张永宁
- 作品数：65 被引量：201H指数：8
- 供职机构：中国检验检疫科学研究院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家质检总局科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 非洲猪瘟病毒p54蛋白的表达及单抗制备被引量：7
- 2016年
- 为制备非洲猪瘟病毒p54蛋白的单克隆抗体,本研究扩增p54蛋白的胞外区编码基因,分别克隆到p ET30a和p GEX-6p-1中,构建了p54-p ET30a和p54-p GEX-6p-1重组质粒;将质粒分别转化到大肠杆菌BL21中,表达C末端带6个His、N端带有GST的p54重组蛋白;利用亲和层析的方法,富集和纯化带His标签的p54蛋白;以带His标签的p54蛋白为抗原,免疫BALB/C小鼠,制备单克隆抗体;以带有GST标签的p54蛋白为抗原,对制备的单抗进行特异性验证。结果显示:大肠杆菌能高效表达带His标签和GST标签的非洲猪瘟p54蛋白;His标签的p54蛋白免疫BALB/C小鼠后,得到了3株单克隆抗体;Western blot结果表明,3株单克隆抗体能与带有GST标签的p54蛋白相互反应。本研究成功制备了p54的单克隆抗体,为进一步开展非洲猪瘟ELISA、Western blot和细胞免疫荧光检测技术的开发研究奠定了基础。
- 冯春燕宋晓晖仇松寅王淑娟王彩霞张永宁邓俊花吴绍强林祥梅
- 关键词：非洲猪瘟病毒体外表达单克隆抗体
- 施马伦贝格病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立及应用
- 2015年
- 依据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因保守序列,设计了特异性引物和MGB荧光探针,建立了SBV实时荧光RT-PCR检测方法,构建标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性等试验评价,并对绵羊和牛全血样品进行了检测。结果表明,所建立的SBV检测方法模板浓度与Ct值呈现良好的线性关系,相关系数R2为0.998;特异性强,仅对SBV RNA出现特异性扩增曲线;灵敏度高,对SBV RNA的检测灵敏度为10copies;重复性好,重复检测灵敏度CV<3%;对临床样品的检测均为SBV阴性。所建立的SBV实时荧光RT-PCR方法可以为SBV的诊断和流行病学调查提供一种快速、特异、敏感的检测手段。
- 王建昌王金凤段永生张永宁李静
- 关键词：施马伦贝格病毒S基因
- 施马伦贝格病TaqMan荧光RT-PCR检测试剂盒的研制
- 引言施马伦贝格病(Schmallenberg disease)是一种引起牛羊等反刍动物感染的外来新发病毒性动物疫病,2011年首次在德国、荷兰等欧洲国家暴发。在风险评估基础上,2016年6月1日,国家质检总局与农业部联合...
- 邓俊花张永宁吴绍强林祥梅
- 文献传递
- 稳定表达非洲猪瘟病毒P54蛋白的细胞系及其制备与应用
- 本发明提供一种稳定表达非洲猪瘟病毒P54蛋白的Vero细胞系，其保藏号为CGMCC No.14316。该细胞系不仅能识别非洲猪瘟的多克隆抗体，而且还能与非洲猪瘟感染猪的阳性血清发生特异性反应。本发明的非洲猪瘟P54抗原的...
- 冯春燕杜方原王彩霞方志强张永宁吴绍强林祥梅
- 文献传递
- 猪圆环病毒3型研究进展被引量：45
- 2017年
- 2016年,美国堪萨斯州立大学科研人员利用宏基因组测序技术,从患有皮炎肾病综合征(PDNS)和繁殖障碍母猪及其流产胎儿体内首次鉴定出一种新型猪圆环病毒,命名为猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)。流行病学调查发现PCV3感染多见于具有PDNS和繁殖障碍症状猪群,目前已于美国多个州猪群内普遍流行。同时,美国旧金山血液系统研究所科研人员从3头不明病因导致的心脏和多器官炎症仔猪体内也检测出PCV3。随后,我国湖北、广东等多个省市猪群中也检测出PCV3。近来,波兰和韩国相继报道存在PCV3感染猪群。作为一种新发现病原体,PCV3对猪致病性及在猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)中作用以及现有商品化PCV2疫苗对其免疫效力等有待进一步研究。文章综述PCV3最新进展,以期为后续研究提供参考。
- 张永宁梅琳张舟唐丽杰吴绍强
- 关键词：猪皮炎肾病综合征繁殖障碍
- 一种提取动物组织样品中病原核酸的试剂
- 本发明提供了一种动物组织样品中病原核酸的提取试剂。该试剂pH为7-9，溶剂是水，溶质是如下终浓度的物质：4M-6M异硫氰酸胍，20mM-25mM柠檬酸钠，0.2％-0.5％质量百分比的十二烷基肌氨酸钠(SLS)。采用该试...
