孙振亮
- 作品数：6 被引量：19H指数：2
- 供职机构：上海交通大学附属第六人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- miRNAs慢病毒文库筛选靶向EZH23'非翻译区的新型miRNAs及其在乳腺癌中的表达被引量：2
- 2014年
- 目的重组过表达EZH2基因3'非翻译区的MCF-7细胞株中筛选靶向miRNAs,并进行细胞和组织定量分析。方法重组细胞株感染慢病毒文库,利用细胞毒性药物筛选后抽提细胞基因组,以此为模板PCR扩增出miRNA前体,测序确定miRNAs名称,并对其进行PCR定量分析。结果在重组细胞株中共筛选出7种miRNAs,依次为miR-15b、miR-16-2、miR-181b2、miR-217、miR-224、miR-329-1、miR-487b,这些新型miRNAs用生物信息学软件PicTar和TargetScan无法预测。Real-time PCR发现,与乳腺癌细胞MCF-7相比,正常乳腺细胞株HBL-100中miR-217、miR-329-1、miR-487b高表达;乳腺癌组织中仅miR-15b及miR-16-2表达增加,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论在重组过表达EZH2 3'-UTR的乳腺癌MCF-7细胞株中结合慢病毒文库可筛选出用生物信息学软件未预测的新型靶向miRNAs,这些新型miRNA在正常乳腺细胞与肿瘤细胞及组织中存在差异表达。
- 刘萃萃王璐璐赵卫卫彭攸王玉平孙振亮冯景
- 关键词：乳腺癌EZH2EZH2
- 人乳腺癌上皮细胞miR-217对DNMT1调控作用的研究被引量：1
- 2013年
- 目的验证在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达,为后期动物实验和临床试验提供实验基础。方法利用瞬时转染技术,在对应细胞系中,过表达、抑制miR-217,Western blot检测各实验组中DNMT1蛋白表达,并用含有miR-217野生型及突变型识别位点的DNMT1 3′UTR载体质粒分别转染293T细胞,检测相对荧光素酶活性改变。结果过表达miR-217,DNMT1表达下降;抑制miR-217,DNMT1表达增高;双荧光素酶检测实验,DNMT1-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著低于DNMT1-UTR-MUT,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在乳腺癌上皮细胞系中,miR-217对DNMT1表达具有调控作用,且miR-217通过直接作用于DNMT1 3′UTR调控DNMT1表达。
- 王璐璐刘萃萃郭腾陶然彭攸赵卫卫王玉平孙振亮冯景
- 关键词：DNMT1MCF-7MDA-MB-231
- 沙虫蛋白酶解产物抗氧化与免疫调节活性的研究被引量：7
- 2017年
- 采用复合蛋白酶对沙虫(Sipunculus nudu)进行酶解,得到沙虫蛋白酶解产物(SNPH),并对其氨基酸组成进行了分析。采用高效液相凝胶色谱法对SNPH的相对分子质量分布进行了测定。采用紫外分光光度法测定SNPH对DPPH自由基,羟基自由基、超氧阴离子的清除能力及其还原能力。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SNPH在对刀豆蛋白(Con A)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响。结果显示SNPH中必需氨基酸和疏水氨基酸含量较高,小分子肽含量较高,相对分子质量在120~1800之间的物质占85.11%。抗氧化活性实验显示SNPH对DPPH自由基,羟基自由基和超氧阴离子具有较强的清除效果,且清除率与浓度存在一定的量效关系。免疫调节活性试验表明SNPH对Con A和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞的增殖具有协同刺激作用。SNPH具有较好的抗氧化和免疫调节活性。
- 孙雪萍徐艳刘布鸣孙振亮刘新
- 关键词：沙虫酶解抗氧化免疫调节
- 黄斑海蜇蛋白酶解工艺及其生物活性的研究被引量：2
- 2015年
