冯春燕
- 作品数：100 被引量：157H指数：8
- 供职机构：中国检验检疫科学研究院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家质检总局科技计划项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析被引量：7
- 2014年
- 目的制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-SBV-N,分别用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)树脂和直链淀粉树脂纯化两种蛋白;用纯化的His-SBVN免疫BALB/c小鼠制备mAb,以MBP-SBV-N为包被抗原间接ELISA筛选分泌mAb的杂交瘤细胞和测定mAb效价,利用蛋白G琼脂糖凝胶从腹水中纯化mAb;应用Western blot和间接免疫荧光分析mAb的反应性和特异性。结果筛选并纯化出1株抗SBV的mAb(命名为1F2),效价为1∶32 000,重链亚型为IgG2α,轻链为κ;1F2既能与重组SBV N蛋白发生反应,又能识别SBV,但与布尼亚病毒科内亲缘关系较近的沙门达病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反应,而与裂谷热病毒N蛋白无交叉反应。结论成功制备了抗SBV核衣壳蛋白的mAb,为SBV的血清学检测提供了工具。
- 张永宁吴绍强Kerstin WERNIKE吕继洲冯春燕林祥梅
- 关键词：施马伦贝格病毒核衣壳蛋白原核表达单克隆抗体
- 鉴别非洲猪瘟感染与免疫的荧光PCR检测试剂盒
- 本发明提供一种鉴别诊断非洲猪瘟病毒感染与免疫的荧光定量PCR检测试剂、检测试剂盒及检测方法，属于生物技术领域。本发明针对非洲猪瘟CD2v和荧光蛋白eGFP设计了特异的引物、探针。通过与P72基因联合组成ASFVP72/C...
- 冯春燕王彩霞林祥梅吴绍强
- 文献传递
- 含非洲猪瘟病毒核酸序列病毒样颗粒的研制及其在检测方法中的应用被引量：2
- 2017年
- 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的烈性传染病,为了保证其检测结果的准确性和可靠性,需要研制试剂盒中使用的阳性标准质控品。本试验旨在研制含ASFV核酸序列的病毒样颗粒,并探究其在检测方法中的应用。首先扩增p72基因的全长片段,利用昆虫杆状病毒系统,包装出含有p72基因的ASF DNA病毒样颗粒。为了进一步验证该病毒样颗粒在应用中的可靠性,本研究将病毒样颗粒与ASF的组织毒及细胞毒同时进行DNA核酸提取,进行实时荧光定量PCR。结果表明,本研究制备的病毒样粒子能很好的取代ASFV在实时荧光定量PCR检测方法中作为阳性质控品,且能对核酸提取过程进行质控,实时荧光定量PCR检测试剂盒中,病毒样粒子的最低包装浓度为102 TCID50。进一步研究发现该病毒样颗粒也适用于普通PCR及LAMP检测方法中,最低浓度分别为103和101 TCID50。本试验结果将为规范ASF检测方法,促进ASF检测方法的转化应用及保证检测结果的准确度和可靠性提供科学依据。
- 冯春燕杜方原刘丹丹Pershin Andrey王彩霞张永宁吴绍强林祥梅
- 关键词：非洲猪瘟病毒样颗粒
- 用于鉴定日本血蜱的靶序列、引物、鉴定方法及试剂盒
- 本发明提供了用于鉴定日本血蜱的靶序列、引物、鉴定方法及试剂盒，属于蜱虫检测与鉴定技术领域。所述靶序列如SEQ ID NO.1所示，是首次扩增出的日本血蜱COI全长序列的一段。本发明提供了可特异性扩增日本血蜱COI部分序列...
- 吕继洲林祥梅吴绍强张永宁韩雪清冯春燕邓俊花
- 文献传递
- 一种基于非洲猪瘟病毒p30基因的竞争性单克隆抗体、试剂盒及其应用
- 本发明公开了特异性结合非洲猪瘟病毒p30蛋白的抗原结合蛋白、抗体或活性片段，包括所述抗原结合蛋白、抗体或活性片段的非洲猪瘟病毒竞争ELISA检测试剂盒及其制备方法和应用。本发明的ELISA检测试剂盒生产方便，效果稳定，无...
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- 文献传递
- 一种能与阳性血清竞争结合非洲猪瘟病毒B646L抗原的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了能特异性与阳性血清竞争结合非洲猪瘟病毒B646L抗原的抗原结合蛋白、抗体或活性片段，包括所述抗原结合蛋白、抗体或活性片段的非洲猪瘟病毒竞争ELISA检测试剂盒及其制备方法和应用。本发明的非洲猪瘟病毒竞争ELI...
