吴绍强
- 作品数：449 被引量：1,160H指数：17
- 供职机构：中国检验检疫科学研究院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家质检总局科技计划项目国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 流行性造血器官坏死病毒焦磷酸测序方法研究
- 2019年
- 为建立流行性造血器官坏死病毒的焦磷酸测序检测方法,本研究针对流行性造血器官坏死病毒ORF65基因的保守区域进行分析,设计扩增引物及测序引物,经PCR扩增后对PCR产物进行焦磷酸测序,通过对反应条件和反应体系的优化,成功建立了该检测方法。试验结果显示,该方法扩增基因片段长度为137 bp,焦磷酸测序长度为38 bp,能够特异性检测出流行性造血器官坏死病毒,最低核酸检测限为0.5 pg/μL,与常规PCR检测方法的符合率达100%。本研究建立的流行性造血器官坏死病毒焦磷酸测序检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为流行性造血器官坏死病毒的快速检测提供了一种可行方法。
- 王娜张旻张舟景宏丽任彤张利峰吴绍强
- 关键词：焦磷酸测序PCR
- 一种检测施马伦贝格病毒的单克隆抗体、试纸条及制备方法
- 本发明公开了一种检测施马伦贝格病毒的单克隆抗体、试纸条及制备方法，属于病毒检测领域。所述单克隆抗体包括单克隆抗体4D6和单克隆抗体5D3，所述单克隆抗体4D6包括氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的重链和SEQ ID...
- 陈冬杰孔玉方王晶晶许晓琳魏方吕继洲吴绍强
- 施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析被引量：7
- 2014年
- 目的制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-SBV-N,分别用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)树脂和直链淀粉树脂纯化两种蛋白;用纯化的His-SBVN免疫BALB/c小鼠制备mAb,以MBP-SBV-N为包被抗原间接ELISA筛选分泌mAb的杂交瘤细胞和测定mAb效价,利用蛋白G琼脂糖凝胶从腹水中纯化mAb;应用Western blot和间接免疫荧光分析mAb的反应性和特异性。结果筛选并纯化出1株抗SBV的mAb(命名为1F2),效价为1∶32 000,重链亚型为IgG2α,轻链为κ;1F2既能与重组SBV N蛋白发生反应,又能识别SBV,但与布尼亚病毒科内亲缘关系较近的沙门达病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反应,而与裂谷热病毒N蛋白无交叉反应。结论成功制备了抗SBV核衣壳蛋白的mAb,为SBV的血清学检测提供了工具。
- 张永宁吴绍强Kerstin WERNIKE吕继洲冯春燕林祥梅
- 关键词：施马伦贝格病毒核衣壳蛋白原核表达单克隆抗体
- 金鸡散对种鸡生产性能的影响
- 2001年
- 取 37周龄父母代AA种鸡 880只 (母鸡 80 0只 ,公鸡 80只 )随机分成 4组 ,研究中草药制剂金鸡散对种鸡生产性能的影响。在用药前及用药后 1— 4周 ,统计各组产蛋率、蛋重、蛋形指数及受精率、孵化率和健雏率。结果 :采用金鸡散按高 (2 0 g/kg)、中 (10 g/kg)、低 (5g/kg) 3个剂量拌料 ,连用 5d ,对蛋重、蛋形指数均无不良影响 ,同时可显著提高种鸡产蛋性能及蛋孵化性能 ,在 3个剂量组中 ,以中剂量组应用效果最为明显 ,同对照组相比可提高产蛋率 6 .2个百分点 ,孵化率及健雏率亦显著提高 (P <0 .0 5 )。
- 蔡玉梅吴绍强陈学斌
- 关键词：种鸡产蛋性能孵化性能饲料添加剂
- 鉴别非洲猪瘟感染与免疫的荧光PCR检测试剂盒
- 本发明提供一种鉴别诊断非洲猪瘟病毒感染与免疫的荧光定量PCR检测试剂、检测试剂盒及检测方法，属于生物技术领域。本发明针对非洲猪瘟CD2v和荧光蛋白eGFP设计了特异的引物、探针。通过与P72基因联合组成ASFVP72/C...
- 冯春燕王彩霞林祥梅吴绍强
- 文献传递
- 用于检测蛔虫卵的实时荧光PCR引物和探针
- 本发明提供了用于检测蛔虫卵的实时荧光PCR引物和探针以及使用其进行检测的方法。蛔虫卵为泡菜等植物源性产品中最容易污染的寄生虫卵，由于数量较少，而且受泡菜汁液的浸泡，因而难以直接借助显微镜进行形态学鉴定。通过设计蛔虫超科寄...
