王彩霞
- 作品数：131 被引量：218H指数：9
- 供职机构：中国检验检疫科学研究院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家质检总局科技计划项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 鉴别非洲猪瘟感染与免疫的荧光PCR检测试剂盒
- 本发明提供一种鉴别诊断非洲猪瘟病毒感染与免疫的荧光定量PCR检测试剂、检测试剂盒及检测方法，属于生物技术领域。本发明针对非洲猪瘟CD2v和荧光蛋白eGFP设计了特异的引物、探针。通过与P72基因联合组成ASFVP72/C...
- 冯春燕王彩霞林祥梅吴绍强
- 文献传递
- 含非洲猪瘟病毒核酸序列病毒样颗粒的研制及其在检测方法中的应用被引量：2
- 2017年
- 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的烈性传染病,为了保证其检测结果的准确性和可靠性,需要研制试剂盒中使用的阳性标准质控品。本试验旨在研制含ASFV核酸序列的病毒样颗粒,并探究其在检测方法中的应用。首先扩增p72基因的全长片段,利用昆虫杆状病毒系统,包装出含有p72基因的ASF DNA病毒样颗粒。为了进一步验证该病毒样颗粒在应用中的可靠性,本研究将病毒样颗粒与ASF的组织毒及细胞毒同时进行DNA核酸提取,进行实时荧光定量PCR。结果表明,本研究制备的病毒样粒子能很好的取代ASFV在实时荧光定量PCR检测方法中作为阳性质控品,且能对核酸提取过程进行质控,实时荧光定量PCR检测试剂盒中,病毒样粒子的最低包装浓度为102 TCID50。进一步研究发现该病毒样颗粒也适用于普通PCR及LAMP检测方法中,最低浓度分别为103和101 TCID50。本试验结果将为规范ASF检测方法,促进ASF检测方法的转化应用及保证检测结果的准确度和可靠性提供科学依据。
- 冯春燕杜方原刘丹丹Pershin Andrey王彩霞张永宁吴绍强林祥梅
- 关键词：非洲猪瘟病毒样颗粒
- 小反刍兽疫病毒样颗粒的构建及定量分析被引量：1
- 2014年
- 为研制一种无生物传染性且极易保存稳定的小反刍兽疫病毒(PPRV)RNA阳性质控品,以pTrcHis-MS2质粒为模板,借助点突变技术在噬菌体MS2编码的外壳蛋白第15位与第16位氨基酸基因之间插入组氨酸蛋白标签的相应序列,构建了pTrcMS载体。将pGEM-T-N382质粒与pTrcMS质粒分别进行KpnⅠ+HindⅢ双酶切、连接从而构建了pTrcMS-PPRV重组质粒。将pTrcMS-PPRV重组菌进行原核表达,借助偶联组氨酸蛋白标签的磁珠捕获技术获得纯化的小反刍兽疫病毒样颗粒,对它进行特性鉴定并定量检测。结果显示,pTrcMS-PPRV病毒样物质纯度高;电镜下为不规则的、直径约为26nm的多边形;耐RNA酶A,稳定;经荧光RT-PCR定量检测,此病毒样物质的溶液浓度相当于108.56 PFU/mL。本研究将为小反刍兽疫病毒分子生物学的检测提供阳性质控物质。
- 邓俊花林祥梅张永宁王彩霞吴绍强
- 关键词：小反刍兽疫病毒样颗粒纯化
- 裂谷热病毒LUX荧光PCR检测方法的建立
- ＜正＞裂谷热（Rift valley fever,RVF）是由蚊子作为传染媒介的病毒性传染病,主要感染反刍动物如绵羊、山羊和牛,在疫病流行期间,偶然情况下也会引起人类发病。RVF是OIE规定的必报动物疫病,也是威胁我国人...
- 王彩霞吴绍强
- 文献传递
- 一种基于非洲猪瘟病毒p30基因的竞争性单克隆抗体、试剂盒及其应用
- 本发明公开了特异性结合非洲猪瘟病毒p30蛋白的抗原结合蛋白、抗体或活性片段，包括所述抗原结合蛋白、抗体或活性片段的非洲猪瘟病毒竞争ELISA检测试剂盒及其制备方法和应用。本发明的ELISA检测试剂盒生产方便，效果稳定，无...
- 冯春燕林祥梅王彩霞吴绍强于浩洋王勤刘晓飞仇松寅梅琳
- 文献传递
- 抗派琴虫膜蛋白的单克隆抗体、其制备方法及应用
- 本发明提供了一种抗派琴虫膜蛋白（MOE）的单克隆抗体，其由保藏号为CGMCC No.6180的抗派琴虫膜蛋白（MOE）的杂交瘤细胞株IAQ1101分泌产生。本发明还提供了所述单抗的制备方法及应用。本发明利用基因工程技术和...