- 冯春燕王彩霞吴绍强林祥梅王勤刘晓飞
- 文献传递
- 施马伦贝格病焦磷酸测序检测方法的建立被引量：5
- 2014年
- 为适应口岸施马伦贝格病快速、准确、高通量检测需求,建立一种基于RT-PCR及焦磷酸测序技术平台的施马伦贝格病检测方法。本研究针对施马伦贝格病毒基因组RNA的S、M和L三个基因节段保守区域利用焦磷酸测序软件PyroMark Q96ID分别设计RT-PCR扩增引物及焦磷酸测序引物,以人工合成的SBV重组质粒为模板分别建立了SBV S、M、L基因的PCR-焦磷酸测序检测方法,比较三基因的PCR扩增结果以及测序分析结果,结合特异性检测结果,最终确定以M基因作为靶基因建立的焦磷酸测序检测方法效果最好,并以德国FLI提供的SBV(BH80株)RNA对所建立的方法进行验证,通过对测得序列的比对分析可确定为施马伦贝格病毒,这表明本研究所建立的方法灵敏度高、稳定性好、特异性强,可以用于施马伦贝格病毒基因序列水平上的精准检测鉴定。
- 王彩霞林祥梅张永宁吕继洲冯春燕袁向芬邓俊花吴绍强
- 关键词：施马伦贝格病毒聚合酶链反应焦磷酸测序
- 非洲猪瘟病毒主要抗原p54-1的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：20
- 2018年
- 为进一步深入研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54蛋白的主要抗原表位及抗原性质,本试验根据GenBank中p54基因序列(登录号:NC_001659.2)设计表达区域特异性引物,PCR扩增后连接表达载体pGEX6p-1构建pGEX6p-1-p54-1原核表达质粒;将该质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,切除GST标签后采用阴离子柱纯化目的蛋白并鉴定;将纯化蛋白与佐剂混合乳化后作为免疫原,免疫小鼠制备p54-1蛋白多克隆抗体;采用ELISA和Western blotting检测抗体的效价和反应特性。结果显示,重组p54-1融合蛋白以可溶形式表达,切除标签后的纯化蛋白能够与ASFV阳性血清发生反应,而与PRRSV和PCV3不发生反应。利用该蛋白免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶128 000。Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体能够识别ASFV p54蛋白。表明本研究成功获得了较高纯度的p54-1蛋白,制备的p54-1多克隆抗体具有较高反应性和特异性,为后续非洲猪瘟双抗夹心ELISA检测方法的建立提供依据。
- 王彩霞冯春燕杜方原刘丹丹张永宁林祥梅吴绍强
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 非洲猪瘟病毒p54抗原C端的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2019年
- 利用大肠埃希菌表达非洲猪瘟病毒核心抗原p54蛋白C末端55个氨基酸的肽段(命名为p54-2),制备了多克隆抗体并进行了纯化,以进一步用于非洲猪瘟ELISA试剂盒的研发。将PCR扩增获得的p54-2目的片段与表达载体pGEX6p-1质粒均经过限制性内切BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,构建pGEX6p-1-ASFV-P54-2原核表达质粒。将该质粒转化到大肠埃希菌BL21中,诱导蛋白大量表达,并纯化获得高纯度的蛋白。将纯化的p54-2蛋白免疫小鼠,获得p54-2多克隆抗体并进一步纯化多抗。用ELISA、Westernblot对纯化的多克隆抗体进行效价滴定及特异性鉴定。结果显示,成功构建了pGEX6p-1-ASFV-P54-2重组质粒,在大肠埃希菌中IPTG诱导下,能够高效表达重组p54-2蛋白。用p54-2蛋白免疫Balb/c小鼠获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶128000,说明该蛋白有很好的免疫原性。Westernblot结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别非洲猪瘟病毒p54胞内区,具有较高反应性和特异性,可以用于ELISA检测方法研究和p54抗原表位的鉴定。
- 冯春燕王彩霞杜方原张永宁刘丹丹林祥梅吴绍强
- 关键词：非洲猪瘟病毒多克隆抗体酶联免疫吸附试验
- 一种环介导等温扩增反应管
- 本实用新型属于反应装置技术领域，公开了一种环介导等温扩增反应管，该反应管包括紧密配合的管体和管盖，其中，所述管盖的下底面设置有用于放置试剂的腔体，且所述管盖的下底面正对所述腔体处设置有用于刺破所述腔体的尖锐体。本实用新型...
- 王彩霞吴绍强林祥梅冯春燕
- 文献传递