- 吴绍强林祥梅王彩霞邓俊花张丽张永宁
- 用于鉴定日本血蜱的靶序列、引物、鉴定方法及试剂盒
- 本发明提供了用于鉴定日本血蜱的靶序列、引物、鉴定方法及试剂盒，属于蜱虫检测与鉴定技术领域。所述靶序列如SEQ？ID？NO.1所示，是首次扩增出的日本血蜱COI全长序列的一段。本发明提供了可特异性扩增日本血蜱COI部分序列...
- 吕继洲林祥梅吴绍强张永宁韩雪清冯春燕邓俊花
- 文献传递
- 野生反刍动物心水病研究进展
- 2018年
- 心水病是由反刍动物埃立克体引起的一种急性、致死性的蜱传反刍动物传染病。该病不但可以使家养反刍动物发病,还可以使野生反刍动物发病,对野生动物及野生环境造成极大的危害和污染。论文从心水病的历史及地理分布、病原学、流行病学、临床症状、检测方法、发病机制、疫苗,进口野生动物传入心水病的风险分析及口岸防控措施等方面进行了综述,旨在为野生反刍动物心水病的检测与防控研究提供参考。
- 王彩霞冯春燕刘丹丹张永宁杜方原刘晓飞林祥梅吴绍强
- 关键词：心水病野生动物
- 检测施马伦贝格病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法被引量：1
- 2014年
- 根据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因节段设计一对引物和TaqMan探针,建立了检测SBV核酸的荧光定量RT-PCR方法。通过优化反应体系和反应条件,该方法对101~107半数组织培养感染量(TCID50)的SBV核酸呈现良好的线性关系。利用德国FLI制备和保存的SBV核酸阳性(n=140)、SBV核酸阴性(n=132)和辛波血清群相关病毒核酸样品(n=16),对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了验证。结果表明,所建立方法与FLI研制的SBV荧光定量RT-PCR具有相近的敏感性,两者对140份SBV核酸阳性样品的检测符合率达96.4%(135/140);可灵敏地检测出1TCID50的SBV RNA,并具有良好的重复性;除道格拉斯病毒(Douglas virus)外,与辛波血清群相关病毒核酸无交叉反应。用该方法对采自内蒙古呼和浩特市某养殖场的绵羊血清(n=47)和澳大利亚进口绵羊血清(n=47)的RNA进行了检测,结果未发现SBV核酸阳性样品。SBV荧光定量RTPCR检测方法的建立为应对施马伦贝格病提供了有效的检测手段。
- 张永宁吴绍强吕继洲冯春燕王彩霞邓俊花袁向芬林祥梅
- 关键词：施马伦贝格病毒核酸引物TAQMAN探针荧光定量RT-PCR
- A型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：14
- 2019年
- 本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。在非变性条件下,利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化重组SVA VP2蛋白,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用Protein A Sepharose CL-4B树脂从兔血清中亲和层析纯化多克隆抗体,并对其进行间接免疫荧光分析。结果显示,重组SVA VP2蛋白以可溶性和包涵体两种形式在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞内进行表达,分子质量约为47ku;制备的兔抗VP2蛋白多克隆抗体效价高达1∶64 000,该多克隆抗体仅识别SVA,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒等常见猪病原无交叉反应,表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性。重组SVA VP2蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。
- 张永宁张舟诸明欣梅琳王彩霞吴绍强林祥梅
- 关键词：衣壳蛋白原核表达多克隆抗体
