刘洪波
- 作品数：20 被引量：65H指数：5
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- 发文基金：中山市卫生局医学科研立项课题广东省中山市卫生局医学科研立项课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学航空宇航科学技术更多>>
- 表达鼠γ干扰素的重组卡介苗的构建和鉴定
- 目的构建分泌表达鼠IFN-γ(Mouse interferon-gamma,mIFN-γ)的重组卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)。方法PCR扩增BCG抗原85B的信号肽序列,插入到E.c...
- 刘洪波吴灿权谢颖梁洪蔡昌学
- 关键词：卡介苗干扰素-Γ穿梭载体基因重组
- 文献传递
- 中山地区健康成人外周血CD4^+T淋巴细胞参考区间的建立
- 2013年
- 目的建立中山地区常住人口CD4+T淋巴细胞计数生物参考区间。方法选取140例中山地区健康个体,分为15~19岁、20~29岁、30~39岁、40~49岁和50~59岁共5个年龄组。以Partec PAS流式细胞仪测定外周血CD4+T淋巴细胞绝对数。结果同性别各年龄层之间以及不同性别之间的CD4+T细胞数差异均无统计学意义(P>0.05);合并各组个体结果,数据呈正态分布,以(x±1.96s)确定95%的参考区间为(804.7±387.3)个/μL。结论成功建立本地区健康成人外周血CD4+T细胞计数的参考范围,为本地区艾滋病患者的临床分期诊断、抗病毒治疗效果提供参考依据。
- 高赛珍欧慧鲁婧婧李兆琦朱远锋罗小铭刘洪波
- 关键词：CD4+T淋巴细胞计数流式细胞术艾滋病
- 结核分枝杆菌ESAT-6基因在毕赤酵母中的构建及其表达被引量：3
- 2011年
- 目的在毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中表达结核分枝杆菌ESAT-6基因。方法以重组质粒pET23a-ESAT-6为模板,亚克隆目的片段ESAT-6至酵母菌分泌表达载体pPICZaA,重组质粒经线性化后电转化转染至毕赤酵母菌GS115菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子。经甲醇诱导表达,取细胞裂解上清进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法分析。结果成功构建了pPICZaA-ESAT-6毕赤酵母表达重组质粒。经甲醇诱导,在酵母细胞内表达分子质量单位为18kDa的蛋白。蛋白质印迹(Western blot)显示,18kDa蛋白被活动性肺结核病人血清抗体识别。结论在毕赤酵母菌中成功表达了带有信号肽ESAT-6基因,为进一步研究新型单位疫苗打下坚实的基础。
- 付小强刘洪波吴少庭
- 关键词：结核分枝杆菌ESAT-6毕赤酵母菌基因表达
- 抗SARS病毒重组BCG-M疫苗的构建及其免疫学研究
- 目的 寻求有效的抗SARS病毒的重组BCG疫苗并观察其诱导的免疫效应及评价其可能的病理损害。方法 以大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒构建表达SARS病毒膜蛋白(M蛋白)的重组BCG疫苗,转化BCG后免疫BALB/c小鼠...
- 甘燕李俊华刘洪波刘茂玲张仁利高世同黄达娜耿艺介吴少庭
- 关键词：SARS冠状病毒M蛋白BCG疫苗
- 文献传递
- 弓形虫GRA4和SAG2基因重组BCG疫苗免疫保护性的比较研究被引量：9
- 2007年
- 目的比较弓形虫致密颗粒蛋白4(GRA4)基因和表面抗原2(SAG2)基因的重组卡介苗(BCG)对小鼠的免疫保护效果。方法108只SPF级雌性BALB/c小鼠随机分成6组:PBS组、BCG空白菌组、BCG-空白载体组、BCG-SAG2组、BCG-GRA4组和BCG-SAG2+GRA4组,每组18只。每鼠分别注射对应液体/疫苗100μl,共2次,间隔2周。接种前尾静脉采血,接种后4、6、8周每组分别剖杀3只,取脾和眼眶血检测细胞因子、IgG与IgM抗体,T淋巴细胞亚群计数,淋巴细胞转化率等。末次免疫后3周,每组剩余小鼠分别腹腔接种RH株弓形虫速殖子50个进行攻击感染,观察各组小鼠存活时间。结果弓形虫SAG2和GRA4重组BCG疫苗均能诱导小鼠产生免疫应答。第4周时,BCG-GRA4+SAG2免疫组小鼠的CD3+CD4+/CD3+CD8+的比值最高,为14.06%±1.17%。第6周时,BCG-GRA4+SAG2免疫组小鼠的IgG抗体水平最高,为0.18±0.02。第8周时,BCG-SAG2免疫组小鼠的IgM抗体水平最高,为0.82±0.05;弓形虫速殖子攻击后,BCG-SAG2组平均存活8.61d,PBS对照组平均存活7.33d,3个免疫组小鼠比其他3组的平均存活时间长1d。结论弓形虫重组BCG疫苗具有一定的免疫保护性。
- 李俊华吴少庭翁亚彪甘燕刘洪波刘茂玲张仁利高世同黄达娜耿艺介
- 关键词：弓形虫重组疫苗
- 表达鼠干扰素γ的重组卡介苗的构建及鉴定
- 2011年
