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乙型肝炎病毒调节Pasha启动子活性的初步研究: 2012年; 目的:研究乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)对microRNA形成相关因子Pasha表达的调控,并对其作用机制进行初步探讨。方法:用RT-PCR,Western blot的方法检测HepG2细胞及稳定表达HBV的HepG2-H7细胞中Pasha的表达差异。构建Pasha启动子的萤火虫荧光素酶报告质粒,分别转染HepG2细胞及HepG2-H7细胞,检测HBV对Pasha启动子的影响。将Pasha启动子质粒与HBV 4种蛋白的真核表达质粒共转染HepG2细胞,寻找对启动子影响较大的HBV蛋白。结果:RT-PCR和Western blot的结果显示Pasha在HepG2-H7细胞中的表达较HepG2细胞明显下降。萤火虫荧光素酶活性分析显示HBV能抑制Pasha启动子的活性,且HBx和HBs蛋白对其影响较大。结论:HBV蛋白可以通过抑制Pasha启动子活性调节其在HepG2-H7细胞中的表达。; 任敏曲嘉琳秦栋栋李凯黄爱龙汤华; 关键词：乙型肝炎病毒启动子基因表达与调控

精胺对Azin1基因敲除小鼠体内Atp8a1基因表达调控的研究: 2011年; 目的研究精胺对Azin1基因敲除小鼠体内Atp8a1基因表达的影响,并对其作用机理进行初步的探讨.方法利用Real-time PCR检测正常小鼠和Azin1基因敲除小鼠体内Atp8a1基因的在mRNA水平上的差异表达情况;构建Atp8a1基因的启动子虫荧光素酶报告质粒;将启动子重组质粒转染NTH3T3细胞后,在细胞培养液中加入精胺,检测精胺对启动子活性的影响.结果 Atp8a1基因在Azin1基因敲除小鼠体内的表达量明显增加;精胺能够增强Atp8a1的启动子活性.结论精胺能够通过增强Atp8a1的启动子活性而增强其在Ain1基因敲除小鼠体内转录水平的表达.; 王李英田园园张磊秦栋栋李凯曲嘉琳汤华; 关键词：多胺启动子基因敲除

精胺对Nup98基因的调控研究: 2011年; 利用基因芯片比较鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织的表达差异;高效液相色谱法测定鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠和正常小鼠肝组织中的精胺含量;构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒;脂质体Lipofectamine 2000TM转染小鼠细胞(NIH3T3),在含有精胺或正常培养条件下,测定虫荧光素酶活性。结果显示,Nup98基因在鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织表达增强;鸟氨酸脱羧酶抑制子基因敲除小鼠肝组织中,精胺含量增高;成功构建Nup98的启动子-虫荧光素酶报告基因质粒pGL3-Nup98-P;精胺能在体外培养的条件下,增强虫荧光素酶的活性。这些结果证明精胺能激活Nup98基因的启动子活性,增强其在NIH3T3细胞中的表达。; 张磊万涛田圆圆王李英李凯秦栋栋曲嘉琳汤华; 关键词：精胺

腐胺对小鼠成纤维细胞中Atp8a1基因表达的影响: 2011年; 目的:研究腐胺对小鼠成纤维细胞中Atp8a1基因表达的影响,初步探讨其作用机制。方法:用基因芯片和Real-timePCR检测正常小鼠和Azin1(Antizyme inhibitor 1)基因敲除小鼠肝脏组织中Atp8a1基因的在mRNA水平上的表达;构建Atp8a1基因启动子的虫荧光素酶报告质粒pGL3-Atp8a1-P;将重组质粒转染NTH3T3成纤维细胞中,分别在含有4μg/ml腐胺和不含腐胺的条件下,用双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶活性。结果:在含有腐胺的培养条件下,转染Atp8a1基因启动子虫荧光素酶报告质粒的细胞虫荧光素酶的活性明显改变。结论:腐胺能够抑制Atp8a1基因启动子活性而降低其在NIH3T3成纤维细胞中的表达。; 万涛李朝幸田园园王李英秦栋栋李凯曲嘉琳汤华; 关键词：腐胺启动子基因表达

含有Hygromycine抗性的稳定表达HBV的肝癌细胞系的构建: 目的:构建具有Hygromycine抗性稳定表达HBV的细胞模型。方法:1.HindⅢ单酶切pcDNA3.1-HBV质粒和pSEH-Flag质粒,得到1.3倍体的HBV片段和线性化的pSEH-Flag质粒,T4DNA连接...; 王李英李凯曲佳琳秦栋栋汤华; 文献传递

HBx及HBs调节RhoC启动子机制的研究: 2012年; 目的探讨HBx（hepatitis B virus X protein）及HBs（hepatitis B virus S protein）对RhoC启动子的作用机制，分析可能相互作用的启动子调控元件。方法构建RhoC启动子截短突变克隆，双荧光素酶报告分析系统（the dual-luciferase reporter assay system）检测RhoC启动子相对荧光素酶活性，通过分析启动子相对活性变化进而筛寻到起调控作用的启动子区段。过表达Ets-1转录因子，检测RhoC启动子相对荧光素酶活性。结果①成功构建了5个RhoC启动子截短变异克隆。②分别在HepG2细胞和HepG2.2．15细胞中验证了RhoC截短变异启动子活性，确定了起关键作用的启动子区段（-491bp～-320bp、-124bp～-58bp）。③HepG2细胞中分别过表达HBx及HBs，发现启动子区段-491bp～-320bp及-187bp～-124bp可以被HBx及HBs调控。④文献检索结合软件分析这些启动子区段序列，找到了高度相关的转录因子Ets-1、NF-κB、Sp1等。⑤荧光素酶检测和Real-time PCR初步验证了转录因子Ets-1对RhoC的调控作用。结论HBx及HBs可能通过Ets-1等转录因子调控RhoC启动子进而上调RhoC启动子活性。; 秦栋栋李凯曲嘉琳王森邹程程盛艳蕊汤华; 关键词：HBX HBS RHOC 启动子

HBx和HBs通过转录因子Ets-1上调RhoC基因的表达: 目的：　　探讨HBV上调RhoC表达的分子机制，揭示一种新的HBV导致HCC侵袭的机制，为HCC治疗提供一种新的方法。　　方法：　　1.生物信息学方法分析RhoC启动子5'启动子序列，找到与RhoC启动子序列高度结合的转...; 秦栋栋; 关键词：HBX蛋白转录因子 RHOC基因

HBV对DGCR8基因表达的调控研究: 目的:研究HBV对miRNA形成相关因子DGCR8表达的调控作用,并对其作用机制做初步探讨。方法:1.分别提取HepG2和HepG2.2.15细胞的总RNA,用RT-PCR和荧光定量PCR方法检测DGCR8在两种细胞中转...; 任敏王李英曲嘉琳李凯秦栋栋黄爱龙汤华; 文献传递

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秦栋栋