- 王彩霞吴绍强林祥梅王娜景宏丽张永宁吕继洲邓俊花
- 文献传递
- 一种能与阳性血清竞争结合非洲猪瘟病毒B646L抗原的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了能特异性与阳性血清竞争结合非洲猪瘟病毒B646L抗原的抗原结合蛋白、抗体或活性片段，包括所述抗原结合蛋白、抗体或活性片段的非洲猪瘟病毒竞争ELISA检测试剂盒及其制备方法和应用。本发明的非洲猪瘟病毒竞争ELI...
- 冯春燕王彩霞吴绍强林祥梅王勤刘晓飞
- 文献传递
- 施马伦贝格病焦磷酸测序检测方法的建立被引量：6
- 2014年
- 为适应口岸施马伦贝格病快速、准确、高通量检测需求,建立一种基于RT-PCR及焦磷酸测序技术平台的施马伦贝格病检测方法。本研究针对施马伦贝格病毒基因组RNA的S、M和L三个基因节段保守区域利用焦磷酸测序软件PyroMark Q96ID分别设计RT-PCR扩增引物及焦磷酸测序引物,以人工合成的SBV重组质粒为模板分别建立了SBV S、M、L基因的PCR-焦磷酸测序检测方法,比较三基因的PCR扩增结果以及测序分析结果,结合特异性检测结果,最终确定以M基因作为靶基因建立的焦磷酸测序检测方法效果最好,并以德国FLI提供的SBV(BH80株)RNA对所建立的方法进行验证,通过对测得序列的比对分析可确定为施马伦贝格病毒,这表明本研究所建立的方法灵敏度高、稳定性好、特异性强,可以用于施马伦贝格病毒基因序列水平上的精准检测鉴定。
- 王彩霞林祥梅张永宁吕继洲冯春燕袁向芬邓俊花吴绍强
- 关键词：施马伦贝格病毒聚合酶链反应焦磷酸测序
- 含组氨酸蛋白标签的蓝舌病假病毒物质构建及定量分析被引量：1
- 2014年
- 基于蓝舌病(bluetongue,BT)的危害及RNA阳性质控品研制的重要性,试验将pTrcHis-MS2质粒借助点突变技术在噬菌体外壳蛋白15和16氨基酸之间插入组氨酸(His)蛋白标签,构建了pTrcMS载体。将pMD19-T-BTV质粒与pTrcMS质粒分别进行KpnⅠ和HindⅢ双酶切,然后连接构建pTrcMS-BTV重组质粒。将pTrcMS-BTV重组菌进行原核表达,产物借助偶联His蛋白标签的磁珠捕获技术获得纯化的蓝舌病假病毒颗粒,进行特性鉴定并定量。结果显示,研制的pTrcMSBTV物质经PCR方法评价纯度高,无基因DNA污染;透射电镜观察形态为不规则的直径约为26nm的多边形;RT-PCR方法检测稳定性表明该物质耐RNase A,易保存;应用荧光RT-PCR检测表明该物质溶液最低检测限可达到2.5×102拷贝/mL。蓝舌病假病毒物质将为蓝舌病分子生物学检测提供阳性质控物质。
- 邓俊花林祥梅张永宁王彩霞吴绍强
- 关键词：蓝舌病纯化
- 非洲猪瘟病毒主要抗原p54-1的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定被引量：20
- 2018年
- 为进一步深入研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p54蛋白的主要抗原表位及抗原性质,本试验根据GenBank中p54基因序列(登录号:NC_001659.2)设计表达区域特异性引物,PCR扩增后连接表达载体pGEX6p-1构建pGEX6p-1-p54-1原核表达质粒;将该质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,切除GST标签后采用阴离子柱纯化目的蛋白并鉴定;将纯化蛋白与佐剂混合乳化后作为免疫原,免疫小鼠制备p54-1蛋白多克隆抗体;采用ELISA和Western blotting检测抗体的效价和反应特性。结果显示,重组p54-1融合蛋白以可溶形式表达,切除标签后的纯化蛋白能够与ASFV阳性血清发生反应,而与PRRSV和PCV3不发生反应。利用该蛋白免疫获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶128 000。Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体能够识别ASFV p54蛋白。表明本研究成功获得了较高纯度的p54-1蛋白,制备的p54-1多克隆抗体具有较高反应性和特异性,为后续非洲猪瘟双抗夹心ELISA检测方法的建立提供依据。
- 王彩霞冯春燕杜方原刘丹丹张永宁林祥梅吴绍强
- 关键词：原核表达多克隆抗体