- 目的构建分泌表达鼠IFNγ(Mouse interferon-gamma,mIFN-γ)的重组卡介苗(Bacillus Calmette-Gu伢rin,BCG),并进行鉴定。方法 PCR扩增BCG抗原85B的信号肽序列,插入E.coli-BCG穿梭载体pBCG3000的启动子下游,构建分泌性重组穿梭质粒S-pBCG3000;以PHA刺激小鼠脾细胞产生的RNA为模板,RT-PCR扩增mIFNγ成熟肽的编码cDNA,插入S-pBCG3000质粒的信号肽序列下游,构建mIFNγ的表达质粒S-pBCG3000-γ;通过电穿孔技术将表达质粒转入BCG,以卡那霉素和PCR筛选重组BCG,ELISA法检测重组BCG培养滤液中的mIFNγ含量,细胞病变抑制法鉴定mIFNγ的生物活性。结果经测序、PCR扩增和酶切鉴定分析,Ag85B信号肽和mIFNγ成熟肽的编码序列均成功克隆并插入到pBCG3000的相应位点,表达质粒转化BCG后获得的重组BCG分泌mIFNγ的含量高达1 234.1 pg/ml,在L929细胞中的抗VSV活性为64 U/ml。结论所构建的重组BCG可分泌具有功能活性的mIFNγ,为进一步研究其免疫效应奠定了基础。
- 刘洪波吴灿权谢颖梁洪蔡昌学
- 关键词：卡介苗基因重组
- 两种病毒RNA提取试剂对甲型流感病毒的灭活效果研究
- 目的测试两种常用的病毒RNA提取试剂(硅胶柱法和改良异硫氰酸弧法)灭活甲型流感病毒的能力,以评估在低防护区操作甲型流感病毒核酸提取过程的可能性。方法根据试剂盒操作指导分别用两种提取试剂的裂解缓冲液Buffer AVL(德...
- 刘洪波吴衍恒朱远峰梁洪周日东
- 关键词：甲型流感病毒病毒灭活生物安全防护异硫氰酸胍
- 文献传递
- 弓形虫GRA4基因体外扩增、克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达被引量：11
- 2006年
- 目的体外扩增弓形虫RH株致密颗粒蛋白4(GRA4)基因,构建大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-GRA4,重组耻垢分枝杆菌,鉴定重组蛋白的抗原性。方法用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因,克隆入pGEM-T载体,然后亚克隆法构建ps3000-GRA4大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒,经电转化方法,将GRA4基因片断的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatismc2155)中,用重组耻垢分枝杆菌免疫小鼠,Western blot方法检测免疫小鼠血清中的弓形虫抗体。结果成功扩增了弓形虫的GRA4基因并构建克隆质粒pGEMT-GRA4、穿梭质粒ps3000-GRA4,Western blot分析显示,GRA4重组蛋白能被重组质粒免疫小鼠血清识别,分子质量单位约为40.0 ku。结论重组耻垢分枝杆菌在小鼠体内表达出了重组蛋白GRA4,具有抗原性,刺激小鼠机体产生了抗弓形虫的抗体,为弓形虫重组BCG(Bacillus Calmette-Guerin)疫苗的研究奠定了基础。
- 李俊华吴少庭翁亚彪甘燕刘洪波刘茂铃张仁利高世同黄达娜耿艺介
- 关键词：弓形虫耻垢分枝杆菌BCG
- Real-timePCR技术在呼吸道病毒检测中的应用与分析被引量：2
- 2013年
- 呼吸道感染疾病是危害人类健康的重大疾病，在感染性疾病的死亡原因里排首位。研究表明，急性呼吸道感染90％以上由病毒引起，引起呼吸道感染的病毒主要有流感病毒A型和B型（FluA、FtuB），腺病毒（ADV），博卡病毒（BOV），鼻病毒（hRV），呼吸道合胞病毒（RSV），
- 吴衍恒刘洪波师舞阳谢颖周日东梁洪
- 关键词：呼吸道感染疾病病毒检测PCR技术急性呼吸道感染呼吸道合胞病毒流感病毒A型
- C6/36细胞系分离登革1型病毒的方法学探讨被引量：2
- 2013年
- 目的应用C6/36细胞系3种细胞分离方法分离血清中登革1型病毒并探讨其分离效率。方法采用血清预稀释法,将已鉴定为登革I型病毒的阳性血清作10^-1-10^-10等10个10倍梯度稀释并接种于长满单层C6/36细胞的培养管;采用共培养法,将血清作50至6400等8个梯度倍比稀释,再加等体积C6/36细胞悬液作共培养;采用直接接种法,将25μl、50μl、100μl、150μl、200μl血清接种于长满单层C6/36细胞的培养管。连续7d,每天观察细胞生长情况,收获细胞分离液并提取核酸,然后采用Real-time PCR检测其CT值。结果血清标本呈登革I型病毒阳性,CT值为26.3;血清预稀释法与共培养法均未发现由血清毒性引发的非特异性细胞病变,除了10^-10稀释度呈弱阳性外,其余稀释度的CT值均在11-15之间。直接接种法中25μl、50μl接种量培养管未发现由血清毒性引起明显的非特异性细胞病变,检测其CT值约为19,100μl、150μl、200μl接种量的细胞第2d就因血清毒性完全被破坏。结论3种方法都能成功分离登革1型病毒,降低血清对细胞的干扰作用能提高分离效率。
- 吴衍恒谢颖刘洪波师舞阳
- 关键词：细胞系细胞分离血清REAL-TIMEPCR