- 吴绍强林祥梅陈洪俊韩雪清葛建军朱水芳梅琳刘建贾广乐孙晓智石鑫
- 文献传递
- 含非洲猪瘟病毒核酸序列病毒样颗粒的研制及其在检测方法中的应用被引量：2
- 2017年
- 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的烈性传染病,为了保证其检测结果的准确性和可靠性,需要研制试剂盒中使用的阳性标准质控品。本试验旨在研制含ASFV核酸序列的病毒样颗粒,并探究其在检测方法中的应用。首先扩增p72基因的全长片段,利用昆虫杆状病毒系统,包装出含有p72基因的ASF DNA病毒样颗粒。为了进一步验证该病毒样颗粒在应用中的可靠性,本研究将病毒样颗粒与ASF的组织毒及细胞毒同时进行DNA核酸提取,进行实时荧光定量PCR。结果表明,本研究制备的病毒样粒子能很好的取代ASFV在实时荧光定量PCR检测方法中作为阳性质控品,且能对核酸提取过程进行质控,实时荧光定量PCR检测试剂盒中,病毒样粒子的最低包装浓度为102 TCID50。进一步研究发现该病毒样颗粒也适用于普通PCR及LAMP检测方法中,最低浓度分别为103和101 TCID50。本试验结果将为规范ASF检测方法,促进ASF检测方法的转化应用及保证检测结果的准确度和可靠性提供科学依据。
- 冯春燕杜方原刘丹丹Pershin Andrey王彩霞张永宁吴绍强林祥梅
- 关键词：非洲猪瘟病毒样颗粒
- A型塞内卡病毒的微滴数字RT‑PCR检测引物和探针及其应用
- 本发明属于分子检测技术领域，具体公开了一种A型塞内卡病毒的微滴数字RT‑PCR检测引物和探针及其应用。所述引物为：上游引物：5’‑CACTACTCGAGAAGCTGCAAT‑3’，下游引物：5’‑TCCATCTTGCCT...
- 张舟张永宁吴绍强林祥梅
- 文献传递
- 亚欧型及南非型口蹄疫一步法多重荧光RT-PCR检测方法建立被引量：7
- 2010年
- 【目的】口蹄疫是一种严重的"政治经济病",世界各国面临的口岸疫情防控形势均十分严峻。针对南非型(SATⅠ,SATⅡ,SATⅢ型)潜在入侵中国的严峻态势,为了防止疫情跨境传播,迫切需要建立有效甄别亚欧型(A、O、C及亚洲Ⅰ型)与南非型口蹄疫的检测方法,以进一步提高防控工作的准确性。【方法】选择口蹄疫病毒(FMDV)基因组保守的5'非翻译区(5'UTR)基因为靶序列,分别设计亚欧型及南非型FMDV特异的荧光PCR引物及Taqman探针,通过对反应体系和反应条件的优化,以插入扩增目的片段的阳性克隆质粒为模板,建立多重荧光PCR检测体系;进一步以体外转录cRNA作为阳性质控品,建立亚欧型及南非型FMDV一步法多重荧光RT-PCR鉴别方法,并进行敏感性、特异性确定及田间样本检测。【结果】本研究建立的FMDV多重荧光PCR检测方法,对亚欧型及南非型FMDV阳性质粒的扩增效率均在90%以上;以倍比稀释的体外转录cRNA作为模板,进行敏感性测试表明,本方法最低可检测至7.6×10-9ng南非型cRNA和6.3×10-8ng亚欧型cRNA;特异性试验结果显示本方法可以有效甄别亚欧型与南非型FMDV;田间样本检测结果与样品实际感染情况一致。【结论】本研究建立的FMDV一步法多重荧光RT-PCR检测方法敏感、特异而且快速,为亚欧型与南非型口蹄疫的鉴别诊断及流行病学调查提供了新的方法。
- 吴绍强查成刚邓俊花林祥梅刘建梅琳
- 关键词：口蹄疫病毒荧光RT-PCR
- 柔嫩艾美耳球虫BJ株核酸疫苗的构建及免疫保护效果研究
- 将E.tenella BJ株的保护性抗原基因TA4插入真核表达载体中,然后在其上游融合方式插入Et1A基因,构建成核酸疫苗并进行体外表达。IFAT检测表明,pCT转染细胞的荧光亮度高,pCTE载体大,转染效率低,荧光较弱...
- 吴绍强蒋金书刘群朱引洁
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫核酸疫苗体外表达
- 文献传递
