鼠注射HSP65-MUC1融合蛋白3次,然后给小鼠接种MUC1阳性的B16肿瘤细胞,观察HSP65-MUC1融合蛋白对MUC1阳性的B16肿瘤细胞在已产生HSP65抗体的小鼠体内生长的抑制作用。结果:HSP65-MUC1能够显著抑制MUC1阳性的B16肿瘤细胞在已产生HSP65抗体小鼠体内的生长,HSP65-MUC1组小鼠的肿瘤重量和体积显著地低于PBS组。结论:接种卡介苗并不影响HSP65-MUC1所激发的对MUC1阳性B16肿瘤细胞生长的抑制作用。
- 任淑萍万敏卫红飞王莉于永利王丽颖
- 关键词：卡介苗融合蛋白免疫复合物
- 两种尿素浓度测定方法的比较被引量：4
- 2010年
- 曹昭万敏孙陆果胡小平于永利王丽颖张培因
- 关键词：血清尿素肾小球滤过功能流动注射分析法
- 抗BCG Hsp65单克隆抗体的鉴定及应用研究
- 2008年
- 目的:对制备的5株抗BCG Hsp65单克隆抗体(Hsp65 mAb)做进一步鉴定和应用。方法:采用ELISA方法对mAb的效价、亚类和结合抗原表位特性进行鉴定,应用mAb对Hsp65融合蛋白进行了Western blot和免疫荧光检测。结果:5株mAb的类型均为IgG,其中ⅠC1和ⅡC3株mAb为IgG1亚类,ⅠA5、ⅠC3和ⅠD6株mAb为IgG2a亚类。抗原表位竞争结合分析显示,在配对的不同亚类mAb中,存在着结合Hsp65表面不同抗原表位的mAb。通过Western blot检测证实,Hsp65 mAb对Hsp65-MUC1检测结果,与MUC1 mAb的一致。细胞免疫荧光检测显示,制备的mAb能够识别通过蛋白装载进入树突状细胞内的Hsp65-PSA。结论:获得的Hsp65 mAb可做为检测工具,用于研究BCG Hsp65及其融合蛋白的功能和表达。
- 尹晓光吴秀丽万敏张培因王艳媚王丽颖于永利
- 关键词：BCG热休克蛋白单克隆抗体