- 采用Alcalase对黄斑海蜇蛋白进行酶解,以水解度为指标,通过正交试验法对酶解工艺进行优化,确定了最佳酶解工艺参数为酶与底物为5%,酶解时间为4.0 h,酶解p H为8.0,酶解温度为60℃。在此条件下,水解度达到33.87%。体外生物活性测定显示,黄斑海蜇蛋白酶解产物具有较强的DPPH自由基,羟基自由基和超氧阴离子清除能力,和显著的血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性,为黄斑海蜇的开发利用提供理论依据。
- 孙振亮杨子君刘新王长云
- 关键词：酶解正交试验
- EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达及意义被引量：7
- 2015年
- 目的探讨EZH2及DNMT1在三阴性乳腺癌中的表达特点及与主要临床病理参数的关系。方法采用免疫组化SP法,检测131例三阴性乳腺癌、78例非三阴性乳腺癌及65例癌旁组织中EZH2及DNMT1的表达情况。采用多因素logistic回归分析EZH2及DNMT1阳性表达有关的因素,Spearman等级相关分析三阴性乳腺癌中EZH2及DNMT1表达的相关关系。结果 EZH2蛋白在三阴性乳腺癌组织、非三阴性乳腺癌组织和癌旁组织的阳性表达率分别为86.3%、89.7%和40.0%;DNMT1蛋白在三种组织中的阳性表达率分别为63.4%、66.6%和44.6%;两种蛋白在乳腺癌组织中的表达均高于癌旁组织(P<0.05);两种蛋白在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织间表达差异无统计学意义。在三阴性乳腺癌中,EZH2阳性表达与肿瘤组织学分级、肿瘤直径、淋巴结是否转移有关(P<0.05),DNMT1的表达与肿瘤组织学分级、淋巴结是否转移有关(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,肿瘤组织学分级为影响EZH2及DNMT1表达的最主要因素;三阴性乳腺癌中DNMT1与EZH2的表达呈正相关(r=0.34,P<0.01)。结论 EZH2与DNMT1的高表达与三阴性乳腺癌的分化、生长、转移有关,且两者在三阴性乳腺癌中的表达呈正相关,其联合检测可能对三阴性乳腺癌的预后判断更有价值。
- 武萍萍陶然彭攸赵卫卫刘萃萃王璐璐胡朝晖王玉平孙振亮冯景
- 关键词：DNA甲基转移酶1
- 分离鉴定人胃癌HGC-27细胞系中的肿瘤干细胞
- 2014年
- 目的 分析人胃癌细胞系HGC-27细胞系中肿瘤干细胞相关的侧群细胞（SP细胞）的比例,分选出相关的SP细胞和非侧群细胞（NSP细胞）,检测相关的SP细胞是否具有干细胞的生物学特性。方法 制备人胃癌细胞系HGC-27细胞中细胞悬液,实验组的人胃癌细胞株中加入Hoechst 33342至终浓度为5μg/mL,对照组的人胃癌细胞株中加入Hoechst 33342后再加入维拉帕米至终浓度为50μg/mL。应用流式细胞仪分选出人胃癌细胞系HGC-27细胞中相关的SP细胞,并进行分析。采用克隆形成实验和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测相关的SP细胞和NSP细胞增殖能力差异。利用磁珠筛选实验方法测定胃癌细胞系HGC-27细胞中肿瘤干细胞表面特异性抗体。结果 实验组HGC-27细胞中SP细胞亚群所占比例为（6.00±0.05）%,显著高于对照组的（0.10±0.01）%（P〈0.05）。选用2×10^8个对数生长期细胞,经流式细胞仪分选出SP细胞7.5×10^5个和NSP细胞8.5×10^7个。分选后经低血清培养液（2%胎牛血清）培养后,SP细胞的密度较NSP细胞低,且细胞形态也不同。培养第1~7天SP细胞的光密度值分别为0.13±0.03、0.18±0.04、0.33±0.04、0.41±0.04、0.47±0.07、0.51±0.06、0.55±0.06,NSP细胞的光密度值分别为0.13±0.02、0.16±0.04、0.20±0.04、0.24±0.03、0.28±0.05、0.30±0.06、0.31±0.07,培养第3、4、5、6、7天,SP细胞的光密度值均显著高于NSP细胞（P值均〈0.05）。磁珠筛选后经流式细胞仪检测,SP细胞和NSP细胞表面抗原CD133分别为（89.94±28.19）%、（38.22±16.45）%,SP细胞和NSP细胞表面抗原CD44分别为（86.99±23.59）%、（46.09±13.60）%。结论 人胃癌细胞系HGC-27细胞中存在相关的SP细胞,应用流式细胞仪可分选出相关的SP细胞,采用克隆形成实验和MTT法检测相关的SP细胞和NSP细胞增殖能力有差异。人胃癌细胞系HGC-27细胞中相关的SP细胞可能具有肿瘤干细胞特性�
- 高钢龙张学利孙振亮刘文勇张萍叶冬霞
- 关键词：胃癌肿瘤干细胞
